Entwicklung alternativer Vakzinierungsstrategien gegen Masernvirusinfektionen im Tiermodell:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 10
1.1. EPIDEMIOLOGIE UND KLINIK DER AKUTEN MASEM 10
1.2. STRUKTUR DES MASEMVIRUS 11
1.3. MV-SPEZIFISCHE IMMUNANTWORT 12
1.3.1 HUMORALE MV-SPEZIFISCHE IMMUNANTWORT 12
1.3.2. ZELLULAERE MV-SPEZIFISCHE IMMUNANTWORT 13
1.4. MV-IMPFSTOFFE 14
1.4.1. AKTUELLER IMPFSTOFF 14
1.4.2. IMPFSTOFFPROBLEMATIK 15
1.4.3. PROBLEME BEI DER ERADIKATION 17
1.4.4. IMPFSTOFFVARIANTEN UND ALTERNATIVE IMPFROUTEN 17
1.5. TIERMODELLE FUER MASEMVIRUSINFEKTIONEN 18
1.6. EXPERIMENTELLE IMPFSTOFFE 20
1.6.1. EXPERIMENTELLE IMPFSTOFFE IN GEGENWART MATEMALER ANTIKOERPER 20
1.6.2. SPALTVAKZINE 21
1.6.3. DNS-VAKZINE 21
1.6.4. VSV ALS IMMUNISIERUNGSVEKTOR 22
1.7. FRAGESTELLUNG 24
2. MATERIALIEN 25
2.1. GERAETE 25
2.2. VERBRAUCHSMATERIALIEN 25
2.3. MEDIEN, LOESUNGEN UND PUFFER 26
2.4. ZELLINIEN 29
2.5. VIRUSSTAEMME 30
2.6. PLASMIDE 30
2.7. ANTIKOERPER 30
2.8. VERSUCHSTIERE 31
3. METHODEN 31
3.1. ZELLKULTUR 31
6
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.1.1. HALTUNG VON HYBRIDOMA-LINIEN 31
3.1.2. HALTUNG VON VERO-ZELLEN 31
3.1.3. HALTUNG VON BHK 21 ZELLEN 31
3.1.4. HALTUNG VON PRIMAEREN BAUMWOLLRATTEN FIBROBLASTEN (CRF)-ZELLEN 31
3.1.5. HALTUNG VON SUSPENSIONSZELLEN 31
3.2. ORGANENTNAHME UND PRAEPARATION VON MILZZELLEN 32
3.3. MV-SPEZIFISCHER PROLIFERATIONSTEST 32
3.4. PRAEPARATION VON PLASMID-DNS 33
3.4.1. BESTIMMUNG DER DNS-KONZENTRATION UND DES REINHEITSGRADES 33
3.5. IMMUNHISTOCHEMIE 34
3.5.1. REINIGUNG VON IMMUNGLOBULINEN 34
3.5.1.1. HYBRIDOMA-UEBERSTAND 34
3.5.1.2. AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE MIT PROTEIN G 34
3.5.2. IMMUNFLUORESZENZ 35
3.5.3. ANTIKOERPEMACHWEIS 35
3.5.3.1. ELISA 35
3.5.3.1.1. ELISA ZUM NACHWEIS MV-SPEZ. IGG ANTIKOERPER AUS DER
BAUMWOLLRATTE 36
3.5.3.1.2. ELISA ZUM NACHWEIS MV-SPEZ. HUMANER IGG ANTIKOERPER 36
3.5.3.2. NEUTRALISATIONSTEST 37
3.5.3.2.1. MASEMVIRUS NEUTRALISATIONSTEST 37
3.5.3.2.2. MV-SPEZ. PLAQUE REDUKTIONSNEUTRALISATIONSTEST (PRNT) 38
3.5.3.2.3. VSV-SPEZ. NEUTRALISATIONSTEST (NT BZW. PRNT) 38
3.6. VIROLOGISCHE METHODEN 39
3.6.1. MASEMVIRUS ANZUCHT (MV-ED, MV-HU2) 39
3.6.2. PLAQUETEST 39
3.6.3. VS V-ANZUCHT (VSV-INDIANA, VS V-H, CT 9-H, CT 1 -H) 40
3.6.4. VSV-PLAQUETEST 40
3.6.5. GEWINNUNG VON MASEMVIRUSANTIGEN 41
3.7. TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 42
3.7.1. INTRAPERITONEALE IMMUNISIERUNG VON BAUMWOLLRATTEN 42
3.7.2. INTRANASALE IMMUNISIERUNG VON BAUMWOLLRATTEN 42
3.7.3. ORALE IMMUNISIERUNG VON BAUMWOLLRATTEN 42
3.7.4. INTRATRACHEALE IMMUNISIERUNG VON BAUMWOLLRATTEN 43
3.7.5. INTRAZEREBRALE IMMUNISIERUNG VON BAUMWOLLRATTEN 44
7
3.7.6. DNS-IMMUNISIERUNG 44
3.7.6.1. INTRAMUSKULAERE DNS-IMMUNISIERUNG 44
3
.
