Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie an Lipidvesikeln auf oxidiertem Silizium:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
MEMBRANSYSTEM
UND
MESSIDEE
.
1
1.2
FLUORESZENZ-KORRELATIONS-SPEKTROSKOPY
(FCS)
ALS
MESSMETHODE
.
2
2.
DIFFUSION
UND
DRIFT
IN
MEMBRANEN
.
5
2.1
DIFFUSION
IN
EIN
UND
MEHRDIMENSIONALEN
EINPHASENSYSTEMEN
.
5
2.1.1
EINSTEIN-RELATION
.
5
2.1.2
FICKSCHE
GESETZE
.
5
2.2
DRIFT
EINER
KOMPONENTE
.
7
2.3
ANOMALE
DIFFUSION
.
7
2.3.1
'RANDOM
WALK'
ZUR
BESCHREIBUNG
DER
MOLEKUELBEWEGUNG
.
7
2.3.2
UEBERGANG
ZUR
ANOMALEN
DIFFUSION
.
8
2.4
TRANSLATIONSDIFFUSION
IN
MEMBRANEN
.
9
2.4.1
DIFFUSION
IN
FREIEN
MEMBRANEN
.
9
2.4.2
DIFFUSION
IN
GESTUETZTEN
MEMBRANEN
.
11
3.
FLUORESZENZ-KORRELATIONS-SPEKTROSKOPIE
(FCS)
.
14
3.1
GRUNDPRINZIP
DER
FCS
.
14
3.2
DIFFUSION
EINER
KOMPONENTE
.
16
3.3
DRIFT
EINER
KOMPONENTE
.
19
3.4
TRIPLETT
UND
ANDERE
KONKURRIERENDE
ANTEILE
.
19
3.4.1
TRIPLETT
.
20
3.4.2
HINTERGRUND
.
21
3.4.3
WEITERE
KONKURRIERENDE
ANTEILE
.
21
3.5
NORMALE
UND
ANOMALE
DIFFUSION
IN
2D-SYSTEMEN
.
22
3.6
MEHRKOMPONENTENSYSTEME
.
22
3.7
BESCHREIBUNG
DES
KONFOKALEN
VOLUMENS
IN
DER
FCS
.
24
3.7.1
STANDARDBESCHREIBUNG
FUER
IDEALE
OBJEKTIV-PROBEN-SYSTEME
.
24
3.7.2
ERWEITERTE
BETRACHTUNG
VON
IDEALEN
OBJEKTIV-PROBEN-SYSTEMEN
.
28
3.7.3
FOKUSBESCHREIBUNG
VOR
SPIEGELNDEN
FLAECHEN
.
34
3.7.4
MODIFIKATIONEN
FUER
NICHTIDEALE
OPTISCHE
SCHICHTSYSTEME
.
36
3.7.5
NUMERIK
DER
BERECHNUNG
.
37
4.
EXPERIMENTELLER
AUFBAU
.
39
4.1
FLUORESZENZFARBSTOFFE
.
39
4.1.1
FARBSTOFFE
FUER
MESSUNGEN
IN
WAESSRIGER
LOESUNG
.
39
4.1.2
LIPIDARTIGE
UND
LIPIDGEBUNDENE
FARBSTOFFE
.
40
4.1.3
PROTEINGEBUNDENE
FARBSTOFFE
.
41
4.2
ERSTER
MESSAUFBAU
FUER
OPTIMIERTE
LONG-DLSTANCE-MESSUNGEN
.
43
4.3
ZWEITER
MESSAUFBAU
FUER
OPTIMIERTE
PROBENVISUALISIERUNG
.
44
4.4
VORSTELLUNG
DER
OPTISCHEN
EINZELKOMPONENTEN
.
46
4.4.1
ARGON-IONEN-LASER
ALS
LICHTQUELLE
UND
WEITERER
LICHTWEG
.
46
4.4.2
FILTERCHARAKTERISIERUNG
.
47
4.4.3
OBJEKTIVE
ZUR
BEOBACHTUNG
UND
MESSUNG
.
48
4.4.4
SCHRITTMOTOREN
ZUR
POSITIONIERUNG
.
49
4.4.5
TEMPERATURREGELUNG
MIT
PELTIERELEMENT
.
50
4.4.6
CCD-KAMERA
UND
FRAMEGRABBER
ZUR
BEOBACHTUNG
.
50
4.4.7
EINHEIT
ZUR
PINHOLE
UND
DETEKTORJUSTAGE
.
50
4.4.8
AVALANCHE
PHOTODIODE
(APD)
ALS
EINZELPHOTONENDETEKTOR
.
51
4.5
VERARBEITUNG
DER
MESSDATEN
.
