Neue Strategien zur Analytik cyanobakterieller Hepatotoxine:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2000
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| Beschreibung: | Jena, Univ., Diss., 2000 |
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INHALTSVERZEICHNIS
L
THEORETISCHER
TEIL
1
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ZUR
PROBLEMATIK
DER
CYANOBAKTERIENTOXINE
1
1.1.1
CYANOBAKTERIENTOXINE:
EINE
UEBERSICHT
3
1.1.2
MICROCYSTINE
UND
NODULARIN
5
1.1.2.1
CHEMISCHE
STRUKTUR
UND
STRUKTURVARIANTEN
5
1.1.2.2
TOXINBILDENDE
SPEZIES
11
1.1.2.3
TOXIZITAET
14
1.1.2.4
RECHTLICHE
REGELUNGEN
18
1.2
ANALYTISCHE
AUSGANGSLAGE
18
1.2.1
BESTIMMUNGSMETHODEN
FUER
MICROCYSTINE
UND
NODULARIN
18
1.2.1.1
BIOLOGISCHE
TESTS
19
1.2.1.2
BIOCHEMISCHE
TESTS
19
1.2.1.3
CHEMISCHE
BESTIMMUNGSVERFAHREN
20
1.2.1.3.1
EXTRAKTION
21
1.2.1.3.2
EXTRAKTREINIGUNG
UND
KONZENTRIERUNG
21
1.2.1.3.3
HPLC-TRENNUNG
UND
TOXINBESTIMMUNG
23
1.2.1.3.3.1
BESTIMMUNG
NACH
HPLC-TRENNUNG
DURCH
UV-DETEKTION
24
1.2.1.3.3.2
BESTIMMUNG
NACH
HPLC-TRENNUNG
DURCH
25
MASSENSPEKTROMETRIE
1.2.2
PEPTIDHYDROLYSE
UND
AMINOSAEUREBESTIMMUNG
27
1.2.2.1
HYDROLYSE
28
1.2.2.1.1
"KLASSISCHE"
HYDROLYSEVERFAHREN
28
1.2.2.1.2
MIKROWELLENHYDROLYSE
29
1.2.2.2
ENANTIOSELEKTIVE
AMINOSAEUREANALYSE
30
1.2.2.2.1
HRGC-VERFAHREN
31
1.2.2.2.2
KAPILLARELEKTROPHORESE
31
1.2.2.2.3
HPLC-VERFAHREN
31
1.2.2.2.3.1
HPLC-TRENNUNG
MIT
CHIRALEN
SAEULEN
31
1.2.2.2.3.2
HPLC-TRENNUNG
MIT
CHIRALEN
MODIFIERN
IM
ELUENTEN
32
1.2.2.2.3.3
STEREOSPEZIFISCHE
DERIVATISIERUNGEN
UND
HPLC-TRENNUNGEN
AN
32
UMKEHRPHASEN
2.
PROBLEME
UND
ZIELSTELLUNG
DER
ARBEIT
35
II
.
EXPERIMENTELLER
TEIL
37
3.
ENTWICKLUNG
EINES
HPLC-VERFAHRENS
ZUR
BESTIMMUNG
VON
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
37
3.1
EXTRAKTION
DER
TOXINE
37
3.2
CLEAN-UP
VON
ROHEXTRAKTEN
UND
KONZENTRIERUNG
VON
WASSERPROBEN
37
3.2.1
VERSUCHE
ZUR
FESTPHASENEXTRAKTION
(SPE)
38
3.2.2
DISKUSSION
DER
WAHL
DER
SPE-KARTUSCHE
38
3.2.3
OPTIMIERUNG
DES
CLEAN-UP-VERFAHRENS
MIT
EINER
CI
8
KARTUSCHE
39
3.2.4
OPTIMIERUNG
DES
CLEAN-UP-VERFAHRENS
MIT
EINER
PHENYL
KARTUSCHE
41
3.2.5
ZUSAMMENFASSUNG
DER
VERSUCHE
ZUR
SPE
AN
CI
8
BZW.
