Mutationelle und regulatorische Veränderungen der TSH-Rezeptor-abhängigen Signaltransduktion bei Schilddrüsentumoren:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
L
EINLEITUNG_
I
1.1 GUANINNUKLEOTID-BINDENDEN PROTEINE (G-PROTEINE) 1
1.2 G-PROTEINE AKTIVIERUNG 3
1.3 TSH-REZEPTOR
5
1.4 MUTATIONEN IM G*A-GEN (GSP-MUTATIONEN) UND IM TSH-
REZEPTOR-GEN
6
1.5 PATHOGENESE VON SCHILDDRUESENADENOMEN 8
1.6 ZIELSETZUNG DER DISSERTATION
9
2.
MATERIAL UND METHODEN_ H
2.1 ALLGEMEINE HINWEISE
11
2.1.1
ETHANOLPRAEZIPITATION
H
2.1.2
PHENOL/CHLOROFORMEXTRAKTION
11
2.2 HAEUFIG VERWENDETE PUFFER 12
2.3 GEWEBE
12
2.4 PRAEPARATION VON PROTEINEN UND BESTIMMUNG DER
PROTEINKONZENTRATION
13
2.4.1 PRAEPARATION VON GESAMT-PROTEIN AUS GEWEBE 13
2.4.2 PRAEPARATION VON PLASMAMEMBRANPROTEINEN AUS GEWEBE 13
2.4.3 FAELLUNG VON PROTEINEN 14
2.4.4 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 14
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
_
II
2.5 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 15
2.5.1 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE 15
2.6 IMMUNHISTOCHEMISCHE NACHWEISE 16
2.6.1 TMMIINHISTOCHEMISEHE DARSTELLUNG DER A-UNTEREINHEITEN
DER GS-PROTEINE 16
2.7 ADP-RIBOSYLIERUNG VON G-PROTEINEN 17
2.7.1 ADP-RIBOSYLIERUNG VON GSA-PROTEINEN 17
2.7.2 ADP-RIBOSYLIERUNG VON GIA-PROTEINEN 18
2.8 MESSUNG DER ADENYLATZYKLASEAKTIVITAET 18
2.9 METHODEN ZUR PRAEPARATION VON DNA 19
2.9.1 ISOLIERUNG VON GENOMISCHER DNA 19
2.9.2 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 20
2.9.2.1 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA IM ANALYTISCHEN
MASSSTAB 20
2.9.2.2 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA IM PRAEPARATIVEN
MASSTAB 20
2.10 METHODEN ZUR CHARAKTERISIERUNG UND
AMPLEFIZBERUNG VON DNA 21
2.10.1 RESTRIKTION VON DNA 21
2.10.2 AMPLIFIKATION VON DNA DURCH DIE POLYMERASE-
KETTENREAKTION (PCR) 22
2.10.3 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 24
2.10.4 DNA - ELUTION AUS AGAROSEGELEN 24
2.11 KLONIERUNG IN PLASMID VEKTOREN 24
2.11.1 HERSTELLUNG VON YYT- VEKTOREN" 24
2.11.2 LIGATION
25
2.11.3 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN 25
INHALTSVERZEICHNIS
_III
2.12 DNA-SEQUENZIERUNG UND SEQUENZGEL
ELEKTROPHORESE 27
2.12.1 SEQUENZIERUNG DOPPELSTRAENGIGER PLASMID-DNA 27
2.12.2 ELEKTROPHORESE SEQUENZIERTER DNA IN DENATURIERENDEN
POLYACRYLAMID-GELEN 28
2.13 STATISTISCHE AUSWERTUNG 28
3. ERGEBNISSE
_29
3.1 KONSTITUTIVE AKTIVIERUNG DER TSH-REZEPTOR-GS-
PROTEIN-ADENYLATZYKLASE-KASKADE: NACHWEIS VON
MUTATIONEN IM TSH-REZEPTOR- UND GSA-GEN 29
3.1.1 NACHWEIS VON TSH-REZEPTOR-MUTATIONEN IN TOXISCHEN
SCHILDDRUESENADENOMEN 29
3.1.2 NACHWEIS VON G
SA-GEN-MUTATIONEN IN TOXISCHEN
SCHILDDRUESENADENOMEN 31
3.2 EXPRESSION DER GSA-PROTEINE 32
3.2.1 IMMUNHISTOCHEMISCHER NACHWEIS DER GSA-PROTEINE 32
3.2.2 ADP-RIBOSYLIERUNG DER G
SA-PROTEINE 34
3.3 NACHWEIS ADP-RDBOSYLIERTER GKX-PROTEINE: ROLLE
VON GJA-PROTEINE BEI DER REGULIERUNG DER CAMP-
KONZENTRATION 39
3.4 MESSUNG DER ADENYLATZYKLASEAKTIVITAET 44
3.4.1 KORRELATION ZWISCHEN DEN BASALEN UND TSH-STIMULIERTEN
ADENYLATZYKLASE-AKTIVITAETEN (AC) UND DER SIGNALINTENSITAET DER
ADP-RIBOSYLIERTEN-G
SA-PROTEINE BZW. DER ADP-RIBOSYLIERTEN-
GJCX-PROTEINE AUS TOXISCHEN SCHILDDRUESENADENOMEN MIT UND
OHNE PUNKTMUTATIONEN IM TSH-REZEPTOR- ODER G
SA-GEN.
47
INHALTSVERZEICHNIS
IV
4. DISKUSSION
_49
4.1 NACHWEIS VON MUTATIONEN IM TSH-REZEPTOR- UND
GSOC-GEN IN TOXISCHEN SCHILDDRUESENADENOMEN 49
4.2 EXPRESSION DER G
SA- UND GJA-PROTEINE 51
4.3 BASALE UND TSH-STIMULIERTE ADENYLATZYKLASE-
AKTIVITAETEN IN GEWEBEN MIT UND OHNE MUTATIONEN
IM TSH-REZEPTOR-UND G
SA-GEN 52
4.4 BASALE UND TSH-STIMULIERTE ADENYLATZYKLASE-
AKTIVITAETEN IN GEWEBEN MIT NORMALER UND
GESTEIGERTER G
SA-PROTEIN-EXPRESSION 53
4.5 ROLLE DER G*X-PROTEINE BEI DER REGULATION DER
GSA-PROTEINEXPRESSION 54
4.6 SCHLUSSFOLGERUNGEN 55
5. ZUSAMMENFASSUNG
_57
6. LITERATURVERZEICHNIS
_59
* DANKSAGUNG |
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