52
4.5.1
COMPUTER
HARD
UND
SOFTWARE
.
52
4.5.2
KORRELATORKARTE
ALS
AUFNAHMEEINHEIT
.
52
4.5.3
SOFTWARE
ZUR
STEUERUNG
UND
MESSUNG
.
53
4.5.4
SOFTWARE
ZUR
MESSDATENANALYSE
.
54
4.6
MESSVORBEREITUNGEN
UND
-ABLAUF
.
56
5.
HERSTELLUNG
VON
RIESENVESIKELN
.
58
5.1
HERSTELLUNG
DER
ITO/QUARZ-OBJEKTTRAEGER
.
58
5.2
SCHWELLEN
DER
RIESENVESIKEL
.
59
5.2.1
LIPIDMISCHUNG
.
59
5.2.2
SCHWELLEN
UND
ABLOESEN
MITTELS
WECHSELSPANNUNG
.
60
5.2.3
UMSETZEN
DER
RIESENVESIKEL
.
60
5.2.4
REINIGUNG
UND
BESCHICHTUNG
DER
DECKGLAESER
UND
SILIZIUMCHIPS
.
61
5.3
EIGENSCHAFTEN
DER
RIESENVESIKEL
.
62
5.3.1
KBNTAKTBESCHREIBUNG
(ADHAESION)
.
62
5.3.2
ELEKTRISCHE
EIGENSCHAFTEN
ALS
NACHWEIS
DER
FUNKTIONSFAHIGKEIT
.
64
5.3.3
ERSTE
TEST-DIFFUSIONSMESSUNGEN
MITTELS
FLUORESCENCE-RECOVERY-AFTER
PHOTOBLEACHING
(FRAP)
.
67
6.
FCS-CHARAKTERISIERUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
.
71
6.1
WARUM
FCS?
.
71
6.2
FREIER
FARBSTOFF
IN
WAESSRIGER
LOESUNG
.
72
II
FCS
AN
LIPWVEAIKELN
AUF
AODTERTEFN
SILIZIUM
6.3
LATEXKUGELN
ALS
TESTSYSTEM
.
76
6.4
UEBERPRUEFUNG
DER
LIPIDVESIKELELGENSCHAFTEN
AUF
EINZELMOLEKUELNIVEAU
.
78
6.4.1
DURCHFUEHRUNG
DER
VESIKELMESSUNGEN
.
78
6.4.2
"SLOWEST'-LASERSCAN-MIKROSKOP
.
79
6.4.3
FORM
UND
KONTAKTBESCHREIBUNG
.
80
6.4.4
FLIC-ABSTANDSMESSUNG
.
81
6.4.5
MESSABLAUF
FUER
FCS-MESSUNGEN
AN
VESIKELN
.
84
7.
FCS
AN
VESIKELN
-
MESSUNG
UND
DISKUSSION
.
86
7.1
FARBSTOFFTRAEGER
IN
DER
FREIEN
LIPIDMEMBRAN
.
86
7.2
DIREKTER
VERGLEICH
DER
FREIEN
MEMBRAN
ZUR
KONTAKTMEMBRAN
.
88
7.2.1
BEISPIELAUSWERTUNG
FUER
TRITC-DHPE
AUF
CHIP
MIT
100NM
OXIDDICKE
.
88
7.2.2
BEISPIELAUSWERTUNG
FUER
TRITC-DHPE
AUF
CHIP
MIT
2,
73PM
OXIDDICKE
.
94
7.2.3
AUSWIRKUNGEN
DER
SUBSTRATOBERFLAECHE
.
95
7.2.4
AUSWIRKUNGEN
DER
LIPIDZUSAMMENSETZUNG
.
96
7.2.5
MEMBRANFLECKEN
GEPLATZTER
VESIKEL
.
98
7.3
SULFORHODAMIN
G-GRAMIDDIN
C
.
99
7.3.1
BEISPIELAUSWERTUNG
FUER
SRH-GRAMC
AUF
CHIP
MIT
LOONM
OXIDDICKE
.
99
7.3.2
VERGLEICH
OBER
UND
UNTERSEITE
FUER
SRH-GRAMC
.
102
7.3.3
PROBLEM
DER
POSITIONIERUNG
.
103
7.4
FUNKTIONSUNTERSUCHUNG
AM
FLLP-FLOP-DESLGNERPROTEIN
LAH
.
105
8.
AUSBLICK
.
107
ANHANG
A
MESSUNGEN
AN
HEK293-ZELLEN
.
109
ANHANG
B
NICHT
GAENGIGE
ABKUERZUNGEN
.
111
LITERATURVERZEICHNIS
.
112
III |
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