Struktur-Funktionsanalyse der Myelinmembran von Axonen des zentralen Nervensystems durch Gen-Ablation mittels homologer Rekombination:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEHE
I.
EINLEITUNG
1
1.
NERVENSYSTEM
UND
NERVENLEITUNG
1
1.1.
MYELINISIERUNG
2
1.2.
GLIOGENESE
3
2.
ZUSAMMENSETZUNG
DES
MYELINS
4
2.1.
LIPIDE
4
2.2.
PROTEINE
4
3.
DIE
PROTEOLIPIDPROTEINE
PLP
UND
DM20
8
3.1.
PROTEINSTRUKTUR
UND
EIGENSCHAFTEN
8
3.2.
GENSTRUKTUR
UND
EXPRESSION
9
3.3.
MUTATIONEN
IM
PLP-GEN
10
3.4.
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
UND
EVOLUTIONAERE
ASPEKTE
11
4.
PROTEINACYLIERUNGEN
12
5.
TRANSGENE
MAUSMODELLE
13
5.
1
.
GENE
TARGETING
13
5.2.
DAS
CRE/LOXP
SYSTEM
14
II.
AUFGABENSTELLUNG
16
III.
ERGEBNISSE
17
1.
HERSTELLUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
REKOMBINANTER
ES
ZELL
KLONE
17
1.1.
GENE
TARGETING
KONSTRUKTE
ZUR
IN
VIVO
MUTAGENESE
DES
PLP
GENS
17
1.2.
NACHWEIS
DER
HOMOLOGEN
REKOMBINATION
19
1.2.1.
KOKONVERSION
DER
DM20
MUTATION
22
1.2.2.
KOKONVERSION
DER
PLP-MUTATION
23
1.2.3.
KOKONVERSION
DER
ACYLIERUNGS
MUTATION
23
1.3.
KARYOTYPISIERUNG
24
1.4.
KONTROLLE
DER
TOTIPOTENZ
VON
ES-ZELLEN
25
1.5.
MANIPULATION
VON
EMBRYONEN
26
2.
DIE
ETABLIERUNG
DER
TRANGENEN
MAUSLINIE:
NEOS
28
2.1.
RNA-ANALYSE
29
2.1.1.
NORTHERN
BLOT
29
2.1.2.
RT-PCR
31
2.2.
PROTEIN
ANALYSE
32
2.3.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
DES
NERVUS
OPTICUS
33
2.4.
KREUZUNG
DER
NEOS
MAUS
MIT
EINER
OLIGODENDROZYTEN
SPEZIFISCHEN
CRE
MAUS
34
2.4.
1.
ANALYSE
DER
CREXNEOS
MAUS
36
2.5.
TRANSIENTE
CRE
EXPRESSION
38
3.
VERSUCHE
ZUR
EXPRESSION
DES
CRE
GENS
39
3.1.
VERWENDUNG
DES
CRE-GENS
AUS
DEM VEKTOR
PBS
185
39
3.2.
MODIFIZIERUNG
DES
CRE
GENS
AUS
DEM
BAKTERIOPHAGEN
PI
40
3.2.1.
KLONIERUNG
DER
EXPRESSIONSPLASMIDE
PIRES-CRENLS
UND
PET8CCRE
40
3.2.2.
EXPRESSION
IN
E.COLI
UND
GEWINNUNG
VON
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERN
42
3.2.3.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
CRENLS
GENS
44
3.2.
MIKROINJEKTION
VON
CRENLS
RNA
IN
OOZYTEN
DER
NEOS
MAUS
45
SEITE
4.
DIE
ETABLIERUNG
DER
TRANGENEN
MAUSLINIE:
DM20+/PIP
47
4.1.
RNA-ANALYSE
47
4.1.1.
NORTHERN
BLOT
47
4.1.2.
RT-PCR
48
4.2.
PROTEINANALYSE
51
4.3.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
52
4.4.
TRANSIENTE
CRENLS
EXPRESSION
53
5.
VERGLEICHENDE
ANALYSE
DER
MYELIN-MUTANTEN:
55
A)
PLP-/
B)
MBP-/
(SHIVERER)
C)
MAG-/
D)
MAG-/-;PLP-/
E)
PLP-/-;MBP-/
F)
PLP-/-;MBP-/-;MAG-/
5.1.
GENOTYPISIERUNG
55
5.2.
BESCHREIBUNG
DES
PHAENOTYPS
55
5.3.
RNA-ANALYSE
_
57
5.3.1.
NORTHERN-BLOT
HYBRIDISIERUNGSANALYSE
58
5.3.2.
QUANTITATIVE
RT-PCR
ANALYSE
58
5.3.3.
MICRO-ARRAY
RNA
ANALYSE
59
5.4.
MYELIN
UND
PROTEINANALYSE
61
5.5.
LIPIDANALYSE
63
5.6.
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
ANALYSE
66
5.7.
VERHALTENSPHYSIOLOGIE
71
5.7.1.
FUSSABDRUCKMUSTER
71
5.7.2.
INCLINED
GRID
72
5.7.3.
HORIZONTAL
BRIDGEL
HORIZONTAL
WIRE
72
5.7.4.
DESCENDING
A
VERTICALPOLE
74
5.7.5.
OPEN
FIELD
75
5.7.6.
ROTA-ROD
77
5.7.7.
MBRRIS
WATER
MAZE
78
5.8.
ELEKTRONEUROGRAPHIE
80
5.9.
KRYOKONSERVIERUNG
VON
EMBRYONEN
80
6.
REINIGUNG
DES
PROTEOLIPIDPROTEINS
IN
EINER
DETERGENZ-LOESLICHEN
FORM
UND
GEWINNUNG
VON
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERN
GEGEN
DAS
PLP
81
IV.
ZUSAMMENFASSUNG
84
V.
DISKUSSION
UND
AUSBLICK
87
VI.
MATERIAL
UND
METHODEN
98
1.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
98
2.
BIOCHEMISCHE
METHODEN
102
3.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
106
4.
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
108
5.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
110
6.
ELEKTRONEUROGRAPHIE 110
7.
METHODEN
ZUR
ETABLIERUNG
TRANSGENER
MAUSLINIEN
111
8.
METHODEN
ZUR
VERHALTENSPHYSIOLOGIE
113
9.
SEQUENZ-AUSWERTUNGEN
114
VII.
ANHANG
115
VIII.
LITERATURVERZEICHNUS
122 |
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