PHENYL-KARTUSCHEN
44
3.3
GELPERMEATIONSCHROMATOGRAPHIE
(GPC):
EIN
LEISTUNGSFAEHIGES
VERFAHREN
ZUR
PROBENAUFARBEITUNG
45
3.3.1
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
DER
GPC
45
3.3.2
ENTWICKLUNG
EINES
GPC-VERFAHRENS
ZUR
EXTRAKTREINIGUNG
46
3.3.2.1
WAHL
DER
SAEULE
FUER
DIE
GPC
46
3.3.2.2
WAHL
DER
MOBILEN
PHASE
FUER
DIE
GPC
47
3.3.2.3
OPTIMIERUNG
DES
ZEITFENSTERS
FUER
DIE
GPC
49
3.3.2.4
ERMITTLUNG
DER
WIEDERFINDUNG
UND
LINEARITAET
BEI
EINSATZ DER
GPC
ZUR
EXTRAKTREINIGUNG
50
3.3.3
ZUSAMMENFASSUNG
DES
ENTWICKELTEN
GPC-VERFAHRENS
ZUR
EXTRAKTREINIGUNG
51
3.4
CHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
UND
SELEKTIVE
DETEKTION
52
3.4.1
OPTIMIERUNG
DER
HPLC/UV-METHODE
52
3.4.1.1
WAHL
DER
STATIONAEREN
PHASE
52
3.4.1.2
WAHL
DER
MOBILEN
PHASE
52
3.4.1.3
LINEARITAET
UND
REPRODUZIERBARKEIT
DER
UV-DETEKTION
53
3.4.1.4
EINSATZ
DES
DIODENARRAY-DETEKTORS
(DAD)
54
3.4.1.5
DIE
OPTIMIERTE
HPLC/UV/DAD-METHODE
55
3.4.2
OPTIMIERUNG
DER
HPLC/MS-METHODE
55
3.4.2.1
DAS
MASSENSPEKTROMETER
55
3.4.2.2
UEBERPRUEFUNG
DER
LONISIERBARKEIT
DER
MICROCYSTINE
UND
DES
NODULARINS
55
3.4.2.3
WAHL
DER
CHROMATOGRAPHISCHEN
BEDINGUNGEN
56
3.4.2.4
WAHL
DER
DETEKTIONSBEDINGUNGEN
57
3.4.2.5
LINEARITAET
UND
REPRODUZIERBARKEIT
DER
MS-DETEKTION
59
3.4.3
VERGLEICH
DER
UV-DETEKTION
UND
DER
MS-DETEKTION
59
4.
ENTWICKLUNG
VON
VERFAHREN
ZUR
BESTIMMUNG
DER
61
AMINOSAEUREZUSAMMENSETZUNG
VON
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
4.1
ENANTIOSELEKTIVE
HPLC-BESTIMMUNG
DER
IN
MICROCYSTINEN
UND
61
NODULARIN
VORLIEGENDEN
AMINOSAEUREN
4.1.1
ANALYTISCHE
AUSGANGSLAGE
61
4.1.2
OPTIMIERUNG
EINER
HPLC-METHODE
MIT
VORSAEULEN-
62
DERIVATISIERUNG
MIT
OPA/IBC
ZUR
BESTIMMUNG
DER
IN
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
VORLIEGENDEN
AMINOSAEUREN
4.1.2.1
WAHL
DER
STATIONAEREN
PHASE
62
4.1.2.2
WAHL
DER
MOBILEN
PHASE
62
4.1.2.3
PARAMETER
BEI
DER
FLUORESZENZDETEKTION
65
4.1.2.4
OPTIMIERUNG
DER
DERIVATISIERUNGSBEDINGUNGEN
65
4.1.2.5
WAHL
DES
CHIRALEN
DERIVATISIERUNGSREAGENZES:
IBLC
VERSUS
65
IBDC
4.1.2.6
VERSUCH
DER
MASSENSPEKTROMETRISCHEN
ABSICHERUNG
DER
67
OPA/IBDC-DERIVATE
DER
IN
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
VORLIEGENDEN
AMINOSAEUREN
4.1.3
VALIDIERUNG
DER
OPTIMIERTEN
ENANTIOSELEKTIVEN
HPLC-
67
BESTIMMUNG
DER
IN
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
VORLIEGENDEN
AMINOSAEUREN
4.2 MIKROWELLENHYDROLYSE
VON
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
69
4.2.1
WAHL
DES
HYDROLYSESYSTEMS
69
4.2.2
ENTWICKLUNG
EINES
VERFAHRENS
ZUR
MIKROWELLENHYDROLYSE VON
71
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
4.2.2.1
VORBEREITUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
HYDROLYSE-VERSUCHE
71
4.2.2.1.1
MIKROWELLENHYDROLYSE
71
4.2.2.1.2
YYKLASSISCHE
"
HYDROLYSE
71
4.2.2.2
UEBERPRUEFUNG
DER
STABILITAET
DER
AMINOSAEUREN
UNTER
71
HYDROLYSEBEDINGUNGEN
4.2.2.3
WAHL
DERHYDROLYSETEMPERATUR
73
4.2.2.4
WAHL
DER
HYDROLYSEZEIT
74
4.2.2.5
STOERUNGEN
DER
CHROMATOGRAPHISCHEN
TRENNUNG
DER
77
MICROCYSTIN-HYDROLYSATE
4.2.2.OE
NACHWEIS
DER
GENERELLEN
ANWENDBARKEIT
DER
ENTWICKELTEN
78
METHODE
ZUR
MIKROWELLENHYDROLYSE
VON
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
4.2.3
ZUSAMMENFASSUNG
DER
VERSUCHE
ZUR
MIKROWELLENHYDROLYSE
78
VON
MICROCYSTINEN
UND
NODULARIN
5.
