Beeinflußbarkeit der leukozytären Aufnahme von Antisense-Oligodesoxynukleotiden gegen Tumor-Nekrose-Faktor-Alpha in Vollblut:
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2000
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5
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
9
1.1
FRAGESTELLUNG.
9
1.2
ANTISENSE-OLIGODESOXYNUKLEOTIDE.
11
1.2.1
DEFINITION
UND
WIRKMECHANISMUS
.
11
1.2.2
CHEMISCHE
MODIFIKATIONEN
.
13
1.2.3
ANWENDUNGSBEREICHE.
15
1.3
KATIONISCHE
LIPIDE
IM
VERGLEICH
ZU
ANDEREN
TRANSFEKTLONSMETHODEN.
19
1.4
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
.
20
1.4.1
SYNTHESE
UND
STRUKTUR
.
20
1.4.2
PHYSIOLOGISCHE
UND
PATHOPHYSIOLOGISCHE
WIRKUNGEN
.
22
1.4.3
THERAPEUTISCHE
HEMMUNG
DER
SYNTHESE
.
23
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.27
2.1
VORBEREITUNG
DER
ZELLMEDIEN
.
27
2.1.1
NATIVES
VOLLBLUT
.
27
2.1.2
SERUM
.
27
2.1.3
SERUM-ULTRAFILTRAT
.
27
2.1.4
ZELLKULTURMEDIUM.
29
2.2
PRAEPARATION
DER
PERIPHEREN
BLUTZELLEN.
29
2.3
OLLGONUKLEOTLDE
UND
KATIONISCHES
LIPID
.
29
2.4
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTLDEN
IN
LEUKOZYTEN.
31
2.4.1
INKUBATION
UND
VORBEREITUNG
DER
PROBEN
ZUR
MESSUNG
.
31
6
INHALT
2.4.2
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
33
2.4.3
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
37
2.5
SUPPRESSION
DER
LLPOPOLYSACCHARID-STLMULLERTEN
TUMOR-NEKROSE
FAKTOR-A-SYNTHESE
DURCH
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTLDE
IN
VOLLBLUT
.
39
2.5.1
VORBEREITUNG
DER
ZELLSUSPENSIONEN
UND
VERSUCHSABLAUF
.
39
2.5.2
RADIOIMMUNOASSAY
FUERTUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
.
40
2.6
STATISTIK
.
43
3
ERGEBNISSE
.45
3.1
SPONTANE
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
IN
HUMANE
LEUKOZYTEN
.
45
3.1.1
UNTERSCHIEDE
BEI
DEN
SUBPOPULATIONEN
VON
LEUKOZYTEN
.
45
3.1.2
WIRKUNG
DER
ANTIKOAGULANTIEN
HEPARIN
UND
EDTA
AUF
DIE
SPONTANE
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
.
49
3.1.3
EINFLUSS
DER
ZWEIWERTIGEN
KATIONEN
KALZIUM
UND
MAGNESIUM
AUF
DIE
HEMMUNG
DER
SPONTANEN
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
DURCH
EDTA
.
55
3.2
DURCH
KATIONISCHE
LIPIDE
VERMITTELTE
LEUKOZYTAERE
AUFNAHME
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
IN
VOLLBLUT
.
60
3.2.1
UNTERSCHIEDE
BEI
DEN
SUBPOPULATIONEN
VON
LEUKOZYTEN
.
60
3.2.2
EINFLUSS
VON
SERUMPROTEINEN
AUF
DIE
EFFIZIENZ
VON
LIPOFECTIN
.
65
3.2.3
WIRKUNG
VON
LIPOFECTIN
IN
ABHAENGIGKEIT
ZWEIWERTIGER
KATIONEN
.
67
3.2.4
DEFINITION
EINES
OPTIMIERTEN
VOLLBLUTMODELLS
FUER
DIE
LIPOFECTIN-VERMITTELTE
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
.
72
3.2.5
WIRKUNG
VON
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDEN
GEGEN
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-AIN
VOLLBLUT
.
74
3.2.6 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
VERIFIZIERUNG
DER
BEFUNDE
.
75
3.3
UEBERSICHT
UEBER
DIE
EXPERIMENTELLEN
BEFUNDE
.
78
INHALT
7
4
DISKUSSION
.
81
4.1
METHODENDISKUSSION
.
81
4.1.1
VOLLBLUTZELLEN
UND
ZELLMEDIEN
.
81
4.1.2
INKUBATION.
82
4.1.3
OLIGONUKLEOTIDE
UND
LIPOFECTIN
.
83
4.1.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE
UND
FLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
84
4.1.5 SUPPRESSION
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
DURCH
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE.
85
4.2
BEWERTUNG
DER
EIGENEN
BEFUNDE
IM
VERGLEICH
MIT
DER
LITERATUR
.87
4.2.1
SPONTANE
LEUKOZYTAERE
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
IN
VOLLBLUT
.
87
4.2.2 LIPOFECTIN-VERMITTELTE
LEUKOZYTAERE
OLIGONUKLEOTIDAUFNAHME
IN
VOLLBLUT
.
94
4.3
KLINISCHE
RELEVANZ
UND
AUSBLICK.
103
4.3.1
DIE
SUPPRESSION
DER
SYNTHESE
VON
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR-A
.
103
4.3.2
KLINISCHE
ANWENDUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
104
5
ZUSAMMENFASSUNG
.105
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
109
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
.
133
DANKSAGUNGEN
.
137
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
138
LEBENSLAUF
.
141 |
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