Entwicklung von Enzymimmunoassays zum Nachweis Riemerella-anatipestifer-spezifischer Antikörper in Enteneidotter und Entenserum:
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| adam_text | AUS DEM STAATLICHEN VETERINAER- UND LEBENSMITTELUNTERSUCHUNGSAMT POTSDAM
ENTWICKLUNG VON ENZYMIMMUNOASSAYS ZUM NACHWEIS
RIEMERELLA-ANATIPESTIFER-SPEZLT ISCHER ANTIKOERPER IN ENTENEIDOTTER UND
ENTENSERUM VON LEBENSMITTELCHEMIKER LARS LOBBEDEY AUS BERLIN VOM
FACHBEREICH 15 * LEBENSMITTELWISSENSCHAFT UND BIOTECHNOLOGIE * DER
TECHNISCHEN UNIVERSITAET BERLIN ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN - DR. RER. NAT. * GENEHMIGTE DISSERTATION
PROMOTIONSAUSSCHUSS: VORSITZENDER: PROF. DR. SC. AGR. K. KRENKEL
BERICHTER: PROF. DR.-ING. U. STAHL BERICHTER: PROF. DR.-ING. K. RUBACH
BERICHTER: PROF. DR. DR. SCHLATTERER TAG DER WISSENSCHAFTLICHEN
AUSSPRACHE: 7. JUNI 2000 BERLIN 2000 FB 15 NR. 179 D83
INHALTSVERZEICHNIS INHALTSVERZEICHNIS I EINFUEHRUNG 1 1 ZIEL DER ARBEIT 3
2 THEORETISCHE GRUNDLAGEN 5 2.1 ANTIKOERPER 5 2.1.1 IMMUNANTWORT 6 2.1.2
POLYKLONALE ANTIKOERPER 7 2.1.2.1 DOTTERANTIKOERPER 8 2.1.2.2 GEWINNUNG
UND NUTZUNG VON DOTTERANTIKOERPERN 9 2.1.2.3 ENTENANTIKOERPER 9 2.1.3
MONOKLONALE ANTIKOERPER 11 2.1.4 REKOMBINANTE ANTIKOERPER 12 2.1.5 DIE
ANTIGEN/ANTIKOERPER-REAKTION 12 2.2 IMMUNOASSAY 16 2.2.1 HISTORIE DES
IMMUNOASSAYS 16 2.2.2.1 KOMPETITIVER ELISA 17 2.2.2.2 SANDWICH-ELISA 17
2.2.2.3 HOMOGENER ENZYMIMMUNOASSAY 18 2.2.3 ANTIKOERPERDETEKTION MITTELS
ELISA .- 19 2.2.4 OPTIMIERUNG UND VALIDIERUNG VON IMMUNOASSAYS 20 2.3
DIE HAUSENTE 22 2.3.1 WIRTSCHAFTLICHE BEDEUTUNG 22 2.3.2 RIEMERELLA
ANATIPESTIFER 22 2.3.2.1 TAXONOMIE, PATHOGENITAET UND DIAGNOSTIK 23
2.3.2.2 RA.-DIAGNOSTIK MITTELS ELISA 24 11 EXPERIMENTELLE ARBEITEN 27 3
REINDARSTELLUNG VON ENTENANTIKOERPERN 29 3.1 DLGY-GEWINNUNG 29 3.1.1
PEG-PRAEZIPITATION NACH POLSON (1980) 30 3.1.2 PEG-ETHANOL-PRAEZIPITATION
NACH POLSON (1985) 31 3.1.3 DEXTRANSULFATPRAEZIPITATION NACH JENSENIUS
(1981) 32 3.1.4 METHODENVERGLEICH 33 3.1.4.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNISSE
33 3.1.5 BIOCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG 36 INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS III 3.1.5.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 36 3.2
DLGG-GEWINNUNG 39 3.2.1 AMMONIUMSULFATPRAEZIPITATION NACH BENEDICT (1967)
39 3.2.2 BIOCHROMATOGRAPHISCHE REINIGUNG 41 3.3 ZUSAMMENFASSUNG 44 4
ELISA-ENTWICKLUNG 45 4.1 GEWINNUNG VON ANTI-ENTENANTIKOERPER-SEREN 45
4.1.1 IMMUNISIERUNGSSTRATEGIE 45 4.1.2 TITERVERGLEICH IM ELISA 47
4.1.2.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 47 4.1.3 SERENAUFARBEITUNG 50 4.1.3.1
DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 50 4.1.4 AVIDITAETSVERGLEICH DER
IGY-SPEZIFISCHEN SEREN 53 4.1.4.1 PRAEPARATIVE REINIGUNG DER
DLG-SPEZIFISCHEN KANINCHENSEREN 53 4.1.4.2 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 53
4.1.4.3 ERMITTLUNG DES DLGY-SPEZIFISCHEN TITERS 55 4.1.5 ERMITTLUNG DER
KREUZREAKTIVITAET 58 4.1.5.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 58 4.2
AUFARBEITUNG VON ENTENEIDOTTERPROBEN ZUM NACHWEIS DER ANFLUTUNGS- 61
KINETIK SPEZIFISCHER ANTIKOERPER 4.2.1 GEWINNUNG DES PROBENMATERIALS 61
4.2.2 WASSERVERDUENNUNGSMETHODE ZUR DLGY-EXTRAKTION 61 4.2.2.1
DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 61 4.3 FTA.-FRAGMENTIERUNG 63 4.3.1
DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 64 4.4 DLG-ELISA MIT BRUECKENANTIKOERPER UND
AIP-TRACER 66 4.4.1 OPTIMIERUNG DES BESCHICHTUNGSPUFFERS 66 4.4.1.1
DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 66 4.4.2 OPTIMIERUNG DES INKUBATIONSPUFFERS 67
4.4.2.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 68 4.4.3 OPTIMIERUNG DER
