Studien zur Differenzierung und Funktion verschiedener T-Helferzellsubpopulationen:
Gespeichert in:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I EINLEITUNG. 1
1 DAS THL/TH2-KONZEPT. 1
2 DIE BEDEUTUNG VON THL UND TH2-ZELLEN
IN VIVO. 2
3 DIE REGULATION DER THL/TH2-DIFFERENZIERUNG. 4
4 MANIPULATION DER TH-ZELLANTWORTEN. 8
5 ZIELSETZUNG. 14
II MATERIAL UND METHODEN
. 15
1 TIERE. 15
2 MATERIALIEN. 15
2.1 LABORGERAETE. 15
2.2 PLASTIKWAREN. 16
2.3 SPEZIELLE MATERIALIEN FUER DIE
IN V/VO-EXPERIMENTE. 17
2.4 KULTURMEDIEN. 17
2.5 PUFFER. 18
2.6 REAGENZIEN. 19
2.7 CYTOKINE. 21
2.8 ANTIKOERPER. 22
2.8.1 ANTIKOERPER FUER DIE SEPARATION VON ZELLEN. 22
2.8.2 ANTIKOERPER FUER DIE
IN VI/RO-STIMULATION VON ZELLEN. 23
2.8.3 ANTIKOERPER ZUR
IN VIVO-APPLIKATION. 23
2.8.4 ANTIKOERPER FUER ELISA. 24
2.8.5 ANTIKOERPER UND REAGENZIEN FUER FLUORESZENZFLRBUNGEN. 25
2.8.6 BIOTINYLIERUNG VON ANTIKOERPERN. 26
2.8.7 FITC-MARKIERUNG VON ANTIKOERPERN. 27
2.8.8 DIGOXIGENIN-KOPPLUNG AN ANTIKOERPER. 28
2.9 ZELLEN. 28
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
3 METHODEN DA- ZELLKULTUR. 28
3.1 BESTIMMUNG DER LEBENDZELLZAHL. 28
3.2 ZELLPRAEPARATIONEN. 29
3.2.1 GEWINNUNG VON MILZZELLEN. 29
3.2.2 SEPARATION VON NAIVEN CD47CD62L"* T-ZELLEN. 30
3.2.3 SEPARATION VON IFN-Y-PRODUZIERENDEN T-ZELLEN. 31
3.2.4 SEPARATION VON DENDRITISCHEN ZELLEN AUS MILZZELLEN. 33
3.3 POLYKLONALE IN V/FRO-STIMULATION VON NAIVEN CD47CD62L1"-1 T-ZELLEN
FUER IN VITRO-
DIFFERENZIERUNGSSTUDIEN. 34
3.4 POLYKLONALE IN V/FRO-STIMULATION VON NAIVEN CD47CD62L"* T-ZELLEN FUER
DEN IN V/VO-TRANSFER 35
3.5 ANTIGENSPEZIFISCHE STIMULATION VON NAIVEN CD47CD62L"* T-ZELLEN. 35
3.6 ANTIGENSPEZIFISCHE
EX V/VO-STIMULATION VON T-ZELLEN AUS DEM LUNGENGEWEBE BZW. AUS DEN
LUNGENLYMPHKNOTEN. 36
4 FACSCAN-ANALYSEN. 36
4.1 FLUORESZENZFAERBUNG VON ZELLOBERFLAECHENANTIGENEN. 37
4.2 INTRAZELLULAERE DOPPELFLUORESZENZFAERBUNG (IFN-Y/IL4). 37
5. SAUMGEWINNUNG. 38
6. ELISA (ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY). 39
6.1 ELISA ZUM NACHWEIS VON IL-2, IL-4, IL-5, IL-9 UND IFN-Y. 39
6.2 ELISA ZUM NACHWEIS VON GESAMT-IGE. 40
7 EXPAIMENTALMODELL DA ALLAGEN-INDUZIERTEN EOSINOPHILIE. 41
7.1 APPLIKATION VON ALLAGEN. 41
7.2 BRONCHOALVEOLAR LAVAGE. 42
7.3 HERSTELLUNG VON CYTOZENTRIFUEGATIONSPRAEPARATEN UND
DIFFERENTIALFAERBUNG DA BRONCHOALVEOLAR
LAVAGE-ZELLEN. 42
INHALTSVERZEICHNIS
III ERGEBNISSE. 44
1 DER ALTERNATIVE WEG DER THL -DIFFERENZIERUNG. 44
1.1
TT .-4 INDUZIERT IN GEGENWART VON TGF-SS DIE ENTWICKLUNG VON THL-ZELLEN
AUS OOLVKLONAL
AKTIVIERTEN NAIVEN TH-ZELLEA
. 46
1.1.1 NAIVE TH-ZELLEN DIFFERENZIEREN UNTER DEM EINFLUSS VON IL-4 UND
TGF-SS ZU EINER
MISCHPOPULATION VON THL - UND TH2-ZELLEN. 46
1.1.2 DIE ALTERNATIVE THL-DIFFERENZIERUNG DURCH IL-4 UND TGF-SS WIRD
DURCH IL-12 ADDITIV
VERSTAERKT. 50
1.1.3 DER EINFLUSS VON IL-2 AUF DIE ALTERNATIVE THL-DIFFERENZIERUNG. 51
