Untersuchungen zur genomischen Organisation des Haupthistokompatibilitätskomplexes beim Rind:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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1
EINLEITUNG
1.1
DERHAUPTHISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEX
1
1.1.1
MHC-MOLEKUELE
2
1.1.1.1
STRUKTUR
DER
MHC-MOLEKUELE
2
1.1.1.2
FUNKTION
UND
PEPTIDBELADUNG
DER
MHC-MOLEKUELE
4
1.1.1.3
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
MHC
6
1.1.2
DER
HAUPTBISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEX
BEIM
RIND
7
1.1.2.1
AUFSPALTUNG
DES
RINDER-MHC
8
1.1.2.2
MHC-KLASSE-I-GENE
DES
RINDES
9
1.1.2.3
MHC-KLASSE-II-GENE
DES
RINDES
9
1.1.2.4
MHC-KLASSE-III-GENE
DES
RINDES
11
1.1.2.5
GENOMISCHE
LOKALISATION
DES
RINDER-MHC
11
1.1.2.6
BEDEUTUNG
DES
RINDER-MHC
12
1.2
GENOMISCHE
KARTIERUNGSSTRATEGIEN
14
1.2.1
GENETISCHE
GENOMKARTEN
14
1.2.2
PHYSIKALISCHE
GENOMKARTEN
14
1.3
KUENSTLICHE
HEFECHROMOSOME
17
1.4
ZIELSETZUNG
19
2
MATERIAL
2.1
CHEMIKALIEN
20
2.2
PUFFER
UND
LOESUNGEN
22
2.3
MEDIEN
23
2.4
ENZYME
24
2.5
KITS
25
2.6
ZELLEN
UND
VEKTOREN
25
2.7
OLIGONUKLEOTIDE
26
2.8
LAENGENSTANDARDS
28
INHALTSVERZEICHNIS
3
METHODEN
II
29
3.1
ZELLKULTUREN
29
3.1.1
KULTIVIERUNG
VON
HEFEZELLEN
29
3.1.2
KULTIVIERUNG
VON
ESCHERICHIA
CO/I-ZELLEN
29
3.1.3
HERSTELLUNG
TRANSFORMATIONSKOMPETENTER
E.
CO/I-ZELLEN
29
3.1.4
TRANSFORMATION
VON
E.
CO/I-ZELLEN
30
3.2
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
30
3.2.1
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
VOLLBLUT
30
3.2.2
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
HEFEZELLEN
31
3.2.3
PLASMID-DNA
PRAEPARATION
(ALKALISCHE
LYSE)
32
3.2.4
DNA-FRAGMENTISOLIERUNG
AUS
AGAROSE-GELEN
32
3.2.5
REINIGUNG
VON
DNA
33
3.2.6
ISOLIERUNG
VON
RNA
AUS
BLUTZELLEN
34
3.3
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
35
3.3.1
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
VON
DNA
35
3.3.2
PULSFELD-GELELEKTROPHORESE
(PFGE)
36
3.3.2.1
PRAEPARATION
DER
AGAROSEBLOECKCHEN
36
3.3.2.2
AUFTRENNUNG
DER
HEFECHROMOSOMEN
37
3.3.3
FONNALDEHYD-GELELEKTROPHORESE
VON
RNA
37
3.4
HYBRIDISIERUNGSTECHNIKEN
38
3.4.1
TRANSFER
VON
DNA
AUF
EINE
MEMBRAN
(SOUTHERN-BLOT)
38
3.4.2
HERSTELLUNG
MARKIERTER
SONDEN
39
3.4.2.1
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
SONDEN
39
3.4.2.2
HERSTELLUNG
DIGOXYGENIN-MARKIERTER
OLIGONUKLEOTID-SONDEN
40
3.4.3
HYBRIDISIERUNGEN
40
3.5
ENZYMATISCHE
MODIFIKATIONEN
VON
NUKLEINSAEUREN
42
3.5.1
RESTRIKTIONSVERDAU
42
3.5.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
DER
5
'-ENDEN
VON
DNA-MOLEKUELEN
42
3.5.3
LIGATION
VON
DNA-MOLEKUELEN
43
INHALTSVERZEICHNIS
_
III
3.6
DIE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
43
3.6.1
STANDARD-PCR
44
3.6.2
PCR
MIT
REVERSER
TRANSKRIPTASE
(RT-PCR)
45
3.6.3
RACE-PCR
45
3.7
SEQUENZANALYSE
45
3.8
CHARAKTERISIERUNG
DER
KUENSTLICHEN
HEFECHROMOSOMEN
(YACS)
46
3.8.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
YAC-KLONEN
MIT
GENEN
AUS
DEM
RINDER-MHC
46
3.8.2
FLUORESZENZ-IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
(FISH)
49
3.8.3
ISOLIERUNG
DER
YAC-ENDFRAGMENTE
50
3.8.4
ISOLIERUNG
VON
MIKROSATELLITEN
53
4
ERGEBNISSE
4.1
DEFINITION
NEUER
STS-MARKER
56
4.2
IDENTIFIZIERUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
YACS
AUS
DEN
RINDER-MHC-REGIONEN
57
4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
YACS
58
4.3.1
LAENGE
DER
YACS
58
4.3.2
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
UND
BESTIMMUNG
DES
CHIMERITAETSSTATUS
60
4.3.3
GENZUSAMMENSETZUNG
DER
YACS
62
4.4
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
YAC-ENDFRAGMENTE
66
4.5
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
MIKROSATELLITEN
69
4.6
KONSTRUKTION
DER
YAC-CONTIGS
73
4.6.1
DAS
KLASSE-IIA-CONTIG
73
4.6.2
DAS
KLASSE-IIB-CONTIG
76
5
DISKUSSION
5.1
KONSTRUKTION
DER
YAC-CONTIGS
81
5.2
GENOMISCHE
ORGANISATION
DES
RINDER-MHC
85
5.2.1
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DER
MHC-REGION
BEIM
RIND
86
INHALTSVERZEICHNIS
IV
5.2.2
ANORDNUNG
DER
KLASSE-IIA-GENE
88
5.2.3
ANORDNUNG
DER
KLASSE-IIB-GENE
89
5.2.4
MOEGLICHE
KONSEQUENZEN
DER
AUFSPALTUNG
DES
RINDER-MHC
90
5.3
ISOLIERUNG
DER
MIKROSATELLITEN
95
6
ZUSAMMENFASSUNG
98
7
ABSTRACT
100
8
LITERATURVERZEICHNIS
102 |
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