Die Bedeutung von Mastoparan- und Pertussis-Toxin-sensitiven G-Proteinen für die Regulation des renalen basolateralen Transportsystems für organische Anionen:
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Autor: Allofs, Ursula
Jahr: 1999
Inhaltsverzeichnis____________________________________________________________Seite
Inhaltsverzeichnis
Abkiirzungsverzeichnis
1. Einleitung______
1.1. Bedeutung des Anionen-Transportsystems_
1.2. Zielsetzung____________________________
2. Theoretische Grundlagen___________________________ 11
2.1. Makroskopische Anatomie der Niere_________________________11
2.2. Mikroskopische Anatomie der Niere__________________________12
2.3. GefaBversorgung der Niere_________________________________16
2.4. Physiologic der Niere______________________________________17
2.4.1. Aufgabe der Niere_______________________________________17
2.4.2. Funktion der einzelnen Nephronabschrirtte____________________18
2.4.3. Entwicklung des Anhnentransportmodells____________________21
2.4.4. Modell des organischen Anionentransportsystems______________23
2.5. G-Proteine_______________________________________________24
2.5.1. Physmtogiscrm Former), Lokalisation und Aufgaben von
G-Proteinen_____________________________________________25
2.5.2. Mechanismus der Akthnervng von Protemen_________________27
2.5.3. Spezffiat der G-Proteine__________________________________29
2.5.4. Interaktion der G-Protmne mil intrazeltutaren Signattragem_______31
2.5.5. Mastoparan, ein G,Stimulator______________________________34
2.5.5.1. Struktur, Bind wig und AkSvierung von Mastoparan__________35
Z5.fi. Pertussis-Toxin, em GrlnhiMor_____________________________36
2.5.6.1. Struktur, Penetratwn und Aktiviening des Pertussis-Toxins__ 36
2.5.6^. AW -Ra»osyliening^__________________________________37
Inhaltsverzeichnis__________________________________________________________.__Spite
3. Material und Methoden_____________________38
3.1. Bemerkung zu der benutzten Methode_________________________38
3.2. Isolierung proximater nicht perfundierter Tubuli_________________39
3.2.1. Versuchstierauswahl______________________________________39
3.2.2. Versuchsaufbau_________________________________________40
3.2.3. Versuchsablauf__________________________________________42
3.2.3.1. Preparation_________________________________________42
3.2.3.2. Transfer der Tubuli in die Inkubationskammer______________43
3.2.3.3. Inkubation, Messung, Entnahme und Spoiling der Tubuli______43
3.2.3.4. Denaturierung der Tubuli______________________________44
3.2.3.5. Transfer der Tubuli in die Szintillationsgefa e_______________45
3.2.3.6. Messung der Radioaktivitat________________45
3.3. Versuche zur 3H-PAH-Aufnahme ___________________46
3.3.f. Messung der basalen 3H-PAH-Aufnahrm __________________46
3.3.2. Henurwng der 3H-PAH-Au1hahmedurch Zugabe von
unmarkiertem PAH_______________________________________ 46
33.3. Messung der 3H-PAH-Aufnahme durch Zugabe von Mastoparan 47
3.3.4. Messung der3H-PAH-Aufnahrm durch Zugabe von Pertussis-
Toxin_________________________________,_________________ 47
3A. Versuche zur 14C-GUitarat-Aufnahm«__________ __________48
3AA. Messung der basalen 14C-Glutarat-Aufnahme __________48
3.4.2. Hemmung der uO ^tamt-Aufnanme durch unmarkiertesGlutarat 48
3.4.3. Hemming der 14C-Glutarat^ufhahme dutch Masfoparan_________48
3.5. Gewahriefetung tonstatitef Versurtisbedlnflwpw 49
3.6. Berechnung der Akkurmriaaonsfafctomn ^
3.7. Verwendeto Losungen und ChemikalJen________________________ 53
3.7-f. RrSparafioo-osung______________________ - - .¦ :. . . 53
3.7.2. Standardinkubationsidsung__________________.. ¦ : ... ,- _ 54
3.7.3. RadionuMide_______________________________-. . ¦ . :: , ¦. •,, .. . 54
^
3.7.3._
3.7.4. CherrtkaKenbezug_______________________---—-__-____ 58
tnhaltsvefzeichnis____________________________________________________________Seite
3.8 Statistische Auswertung_____________________________________57
3.8.1. Statistische Signifikanz____________________________________57
3.8.2. Unverbundener t-Test_____________________________________58
3.8.3. Varianzanalyse__________________________________________58
4. Ergebnisse_______________________________________ 60
4.1. 3H-PAH-Versuche__________________________________________60
4.1.1. Basale3H-PAH-Aufnahme________________________________60
4.1.2. EinfluR verschiedener Konzentrationen von nicht markierter PAH
aufdie tubulare 3H-PAH-Aufnahme__________________________62
4.1.3. EinfluR verschiedener Konzentrationen von Mastoparan auf
die tubulare 3H-PAH-Aufhahme ___________________________64
4.1 A. EinfluR von Pertussis-Toxin (1OOng/ml) aufdie tubulare 3H-PAH
Aufnahme______________________________________________66
4.2. 14C-Glutarat-Versuche______________________________________68
4.2.1. Basale 14C-Glutarat-Aufnahme______________________________68
4.2.2. EinfluR verschiedener Konzentrationen von nicht markiertem
Glutarat aufdie tubulare uC-Glutarat-Aufhahme________________69
4.2.3. EinfluR verschiedener Konzentrationen von Mastoparan aufdie
tubulare 14C-Glutarat-Aufnahme_____________________________71
5. Diskussion_______________________________________74
5.1. AbgrenzungderbenutztenMettiodegegnuberanderenMethoden
air Untersuchung ctes Anionerrtransporters___________________ 74
5.Z Ergebnisse______________________________________________ 76
6. Zusammenfassung_________________________________82
7. Summary__________________________ ,-_________83.
8. Literaturverzeichnis________________________________85
9. Abbiktungsverzeichnis______________________________97
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