1.1.3.1 DIE INHIBITION DER PRIMAEREN IL-2-PRODUKTION DURCH TGF-SS WIRD
DURCH IL-4 KOMPENSIERT. 51
1.1.3.2 DIE THL-INDUZIERENDE WIRKUNG VON IL-4 IN KOMBINATION MIT TGF-SS
IST ABHAENGIG VON
ENDOGENEM IL-2. 52
1.1.4 ZUSAMMENFASSUNG. 55
1.2
TT ,-4 INDUZIERT IN GEGENWART VON TGF-SS DIE ENTWICKLUNG VON THL-ZELLEN
AUS ANTIGENSPEZIFISCH
AKTIVIERTEN NAIVEN TH-ZELLEA
. 56
1.2.1 NAIVE OVA-PEPTID
323
-
339
-SPEZIFISCHE TH-ZELLEN AUS TZR-TRANSGENEN MAEUSEN DIFFERENZIEREN
UNTER DEM EINFLUSS VON IL-4 UND TGF-SS ZU THL -ZELLEN. 57
1.2.2 DIE INDUKTION VON ANTIGENSPEZIFISCHEN THL-ZELLEN DURCH IL-4 UND
TGF-SS IST UNABHAENGIG VON
IL-12.,. 58
1.2.3 DIE INDUKTION VON ANTIGENSPEZIFISCHEN THL-ZELLEN DURCH IL-4 UND
TGF-SS IST ABHAENGIG VON
IFN-Y UND IL-2. 60
1.2.4 ZUSAMMENFASSUNG. 61
2 REGULATION EINER ALLERGEN (OVALBUMIN)-INDUZIERTEN EOSINOPHILIE DURCH
VERSCHIEDENE
TH-ZEUSUBPOPULATIONEN. 62
2.1 DER EINFLUSS VERSCHIEDENER TH-ZELLSUBOODULATIONEN AUF DIE INDUKTION
EINER EOSINOPHILIE. 62
2.1.1 DAS MODELL DA OVALBUMIN-INDUZIERTEN EOSINOPHILIE. 62
2.1.2 DA EINFLUSS VON KONVENTIONELLEN THL- UND TH2-ZELLEN AUF DIE
INDUKTION EINER EOSINOPHILIE. 63
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.3 DER EINFLUSS VON ALTERNATIV, IN GEGENWART VON IL-4 UND TGF-SS,
GENERIERTEN THL -ZELLEN AUF DIE
INDUKTION EINER EOSINOPHILIE. 64
2.1.4 ZUSAMMENFASSUNG. 69
2.2
INHIBITIONSMECHANISMCN EINER TH2-VCNNITTELTCN. DURCH OVALBUMIN
INDUZIERT! EOSINOPHILIE. 70
2.2.1 DIE BEDEUTUNG VON IL-9 BEI DER INDUKTION EINER TH2-VERMITTELTEN
EOSINOPHILIE. 70
2.2.2 DER EINFLUSS VON KONVENTIONELLEN THL -ZELLEN AUF DIE
TH2-VERMITTELTE EOSINOPHILIE. 71
2.2.2.1 KONVENTIONELLE THL-ZELLEN INHIBIEREN DIE TH2-VERMITTELTE
EOSINOPHILIE. 71
2.2.2.2 DIE INHIBITION DER TH2-VERMITTELTEN EOSINOPHILIE DURCH
KONVENTIONELLE THL -ZELLEN IST ABHAENGIG
VONIL-12. 76
2.2.3 INDUKTION ORALER TOLERANZ IM MODELL DER TH2-VERMITTELTEN
EOSINOPHILIE. 78
2.2.4 DIE ROLLE VON TH2-ZELLEN BEI REINDUKTION EINER EOSINOPHILIE.
82
2.2.5 ZUSAMMENFASSUNG. 85
IV DISKUSSION. 86
1 DIE ALTERNATIVE THL-ENTWICKLUNG ALS RESULTAT EINER KOOPERATIVEN
CYTOKINWIRKUNG. 86
2 GENERIERUNG VON ALTERNATIVEN THL-ZELLEN NACH OVALBUMIN-SPEZIFISCHER
TH-ZELLAKTIVIERUNG. 89
3 DIE
IN VRVO-RELEVANZ DER ALTERNATIVEN THL -ENTWICKLUNG. 91
4 DIE ROLLE VERSCHIEDENER TH-ZELLSUBPOPULATIONEN IN DER PATHOGENESE VON
ASTHMA. 94
4.1 DAS MODELL DES ALLERGEN-INDUZIERTEN ASTHMAS. 94
4.2 INHIBITION DER TH2-VERMITTELTEN EOSINOPHILIE DURCH THL-ZELLEN. 98
4.3 FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN DER ALTERNATIVEN THL-ZELLEN IM MODELL DES
ALLERGEN-INDUZIERTEN
ASTHMAS. 100
5 INHIBITION DER TH2-VERMITTELTEN EOSINOPHILIE DURCH INDUKTION VON
ORALER T OIERANZ. 102
V ZUSAMMENFASSUNG. 104
VI LITERATURVERZEICHNIS. 106
VH ABKUERZUNGSVERZEICHNIS. 124 |
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