Mechanismen distaler Enhancer:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Utz, Wiss.
2000
|
| Schriftenreihe: | Biochemie
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Chemie und Pharmazie, Diss., 2000 |
| Beschreibung: | 122 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
| ISBN: | 3896757822 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
5
1.1
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
BINDEN
AN
GENETISCHE
KONTROLLELEMENTE
5
1.2
GENERELLE
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
KLASSE
II
TRANSKRIPTION
6
1.3
DIE
AKTIVIERUNG
DER
TRANSKRIPTION
7
1.3.1
DREI
FUNKTIONELLE
KLASSEN
VON
TRANSKRIPTIONSAKTIVATOREN
7
1.3.2
MECHANISMEN
DER
TRANSKRIPTIONSAKTIVIERUNG
8
1.3.3
DIE
AKTIVIERUNGSDOMAENE
VP16
VERMITTELT
VERSCHIEDENE
AKTIVIERUNGS-MECHANISMEN
9
1.4
TRANSKRIPTION
UND
CHROMATIN
10
1.5
T-ZELLSPEZIFISCHE
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
11
1.6
EXPRESSION
DER
0
KETTE
DES
T-ZELL-REZEPTORS
12
1.6.1
FUNKTIONELLE
WECHSELWIRKUNGEN
ZWISCHEN
DEM
VSS-8.1-PROMOTOR
UND
DEM
TCRSS-ENHANCER
13
1.7
AUFGABENSTELLUNG
14
2
MATERIAL
16
2.1
GERAETE
16
2.2
CHEMIKALIEN
UND
BIOCHEMIKALIEN
17
2.3
RADIOCHEMIKALIEN
19
2.4
ENZYME
19
2.5
ANTIKOERPER
19
2.6
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
KULTURMEDIEN
20
2.6.1
LOESUNGEN
UND
PUFFER
20
2.6.2
KULTURMEDIEN
21
2.6.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
HILFSMITTEL
22
2.7
EUKARYONTISCHE
ZELL-LINIEN
23
2.8
BAKTERIENSTAEMME
2
3
2.9
DNA
UND
PROTEIN-LAENGENSTANDARDS
24
2.9.1
DNA-LAENGENSTANDARDS
24
2.9.2
PROTEIN-LAENGENSTANDARDS
24
2.10
PLASMIDE
25
2.11
OLIGODEOXYRIBONUKLEOTIDE
26
INHALTSVERZEICHNIS
2
3
METHODEN
27
3.1
METHODEN
DER
PROKARYONTISCHEN
ZELLKULTUR
27
3.1.1
ANZUCHT
VON
BAKTERIENKULTUREN
27
3.1.2
ANLEGEN
VON
DAUERKULTUREN
27
3.2
METHODEN
DER
EUKARYONTISCHEN
ZELLKULTUR
27
3.2.1
ZELLVERMEHRUNG
EUKARYONTISCHER
ZELL-LINIEN
27
3.2.2
ANLEGEN
VON
DAUERKULTUREN
28
3.3
DNA
UND
RNA-ARBEITSTECHNIKEN
29
3.3.1
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
UND
REINHEIT
EINER
NUKLEINSAEUREPRAEPARATION
29
3.3.2
CHLOROPANE-EXTRAKTION
UND
FAELLUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
29
3.3.3
REINIGUNG
VON
DNA
UEBER
GELFILTRATION
30
3.3.4
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
(DEL
SAL
ET
AL.,
1988)
30
3.3.5
PLASMID-DNA-PRAEPARATION
MIT
QUIAGEN-ANIONEN-AUSTAUSCHERSAEULEN
31
3.3.6
AMPLIFIKATION
VON
DNA
MIT
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
32
3.3.7
RESTRIKTIONSHYDROLYSE
VON
DNA
33
3.3.8
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
34
3.3.9
ELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
34
3.3.10
REINIGUNG
SYNTHETISCHER
OLIGODESOXYRIBONUKLEOTIDE
35
3.3.11
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
OLIGODESOXYRIBONUKLEOTIDEN
AM
5
'-ENDE
36
3.3.12
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
36
3.3.13
AUFFUELLEN
VON
5
'-UEBERHAENGENDEN
DNA-ENDEN
37
3.3.14
LIGATION
VON
DNA
37
3.3.15
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.COLI
(NACH
M.
