Anwendung des Westernblots zur Differenzierung HSV-typenspezifischer Serumantikörper mit besonderer Berücksichtigung der HSV-2-Infektion:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1. HINLEITUNG. 1
1.1 DAS HERPES SIMPLEX-VIRUS UND SEINE GLYKOPROTEINE. 1
1 2 DIE INFEKTION MIT DEM HSV. 3
13 EPIDEMIOLOGIE DER HSV-LNFEKTION. 7
14 IMMUNREAKTIONEN NACH HSV-LNFEKTION. 10
1.5 LABORDIAGNOSTIK DER HSV-LNFEKTION. 11
1.6 THERAPIE UND PROPHYLAXE DER HSV-LNFEKTION. 13
2. AUFGABENSTELLUNG. 17
3. MATERIAL UND METHODEN. 18
3.1 GETESTETE SEREN UND VERWENDETE MONOKLONALE ANTIKOERPER. 18
3.1.1 SERUMPROBEN. 18
3.1.2 MONOKLONALE ANTIKOERPER. 19
3.2 ZELLKULTUR. 20
3.3 VIRUS-STAEMME. 20
3.4 PRAEPARATION DER VIRUSPROTEINE. 20
3.4.1 STANDARD-PRAEPARATION UND IHRE VARIATIONEN. 20
3.4.2 MODIFIKATION DER VIRUSPROTEINPRAEPARATION IN ANLEHNUNG AN
RABKNAW ET AL.
(1992). 22
3.5 WESTEMBLOT-TECBNIK UND IMMUNOBLOT-HERSTELLUNG. 23
3.5.1 SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE ZUR AUFTRENNUNG DENATURIERTER
PROTEINE. 23
3.5.2 ELEKTROTRANSFER DER ELEKTROPHORETISCH AUFGETRENNTEN VIRUSPROTEINE
IN EINE
NITROCELLULOSE-MEMBRAN UND STRIP-HERSTELLUNG. 25
3.5.3 ANFAERBEN DES TRENNGELS, ENTFAERBUNG, SWELLING UND GELTROCKNUNG. 26
3.5.4 IMMUNDETEKTION ZUM NACHWEIS VON SERUMANTIKOERPEM GEGEN
HSV-ANTIGENE. 27
3 5.5 SYSTEMATISIERUNG DER IMMUNOBLOT-BANDEN. 29
3.5.5 1 DARSTELLUNG VON REFERENZBANDEN MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN. 29
3.5.5 2 MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG DER PROTEINE. 29
3.6 ELISA-TESTE. 30
3.7 INDIREKTER FLUORESZENZ-ANTIKOERPER-TEST (IFAT). 31
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.8 REZEPTUREN UND ZUSAMMENSETZUNG DER VERWENDETEN LOESUNGEN. 32
4. ERGEBNISSE. 36
4 1 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER ANTIGENPRAEPARATIONEN. 36
4 2 EINSCHAETZUNG DER QUALITAET DER HSV-I- BZW HSV-2-BLOTS DURCH
INKUBATION MIT
HSV-ANTIKOERPER-POSITIVEN SEREN UND REAKTION MIT MONOKLONALEN ANTIKOERPERN
GEGEN HSV-1 UND HSV-2. 36
4 3 BEURTEILUNG DER VARIATIONEN DER HSV-2-A^TIGENPRAEPARATION
HINSICHTLICH IHRER
EIGNUNG IM WESTEMBLOT. 38
4 4 WESTEMBLOT UNTER BESONDERER BERUECKSICHTIGUNG NICHT-INFIZIERTER
RTP-ZELLEN. 42
4 5 MODIFIKATION DER ANTIGENPRAEPARATION NACH RABENAU ET AL (1992) IM
VERGLEICH
ZUR HERKOEMMLICHEN METHODE IN DER PROTEINDARSTELLUNG. 44
4 6 VERGLEICH DER ANTIGENPRAEPARATION NACH
RABENAU ET AL. (1992) UND DER
HERKOEMMLICHEN METHODE DURCH REAKTION DER BLOTS MIT VERSCHIEDENEN MONO
KLONALEN ANTIKOERPERN HINSICHTLICH HSV-1- UND HSV-2-SPEZIFISCHER BANDEN.
44
4.7 VERWENDUNG WEITERER MONOKLONALER ANTIKOERPER GEGEN GLYKOPROTEINE DES
HSV. 47
4 8 INTERPRETATION DES BANDENMUSTERS DER IMMUNDETEKTION, VERSUCH EINER
ZUORDNUNG ZU DEN PROTEINEN DES HSV. 47
4.8 1 VERGLEICH DER BILDER VON COOMASSIE-BIAU-FAERBUNG UND WESTEMBLOT. 47
4.8.2 BESTIMMUNG DES MOLEKULARGEWICHTS DER DETEKTIERTEN VIRUSPROTEINE
ANHAND DER
MOLEKULARGEWICHTSEICHKURVE UND DEREN BENENNUNG. 48
4.9 EINFLUSS EINER ERHOEHTEN ANTIGEN- UND/ ODER SERUMKONZENTRATION AUF DIE
EMPFINDLICHKEIT DES WESTERNBLOTS. 52
4.10 NACHWEIS VON HSV-TYPENSPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN IM WESTEMBLOT. 55
4 10 1 TYPISIERUNG DER HSV-ANTIKOERPER VON PATIENTEN MIT HERPES GENITALIS
IM
WESTEMBLOT. 55
4 10 2 TYPISIERUNG HSV-ANTIKOERPER-POSITIVER SEREN IM VIR-ELISA UND
WESTEMBLOT. 56
4.10.3 UNTERSUCHUNG VON SEREN MIT IM ELISA NACHGEWIESENEN
ANTI-GG2-ANTIKOERPEM
IM WESTEMBLOT. 61
4.10.4 VERGLEICH DER REAKTIVITAET VON SERUMPROBEN IM HSV-2 ELISA-GULL UND
HSV-2
ELISA CAPTIA SELECT SOWIE IM HSV-2 WESTEMBLOT. 62
5. DISKUSSION. 66
6. ZUSAMMENFASSUNG. 76
7. LITERATURVERZEICHNIS. 79
SELBSTAENDIGKEITSERKLAERUNG
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF
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