Oligomerisierung von Peptidhormonrezeptoren und deren funktionelle Beeinflussung durch verkürzte Rezeptorformen:
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
EIGENSCHAFTEN
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
2
1.1.1
REZEPTORVERMITTELTE
AKTIVIERUNG
HETEROTRIMERER
G-PROTEINE
4
1.1.2
ZELLULAERE
EFFEKTORSYSTEME
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
7
1.1.3
REGULATIONSMECHANISMEN
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
8
1.1.4
SPLEISSVARIANTEN
UND
ISOFORMEN
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
10
1.2.
DIE
UNTERGRUPPE
DER
PEPTIDHORMONREZEPTOREN
13
1.2.1
PHYSIOLOGIE
DES
GNRH-REZEPTORS
13
1.2.2
AUFBAU
UND
STRUKTUR
DES
MENSCHLICHEN
GNRH-REZEPTORS
14
1.2.3
DER
GNRH-REZEPTOR
UND
SEINE
SIGNALTRANSDUKTION
17
1.2.4
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DES
V2-VASOPRESSIN-REZEPTORS
18
1.3
FEHLFUNKTIONEN
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
UND
ERKRANKUNGEN
21
2.
ZIELSETZUNG
22
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
24
3.1
HERSTELLER
UND
LIEFERFIRMEN
24
3.2
CHEMIKALIEN
UND
ZUBEHOER
25
3.3
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
29
3.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
29
3.5
MEDIEN,
LOESUNGEN
UND
PUFFER
29
3.6
ZELLKULTUR
30
3.7
RT-PCR
UND
KLONIERUNG
AUS
MRNA
MENSCHLICHER
HYPOPHYSE
31
3.8
HERSTELLUNG
STABIL
GNRH-REZEPTOR-EXPRIMIERENDER
ZELLEN
32
3.9
GERICHTETE
MUTAGENESE
UND
MODIFIKATION
33
3.9.1
EINFUEGEN
EINES
HAEMAGGLUTININ-EPITOPES
33
3.9.2
EINFUEGEN
EINES
FLAG-EPITOPES
33
3.9.3
HERSTELLUNG
VON
REZEPTORFRAGMENTEN
34
3.10
RADIOLIGANDEN-BINDUNG
35
3.11
FUNKTIONELLESTUDIEN
37
3.11.1
MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
INOSITOLPHOSPHATBILDUNG
37
3.11.2
MESSUNG
DES
INTRAZELLULAEREN
CAMP-GEHALTS
37
3.11.3
PHOTOAFFINITAETSMARKIERUNG
REZEPTOR-AKTIVIERTER
G-PROTEINE
38
3.12
IMMUNOLOGISCHE
STUDIEN
39
3.12.1
IMMUNPRAEZIPITATION
VON
PEPTIDHORMONREZEPTOREN
39
3.12.2
IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPIE 40
3.12.3
ELISA-METHODEN
40
4.
ERGEBNISSE
42
4.1
KLONIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
DES
MENSCHLICHEN
GNRH-REZEPTORS
UND
EINER
SPLEISSVARIANTE
42
4.1.1
HYDROPHOBIZITAETSANALYSE
DES
GNRH-REZEPTORS
UND
DER
SPLEISSVARIANTE
46
4.2
EXPRESSION
DER
GNRH-REZEPTORVARIANTEN
48
4.2.1
PROTEINNACHWEIS
UND
ZELLULAERE
LOKALISATION
DER
GNRH-REZEPTORVARIANTEN
48
4.2.2
FUNKTIONELLE
EXPRESSION
DER
GNRH-REZEPTORVARIANTEN
51
4.2.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
G-PROTEIN-INTERAKTION
DES
GNRH-REZEPTORS
53
4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
FUNKTION
DER
SPLEISSVARIANTE
DES
GNRH-REZEPTORS
55
4.3.1
NEGATIVE
BEEINFLUSSUNG
DER
GNRH-VERMITTELTEN
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
DIE
SPLEISSVARIANTE
55
4.3.2
SPEZIFITAET
DER
SIGNALINHIBITION
DURCH
DIE
SPLEISSVARIANTE
DES
GNRH-REZEPTORS
56
4.4
MECHANISMUS
DER
INHIBITION
DURCH
DIE
GNRH-REZEPTORISOFORM
59
4.4.1
UNABHAENGIGE
FALTUNGSDOMAENEN
DES
GNRH-REZEPTORS
59
4.4.2
INHIBITION
DES
INTRAZELLULAEREN
GNRH-REZEPTOR-TRANSPORTES
DURCH
DIE
SPLEISSVARIANTE
62
4.4.3
NACHWEIS
DER
GNRH-REZEPTOR-OLIGOMERISIERUNG
63
4.5
NACHWEIS
DER
OLIGOMERISIERUNG
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
AM
BEISPIEL
DES
V2-VASOPRESSIN-REZEPTORS
66
4.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
OLIGOMERISIERUNGS-INTERAKTIONS-BEREICHE
MIT
REZEPTORBRUCHSTUECKEN
DES
V2-VASOPRESSIN-REZEPTORS
68
5.
DISKUSSION
70
5.1
SPLEISSVARIANTEN
UND
ISOFORMEN
G-PROTEIN-GEKOPPELTER
REZEPTOREN
ALS
DIREKTE
REGULATOREN
VON
REZEPTORFUNKTION
71
5.2
G-PROTEIN-GEKOPPELTE
REZEPTOREN
ALS
OLIGOMERE
REZEPTORKOMPLEXE
78
6.
ZUSAMMENFASSUNG
84
7.
LITERATUR
87
8.
DANKSAGUNGEN
98
9.
LEBENSLAUF
99
10.
PUBLIKATIONEN
100 |
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