Interaktion des Proteins ActA von Listeria monocytogenes mit dem Wirtszellprotein LaXp180:
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG.
1
SUMMARY. 2
1 EINLEITUNG 3
1.1 ZIELSETZUNG DER ARBEIT. 3
1.2 LISTERIA MONOCYTOGENES. 3
1.3 ACTA. 6
1.4 LAXPL80. 12
1.5 STATHMIN . 14
2 ERGEBNISSE 19
2.1 VORARBEITEN. 19
2.2 PRIMAERSTRUKTURANALYSE VON LAXPL80. 21
2.3 INTERAKTION VON ACTA-FVAGMENTEN MIT DEM C-TERMINUS VON LAXPL80 .
23
2.4 HERSTELLUNG EINES POLYKLONALEN ANTI-LAXPL80-SERUMS.24
2.5 HERSTELLUNG EINES POLYKLONALEN ANTI-ACTA-SERUMS.26
2.6 LAXPL80 BINDET ACTA IN VITRO.28
2.7 LAXPL80 WIRD IN VERSCHIEDENEN SAEUGERZELLEN EXPRIMIERT .30
2.8 IMMUNOPRAEZIPITATION EINES 194 KDA PROTEINS.31
2.9 LAXPL80 KOLOKALISIERT MIT L. MONOCYTOGENES IN INFIZIERTEN ZELLEN .32
2.10 IMMUNFLUORESZENZANALYSEN NACH LYANSFEKTION VON ZELLEN MIT LAXPL80
. 42
2.11 STATHMIN KOLOKALISIERT MIT L. MONOCYTOGENES IN INFIZIERTEN
ZELLEN.46
3 DISKUSSION 51
4 METHODEN 61
4.1 AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTEN PROTEINEN.61
4.1.1 AUFREINIGUNG VON HIS-LAXPL80 UNTER DENATURIERENDEN BEDINGUNGEN 61
4.1.2 AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTEM ACTA.62
4.1.3 ZUSAETZLICHE REINIGUNG UEBER SDS-PAGE.63
4.2 LAXPL80-ACTA IN VSTRO-BINDUNGSTEST.63
4.3 RNA ISOLATION, CDNA SYNTHESE UND KT-PCR.64
4.4 IMMUNOPRAEZIPITATION VON LAXPL80.65
4.5 IMMUNFIUORESZENZFARBUNG VON GEWEBEKULTURZELLEN.66
4.5.1 KULTUR UND INFEKTION VON COS-L-FIBROBLASTEN.66
4.5.2 IMMUNFIUORESZENZFARBUNG MIT DEM ANTI-LAXPL80-SERUM.67
4.5.3 IMMUNFIUORESZENZFARBUNG MIT DEM ANTI-STATHMIN-SERUM.67
4.6 TRANSFEKTION VON COS-L-ZELLEN.68
5 MATERIAL 69
5.1 PLASMIDE.69
5.2 STAEMME.69
5.3 ZELL-LINIEN. 70
VII
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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LITERATUR
71
^ ^ N SS 83
A.L NUKLEOTIDSEQUENZEN DER PPC67-CDNA INSERTS.83
A.L.L CDNAS DER AIPS. 83
A.L.2 INSERTS DER FALSCH-POSITIVEN PLASMIDE.84
A.2 PRIMAERSTRUKTURDATEN VON LAXPL80. 88
A.2.1 DAS OFFENE LESERASTER VON LAXPLSO.88
A.2.2 AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG. 88
A.2.3 SEQUENZMOTIVE. 88
PUBLIKATIONEN. 91
CURRICULUM VITAE. 93
VIII |
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