REAKTANTENKONZENTRATIONEN 70 4.4.3.1 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 70 4.5
DLG-ELISA MIT HRP-TRACER 74 4.5.1 HERSTELLUNG DER HRP-KONJUGATE 74
4.5.1.1 PROTEIN A-REINIGUNG DER SEREN 75 4.5.1.2 DURCHFUEHRUNG DER
HRP-KOPPLUNG 75 4.5.2 OPTIMIERUNG DER REAKTIONSBEDINGUNGEN 76 4.5.2.1
DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 76 4.5.3 4.5.3.1 4.6 4.6.1 4.7 5 5.1 5.2 5.2.1
5.2.1.1 5.2.2 5.2.2.1 5.2.3 5.2.3.1 5.3 5.3.1 5.3.2 5.3.2.1 5.4 5.4.1
5.4.1.1 5.4.2 5.4.2.1 5.4.3 5.4.3.1 5.5 III IV V A1 A1.1 A1.2 A1.3
OPTIMIERUNG DER REAKTANTENKONZENTRATIONEN 77 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS
77 VERGLEICH DER ELISA-FORMATE 78 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 78
ZUSAMMENFASSUNG 82 STUDIEN ZUR TITERKINETIK 84 IMMUNISIERUNG VON ENTEN
GEGEN R.A. 84 RA.-TITERKINETIK IMMUNISIERTER ENTEN IM ELISA 85
UNTERSUCHUNG VON DOTTERPROBEN IM ELISA MIT HRP-TRACER 85 DURCHFUEHRUNG
UND ERGEBNIS 85 UNTERSUCHUNG VON DOTTERPROBEN IM ELISA MIT
BRUECKENANTIKOERPER UND AIP- 88 TRACER DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 88
UNTERSUCHUNG VON SERUMPROBEN 91 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 91
R.A.-TITERKINETIK IN ENTENKUEKEN NACH AKTIVER IMMUNISIERUNG DER
MUTTERTIERE 93 PROBENGEWINNUNG 93 UNTERSUCHUNG DER KUEKENSEREN IM ELISA
94 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 94 ENTWICKLUNG DES GESAMT-LGG-GEHALTES IN
ENTENSEREN 97 ENTWICKLUNG EINES ELISA ZUR MESSUNG DES GESAMT-LGG IM
ENTENSERUM 97 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS . . 97 GESAMT-LGG IM ENTENSERUM
NACH AKTIVER IMMUNISIERUNG 99 DURCHFUEHRUNG UND ERGEBNIS 99 GESAMT-LGG IN
KUEKENSEREN NACH AKTIVER IMMUNISIERUNG DER ELTERNTIERE 101 DURCHFUEHRUNG
UND ERGEBNIS 101 ZUSAMMENFASSUNG 103 DISKUSSION 105 LITERATURVERZEICHNIS
115 ANHANG 133 GERAETE UND MATERIALIEN 133 ALLGEMEIN 133 BIO-HPLC 133
ELEKTROPHORESE 133 INHALTSVERZEICHNIS A1.4 ELISA 134 A2 CHEMIKALIEN 135
A 3 PUFFERLOESUNGEN UND REAGENZIEN 137 A3.1 ALLGEMEIN VERWENDETE UND ELI
SA-REAGENZIEN 137 A3.2 REAGENZIEN FUER DIE BIOCHROMATOGRAFIE 139 A 3.3
REAGENZIEN FUER DIE ELEKTROPHORESE _, 139 A 3.4 REAGENZIEN FUER DIE
AFFINITAETSCHROMATOGRAFIE 141 A3.5 REAGENZIEN FUER DIE HRP-KOPPLUNG 141 A4
ARBEITSVORSCHRIFTEN 142 A4.1 BIOCHROMATOGRAFIE 142 A 4.1,1 GPC 142 A
4.1.2 AIEC 142 A4.2 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 143 A 4.3
SDS-PAGE NACH LAEMMLI (1970) 144 A5 KALIBRIERFUNKTIONEN 146 LEBENSLAUF
147
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| spelling | Lobbedey, Lars 1970- Verfasser (DE-588)122309839 aut Entwicklung von Enzymimmunoassays zum Nachweis Riemerella-anatipestifer-spezifischer Antikörper in Enteneidotter und Entenserum von Lars Lobbedey 2000 VIII, 147 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Berlin, Techn. Univ., Diss., 2000 Antikörper (DE-588)4002290-0 gnd rswk-swf Blutserum (DE-588)4146088-1 gnd rswk-swf Ei (DE-588)4013700-4 gnd rswk-swf Ente (DE-588)4127750-8 gnd rswk-swf Enzymimmunassay (DE-588)4152477-9 gnd rswk-swf Nachweis (DE-588)4115334-0 gnd rswk-swf Dotter (DE-588)4322386-2 gnd rswk-swf Riemerella anatipestifer (DE-588)4605164-8 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Ente (DE-588)4127750-8 s Ei (DE-588)4013700-4 s Dotter (DE-588)4322386-2 s Riemerella anatipestifer (DE-588)4605164-8 s Antikörper (DE-588)4002290-0 s Nachweis (DE-588)4115334-0 s Enzymimmunassay (DE-588)4152477-9 s DE-604 Blutserum (DE-588)4146088-1 s GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=009075736&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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