Aktivierung des Transkriptionsfaktors "Nuclear factor kappaB" (NF-kappaB) in humanen Darmepithelzellen:
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| Format: | Buch |
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1,
EINLEITUNG
_
5
1.1.
IMMUNOLOGISCHE
VORGAENGE
IN
DER
DARMMUKOSA
5
1.2.
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOR
"NUCLEAR
FACTOR-KAPPAB"
(NF
K
B)
7
1.2.1.
MITGLIEDER
DER
NF-KB/REL-FAMILIE
7
1.2.2.
AUFBAU
DES
MOLEKUELS
8
1.2.2.1.
VORLAEUFER
VON
P50:
P!05
8
1.2.2.2.
ZUSAMMENSETZUNG
DES
MOLEKUELS
9
1,2.3.
AKTIVICRUNGSWEG
IN
DER
ZELLE
11
1.2.4.
I
K
B:
INHIBITOR
DES
NF
K
B
14
1.2.5.
WECHSELWIRKUNG
DER
PROTEINE
I
K
B
UND
NF
K
B
14
1.2.6.
REGULIERUNG
VON
NF
K
B
UND
I
K
B
16
1.2.7.
KONTROLLE
VON
UND
DURCH
NF
K
B
17
1.2.8.
SPEZIELLE
FUNKTION
DES
NF
K
B
18
1.2.9.
NF
K
B
UND
KRANKHEIT
19
1.3.
MOTIVATION
DER
ARBEIT UND
GEWAEHLTE
MODELLE
20
1.3.1.
DER
ANTIKOERPER
A-P65MAB
20
1.3.2.
ZELLLINIEN
20
1.3.2.1.
ETABLIERTE
KOLONKARZINOM
ZELLLINIEN
21
1.3.2.2.
PRIMAERKULTUR,
EINE
NEUE
METHODE
21
II.
FRAGESTELLUNG
_
23
III,
GERAETE.
MATERIALIEN.
CHEMIKALIEN
_
25
III.
1.
GERAETE
III.2.
MATERIALIEN
III.3.
CHEMIKALIEN
25
25
26
IV.
METHODEN
29
IV.L.
ZELLKULTUREN
29
IV.
1.1.
AUFTAUEN
VON
HT29
UND
CACO2
29
IV.
1.2.
AUSSAAT
UND
NAEHRMEDIUM
29
IV.
1.2.1.
AUSSAAT
ZUR
KULTIVIERUNG
29
IV.
1.2.2.
NAEHRMEDIUM
30
IV.
1.3.
SPLITTEN
DER
ZELLEN
30
IV.
1.4.
AUSSAAT
ZUR
STIMULIERUNG
31
IV.
1.4.1.
AUSSAAT
IN
CHAMBERSLIDES
31
IV.
1.4.2.
AUSSAAT
AUF
6
WELL-PLATES
31
IV.
1.4.3.
AUSSAAT
AUF
24-WELL-PLATES
31
IV.
1.5.
INKUBATION DER
ZELLEN
31
IV.1.5.1.
INKUBATION
MIT
IL-ISS
ODER
TNFA
31
IV.
1.5.2.
INKUBATION
ZUSAETZLICH
MIT
ALLN
UND
ALLM
31
IV.2.
INTESTINALE
EPITHELZELL
(LEZ)-ISOLATION
AUS DEM
DARM
33
IV
.2.1.
ABPRAEPARIEREN
DER
TUNICA
MUCOSA
VON
DERTUNICA
MUSCULARIS
33
IV.2.2.
LYSE
VON
MUCUS
33
IV
.2.3.
AUFTRENNEN
DER
ZELLSUSPENSION
33
IV.2.4.
BESTIMMUNG
DER
GEWONNENEN
ZELLZAHL
34
IV.3.
ANLEGEN
EINER
PRIMAERKULTUR
UND
INKUBATION
35
IV.3.1.
BESCHICHTEN
DES
MILLICELL-CM
MIT
KOLLAGEN
A
35
IV
.3.2.
AUSSAAT
DER
PRIMAERZELLEN
35
IV.3.3.
STIMULIERUNG
UND
INHIBIERUNG
36
IV.3.4.
MEDIUM
36
IV.4.
ZELLPROTEINBESTIMMUNG
37
IV.5.
IMMUNHISTOCHEMIE
38
IV.5.1.
FIXIEREN
DER
ZELLEN
UND
AVIDIN-BIOTIN-METHODE
38
IV.5.2.
DIAMINOBENZIDIN
TETRAHYDROCHLORID
(DAB)-FAERBUNG
39
IV.5.3.
BENZIDIN
DIHYDROCHLORID (BDHC)-FAERBUNG
40
IV.5.4.
AMINO
ETHYL
CARBAZOL
(AEC)-FAERBUNG
41
IV.5.5.
KONSERVIEREN
DER
PRAEPARATE
41
IV.6.
KERNEXTRAKTE
42
IV.7.
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT ASSAY
(EMSA)
43
IV.7.
1.
MARKIEREN
DER
SONDE
43
IV.7.2.
HERSTELLEN
DES
POLYACRYLAMID-GELS
43
IV.7.
3.
REINIGEN
DER
SONDE
MIT
SEPHADEXSAEULE
43
IV.7.4.
PROTEINBINDUNG
AN
DIE
SONDE
44
IV.7.5.
GEL-LAUF
44
IV.7.6.
TROCKNEN
DES
GELS
UND
AUTORADIOGRAPHIE
44
IV.8.
ELISAS
46
IV.8.
1.
GEWINNEN
DER
PROBEN
46
IV.
8.2.
ELISA
ICAM-1,
KIT
VON
R&D
SYSTEMS
46
IV.8.
3.
ELISA
IL-8
MIT
ANTIKOERPER
VON
BIOZOL
46
V.
REZEPTUREN
_
49
VI,
ERGEBNISSE
_
51
VI.L.
IMMUNHISTOCHEMIE
51
VI.2.
ELECTROPHORETIC
MOBILITY
SHIFT
ASSAY
(EMSA)
52
VI.3.
ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBANT
ASSAYS
(ELISAS)
55
VI.4.
BESTIMMUNG
DER
ENTHALTENEN
PROTEINMENGE
IN
CACO2
UND
HT29-REAKTIONSGEFAESSEN
65
VII.
DISKUSSION
_
67
VII.L.
IMMUNHISTOCHEMIE
ZUM
NACHWEIS
VON
AKTIVIERTEM
NF
K
B
67
VI
1.2.
NF-KB-AKTIVIERUNG
IN
DEN
EPITHELZELLEN:
EMSA
68
VII.3.
ZYTOKINSEKRETION:
NACHWEIS
IN
HT29,
CACO2
UND
IEZ
MITTELS
ELISA
70
VII.4.
GRUNDAKTIVITAET
VERURSACHT
DURCH
ISOLATIONSVORGANG
71
VIII.
ZUSAMMENFASSUNG
_
73
IX.
LITERATURVERZEICHNIS
_
Z5
DANKSAGUNG
_
81
LEBENSLAUF
_
83
3 |
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