Quantifizierung des Intermediärfilamentproteins Vimentin unter Berücksichtigung hämodynamischer Kräfte im vaskulären und endokardialen Endothel:
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2000
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
_
1
1.1.
DAS
ENDOTHELIALE
ZYTOSKELETT.
.1
1.1.1.
AKTINFILAMENTSYSTEM
.
2
1.1.2.
INTERMEDIAERFILAMENTE
.
4
1.2.
FRAGESTELLUNG
.
11
2.
MATERIAL
UND
METHODE
_
14
2.1.
IMMUNHISTOCHEMIE.
.
14
2.1.1.
GEWEBEEINBETTUNG
IN
EPOXIDHARZ
.
14
2.1.2.
SEMIDUENNSCHNITTPRAEPARATE
.
14
2.1.3.
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
UND
ANTIKOERPER
.
15
2.2.
ZELLKULTUR
.
15
2.2.1.
PRAEPARATION
PULMONALARTERIELLER
SCHWEINEENDOTHELZELLEN
(PSEC)
.
15
2.2.2.
ENDOTHELZELLEN
AUS
DER
MENSCHLICHEN
NABELSCHNURVENE
(HUVEC)
.
16
2.3.
BIOCHEMISCHE
ARBEITSVERFAHREN
.
17
2.3.1.
ENDOTHELZELLEN
AUS
DEM
KARDIOVASKULAEREN
SYSTEM
DES
SCHWEINS
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
IHRES
VIMENTINGEHALTS
.
17
2.3.2.
PROTEINBESTIMMUNGSVERFAHREN
.
19
2.3.3.
ENDOTHELZELLCHARAKTERISIERUNG
DURCH
DAS
ZELLANALYSE-SYSTEM
CASY
1*
.
20
2.3.4.
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
MIT
NATRIUMDODECYLSULFAT
(SDS-PAGE)
.
21
2.3.5.
QUANTITATIVE
WESTEM-BLOT-ANALYSE
.
21
2.3.6.
ISOLIERUNG
VON
AKTIN
.
24
2.4.
SYSTEME
ZUR
APPLIKATION
HYDROSTATISCHER
DRUECKE
UND
RHEOLOGISCHER
SCHUBSPANNUNGEN
.
25
2.4.1.
HYDROSTATISCHE
DRUCKAPPARATUR
.
25
2.4.2.
APPLIKATION
RHEOLOGISCHER
SCHUBSPANNUNGEN
.
27
3.
ERGEBNISSE
.
30
3.1.
IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
VIMENTIN
IN
KULTIVIERTEN
ENDOTHELZELLEN.
.
30
3.2.
IMMUNLOKALISATION
VON
VIMENTIN
IM
ENDOTHEL
DES
.
HOCH
UND
NIEDERDRUCKSYSTEMS
DES
SCHWEINS
.
31
3.2.1.
HERZ
UND
HERZKLAPPEN
.
31
3.2.2.
GEFAESSE
.
34
3.3.
QUANTITATIVE
WESTERN-BLOT-ANALYSE:
VALIDIERUNG
DER
.
METHODE
AM
STRUKTURPROTEIN
AKTIN
.
37
3.3.1.
REINIGUNG
VON
AKTIN
UND
FESTLEGUNG
DES
LINEARITAETSBEREICHES
FUER
DIE
QUANTITATIVE
WESTERN-BLOT-ANALYSE
.
37
3.3.2.
VALIDIERUNG
DER
QUANTIFIZIERUNG
IM
LINEARITAETSBEREICH
VON
AKTIN
.
41
3.3.3.
BESTIMMUNG
DES
AKTINGEHALTES
IN
KULTIVIERTEN
PSEC
.
41
3.4.
QUANTIFIZIERUNG
VON
VIMENTIN
IM
ENDOTHEL
DES
.
HOCH
UND
NIEDERDRUCKSYSTEMS
DES
SCHWEINS
.
45
3.4.1.
FESTLEGUNG
DES
LINEARITAETSBEREICHES
FUER
DIE
QUANTITATIVE
WESTEM-BLOT-ANALYSE
VON
VIMENTIN
.
45
3.4.2.
VALIDIERUNG
DER
METHODE
IM
LINEARITAETSBEREICH
VON
VIMENTIN
.
49
3.4.3.
PRAEPARATION
VON
ENDOKARDIALEN
UND
VASKULAEREN
ENDOTHELZELLEN
.
50
3.4.4.
BESTIMMUNG
DES
RELATIVEN
VIMENTINGEHALTES
IM
ENDOTHEL
DES
RECHTEN
UND
LINKENVENTRIKELS
.
50
3.4.5.
BESTIMMUNG
DES
ABSOLUTEN
VIMENTINGEHALTES
IM
ENDOTHEL
DES
RECHTEN
UND
LINKEN
VENTRIKELS
.
56
3.4.6.
DER
VIMENTINGEHALT
IM
ENDOTHEL
DES
RECHTEN
UND
LINKEN
VORHOFT
.
58
3.4.7.
BESTIMMUNG
DES
RELATIVEN
VIMENTINGEHALTES
IM
ENDOTHEL
VON
VENA
CAVA
INFERIOR
UND
AORTA
.
61
3.4.8.
BESTIMMUNG
DES
ABSOLUTEN
VIMENTINGEHALTES
IM
ENDOTHEL
VON
VENA
CAVA
INFERIOR,
TRUNCUS
PUHNONALIS,
AORTENBOGEN,
THORAKALER
UND
ABDOMINALER
AORTA
.
61
3.5.
MECHANISCHE
BEANSPRUCHUNG
UND
IHRE
AUSWIRKUNG
AUF
DEN
VIMENTINGEHALTENDOTHELIALER
ZELLEN
.
66
3.5.1.
APPLIKATION
VON
HYDROSTATISCHEM
DRUCK
AUF
KULTIVIERTE
ENDOTHELZELLEN
.
67
3.5.2.
APPLIKATION
VON
RHEOLOGISCHER
SCHUBSPANNUNG
AUF
KULTIVIERTE
ENDOTHELZELLEN.
70
4.
DISKUSSION
----------------------------------------------------------------------------------------
72
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
84
6.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
_
86
7.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
_
89 |
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