SCOTT,
UNVEROEFFENTLICHT)
38
3.3.16
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.COLI
(NACH
M.
SCOTT,
UNVEROEFFENTLICHT)
39
3.3.17
KLONIERUNG
VON
PROMOTOR
UND
PROMOTOR/ENHANCER-KONSTRUKTEN
39
3.3.18
KLONIERUNG
VON
EIA
12S-,
CBP
UND
ETS-L-DERIVATEN
40
3.3.19
KLONIERUNG
DER
GAL4-VP16
DERIVATIVE
41
3.3.20
DNA-SEQUENZIERUNG
41
3.4
PROTEIN-ARBEITSTECHNIKEN
43
3.4.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
43
3.4.2
SDS-GELELEKTROPHORESE
44
3.4.3
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
PROTEINEN
45
3.4.4
HERSTELLUNG
VON
ZELLEXTRAKTEN
45
3.4.5
HETEROLOGE
EXPRESSION
VON
PROTEINEN
IN
ESCHERICHIA
COLI
48
3.4.6
REINIGUNG
VON
GST
FUSIONSPROTEINEN
50
3.5
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
DURCH
WESTERN-BLOT
ANALYSE
50
3.6
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
5
2
3.6.1
GELRETARDATIONSANALYSE
(EMSA)
52
3.6.2
PROTEIN-PROTEIN
INTERAKTIONSEXPERIMENTE
53
3.6.3
REINIGUNG
ENHANCER-BINDENDER
PROTEINE
UNTER
VERWENDUNG
DES
BIOTIN/STREPTAVIDIN
AFFINITAETSSYSTEMS
53
3.6.4
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
VON
KLASSE
II-PROMOTOREN
54
3.6.5
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
56
3.6.6
GST-FAELLUNG
(YYPULL
DOWN
ASSAY
"
)
60
3.6.7
IMMUNPRAEZIPITATION
VON
P300
AUS
JURKAT-ZELLKERNEXTRAKT
60
INHALTSVERZEICHNIS
3
4
ERGEBNISSE
61
4.1
STRUKTURELLE
EIGENSCHAFTEN
DES
VB-8.1-PROMOTORS
UND
DES
TCRSS-ENHANCERS
61
4.1.1
STRUKTUR
DES
VSS-8.1-PROMOTORS
61
4.1.2
STRUKTUR
DES
TCRSS
-ENHANCERS
62
4.2
DISTINKTE
REGIONEN
DER
TRANSAKTIVIERUNGSDOMAENE
VON
ETS-1
VERMITTELN
ENHANCER-
BZW.