1
.
62
.
INTRADERMALE DNS-IMMUNISIERUNG 45
3.7.7. BLUTENTNAHME UND SERUMGEWINNUNG 45
3.7.8. SCHUTZ VERSUCHE UND HISTOLOGIE 46
4. ERGEBNISSE 47
4.1. BAUMWOLLRATTEN ALS TIERMODELL FUER DIE INHIBITION DER VAKZINE
INDUZIERTEN SEROKONVERSION 47
4.1.1. MODELLSYSTEM FUER NATUERLICHE MATEMALE ANTIKOERPER 47
4.1.2. ALTERNATIVES MODELLSYSTEM FUER MATEMALE ANTIKOERPER 49
4.1.2.1. PASSIVER TRANSFER EINES HUMANSERUMS SIMULIERT MATEMALE MV-
SPEZIFISCHE ANTIKOERPER 50
4.1.2.2. PASSIVER TRANSFER VON HUMANEN MV-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPERN
INHIBIERT
DIE VAKZINE-INDUZIERTE SEROKONVERSION 52
4.1.2.3. DIE INHIBITION IST ABHAENGIG VON DER KONZENTRATION AN
MV-SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN 54
4.1.2.4. IMMUNISIERUNGSROUTE, -DOSIS UND
-SCHEMA
ZEIGEN NUR GERINGEN EINFLUSS 56
4.2. DNS-VAKZINE 57
4.2.1. INTRAMUSKULAERE DNS-IMMUNISIERUNG 57
4.2.2. INTRADERMALE DNS-IMMUNISIERUNG 58
4.2.3. OPTIMIERUNG DER IMMUNISIERUNGPARAMETER 59
4.2.4. VERGLEICH DER IMMUNOGENITAET UNTERSCHIEDLICHER MV-PROTEINE
(H, F UND N) 60
4.2.5. HISTOLOGISCHE UNTERSUCHUNG DES LUNGENGEWEBES IMMUNISIERTER
BAUMWOLLRATTEN 64
4.2.6. DNS-IMMUNISIERUNG IN GEGENWART MV-SPEZIFISCHER (YYMATEMALER")
ANTIKOERPER 66
4.3. VSV ALS IMMUNISIERUNGSVEKTOR 68
4.3.1. PATHOGENITAET VON VSV BZW. VSV-H IM TIERMODELL 68
4.3.1.1.
IN VIVO REPLIKATION VON VSV-H 69
4.3.2. IMMUNOGENITAET VON VSV-H IN BAUMWOLLRATTEN 70
4.3.2.1. ANTIKOERPERTITER SIND ABHAENGIG VON DER IMMUNISIERUNGSDOSIS 71
8
4.3.2.2. DIREKTER VERGLEICH ZWISCHEN VSV-H UND MV 73
4.3.3.
IN VITRO WIRD VSV-H NICHT DURCH MV-SPEZIFISCHE
ANTIKOERPER NEUTRALISIERT 75
4.3.4. VSV-H INDUZIERT MV-NEUTRALISIERENDE ANTIKOERPER IN GEGENWART MV-
SPEZIFISCHER ANTIKOERPER 76
4.3.4.1. DER IMMUISIERUNGSERFOLG IN GEGENWART MATEMALER ANTIKOERPER IST
ABHAENGIG VON DER IMMUNISIERUNGSDOSIS 78
4.3.4.2. REPLIKATIONSFAEHIGES VSV-H IST ESSENTIELL, UM EINE
MV-SPEZIFISCHE
IMMUNANTWORT ZU INDUZIEREN 79
4.3.4.3. VSV-H IST AUCH IN GEGENWART VON NATUERLICHEN MATEMALEN
ANTIKOERPERN
EFFEKTIV 79
4.3.5. INTRATRACHEALE IMMUNISIERUNG MIT VSV-H 81
4.3.6. INTRAZEREBRALE IMMUNISIERUNG MIT VSV-H 83
4.3.6.1. VSV-H DELETIONSMUTANTEN CT 9-H UND CT 1 -H 83
4.3.6.2. INTRAZEREBRALE IMMUNISIERUNG MIT CT 9-H 85
4.3.7. IMMUNOGENITAET DER DELETIONSMUTANTEN CT 9-H UND CT 1-H 86
4.3.8. IMMUNOGENITAET VON CT 9-H UND CT 1-H IN GEGENWART
MV-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER 88
5. DISKUSSION 90
6. ZUSAMMENFASSUNG 99
7. SUMMARY 101
8. LITERATURVERZEICHNIS 104
9. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 113
9 |
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