EINSATZ
DER
ENTWICKELTEN
VERFAHREN
ZUR
IDENTIFIZIERUNG
80
UND
QUANTITIATIVEN
BESTIMMUNG
VON
MICROCYSTINEN
BZW.
NODUIARIN
AUS
CYANOBAKTERIEN
5.1
QUANTITATIVE
HPLC-BESTIMMUNG
VON
NODUIARIN
IM
RAHMEN
80
EINES
MESOKOSMOS-EXPERIMENTES
MIT
NATUERLICHEN
PHYTOPLANKTON-GEMEINSCHAFTEN
AUS
DER
OSTSEE
5.1.1
PHYTOPLANKTON-GEMEINSCHAFT
80
5.1.2
HPLC/UV-BESTIMMUNG
VON
NODUIARIN
AUS
CYANOBAKTERIEN
AUF
81
GLASFASERFILTEM
5.2
IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTITATIVE
BESTIMMUNG
VON
83
MICROCYSTINEN
AUS
EINER
MICROCYSTIS
AERUGINOSA-PROBE
AUS
EINEM
BINNENSEE
5.2.1
EXTRAKTION
DES
CYANOBAKTERIENMATERIALS
83
5.2.2
HPLC/UV-BESTIMMUNG
DER
MICROCYSTINE
83
5.2.3
REINIGUNG
DER
EXTRAKTE
DURCH
GPC
83
5.2.4
HPLC/MS-BESTIMMUNG
DER
MICROCYSTINE
85
5.2.5
MIKROWELLENHYDROLYSE
DER
ISOLIERTEN
MICROCYSTINE
UND
86
IDENTIFIZIERUNG
DER
AMINOSAEUREN
NACH
STEREOSPEZIFISCHER
HPLC-TRENNUNG
ALS
OPA/IBDC-DERIVATE
5.3
IDENTIFIZIERUNG
UND
QUANTIFIZIERUNG
VON
MICROCYSTINEN
NACH
87
MICROCYSTIS
AERUGINOSA-BLUETEN
IN
DER
BLEILOCH-TALSPERRE
5.3.1
MICROCYSTIS-BLUETEN
IN
DER
BLEILOCH-TALSPERRE
87
5.3.2
HPLC/UV-BESTIMMUNG
DER
MICROCYSTINE
88
5.3.3
EXTRAKTREINIGUNG
MITTELS
SPE
AN
CI
8-KARTUSCHEN
88
5.3.4
REINIGUNG
DES
ROHEXTRAKTES
MITTELS
GPC
88
5.3.5
HPLC/MS-BESTIMMUNG
DER
MICROCYSTINE
UND
MS
90
ABSICHERUNG
DER
ERGEBNISSE
5.3.6
BESTIMMUNG
DES
GEHALTES
AN
FREIEN
MICROCYSTINEN
IM
WASSER
91
HI.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
93
6.
DAS
GESAMTKONZEPT
IM
UEBERBLICK
93
7.
ZUSAMMENFASSUNG
95
IV.
LITERATURVERZEICHNIS
100
V.
ANHANG
117 |
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| author | Reichelt, Michael |
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