POMOTORFUNKTION
63
4.3
DER
COFAKTOR
CBP/P300
IST
AN
DER
REGULATION
DER
TRANSKRIPTION
DER
B-KETTE
DES
TCR
BETEILIGT
66
4.3.1
ENDOGENES
CBP/P300 IST
AN
DER
AKTIVITAET
DES
TCRSS-ENHANCERS
BETEILIGT
66
4.3.2
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DER
FLANKIERENDEN
REGIONEN
DER
BEIDEN
ETS/AML-ELEMENTE
67
4.3.3
DIE
FLANKIERENDEN
REGIONEN
DER
BEIDEN
ETS/AML-ELEMENTE
BEEINFLUSSEN
DIE
ENHANCERAKTIVITAET
68
4.3.4
FLANKIERENDE
SEQUENZEN
KOMPETITIEREN
SPEZIFISCH
DIE
AUSBILDUNG
VON
PROTEIN-ENHANCER
KOMPLEXEN
69
4.3.5
EIN
FUNKTIONELLES
ENHANCERKONSTRUKT
BINDET
SPEZIFISCH
CREB
UND
ETS-1
70
4.4
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
GAL4-CBP
FUSIONSPROTEINEN
72
4.4.1
GAL4-CBP
FUSIONSPROTEINE
AKTIVIEREN
DEN
VSS-8.1-PROMOTOR
73
4.4.2
DAS
GAL4-HAT
FUSIONSPROTEIN
SIMULIERT
DEN
TCRSS-ENHANCER
74
4.5
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
DES
SYNTHETISCHEN
ENHANCERS
GAL4-VP16
75
4.5.1
EIA
REPRIMIERT
DIE
AKTIVIERUNG
DES
VSS-8.1-PROMOTORS
DURCH
DEN
SYNTHETISCHEN
ENHANCER
GAL4-VP16
76
4.5.2
DER
PROTOTYPISCHE
AKTIVATOR
GAL4-VP16
AKTIVIERT
UNSPEZIFLSCH
DEN
VSS-8.1-PROMOTOR
77
4.5.3
DIE
ENHANCERFUNKTION
VON
GAL4-VP16
WIRD
TEILWEISE
DURCH
DIE
REKRUTIERUNG
DER
CORE-AKTIVATOREN
VERMITTELT
78
4.6
ANALYSE
DES
IN-VITRO
-AKTIVIERUNGSMECHANISMUS
VON
VP16
79
4.6.1
VP16
AKTIVIERT
SPEZIFISCH
DIE
TRANSKRIPTION
IN
EINEM
ROHEXTRAKT
80
4.6.2
DER
NEUE
POSITIVE
COFAKTOR
PC6-MOVE
AKTIVIERT
NICHT
GEWEBESPEZIFISCH
DIE
TRANSKRIPTION
83
4.6.3
DEPLETION
DES
COFAKTORS
PC6-MOVE
DURCH
DIE
VP16
AKTIVIERUNGSDOMAENE
84
4.6.4
DIE
VP16:H2
DOMAENE
INTERAGIERT
DIREKT
MIT
DER
N-TERMINALEN
REGION
VON
CBP
87
4.6.5
CBP/P300
IST
IN
VIVO
AN
DER
DURCH
VP16
VERMITTELTEN
AKTIVIERUNG
BETEILIGT
89
4.6.6
DIE
PC6-MOVE
AKTIVITAET
WIRD
NICHT
DURCH
P300
VERMITTELT
90
4.6.7
ZUGABE
VON
GST-E1A
INHIBIERT
NICHT
DIE
PC6-MOVE
FUNKTION
91
5
DISKUSSION
93
5.1
KOOPERATIVITAET
AM
TCRSS-ENHANCER
93
5.2
WIE
FUNKTIONIEREN
AKTIVATOREN
INNERHALB
DES
CORE
PROMOTORS
BZW.
DES
ENHANCERS
95
5.3
ARCHITEKTONISCHE
PROTEINE
HABEN
EINE
BESONDERE
BEDEUTUNG
BEIM
AUFBAU
DES
ENHANCEOSOMS
97
5.4
SPEZIFISCHE
INTERAKTION
DES
VSS-8.1-PROMOTORS
UND
DES
TCRSS-ENHANCERS
97
5.5
DIE
VP16
AKTIVIERUNGSDOMAENE
VERMITTELT
ENHANCERFUNKTION
99
5.5.1
CBP
INTERAGIERT
DIREKT
MIT
DER
VP161H2
DOMAENE
99
5.5.2
AKTIVIERUNG
DURCH
VP16
IN
VITRO
100
INHALTSVERZEICHNIS
4
5.5.3
EINE
NEUE
AKTIVITAET
IST
AN
DER
SPEZIFISCHEN
VP16
VERMITTELTEN
AKTIVIERUNG
BETEILIGT
102
6
ZUSAMMENFASSUNG
7
LITERATURVERZEICHNIS
104
106 |
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