Isoenzyme von Adenylyl-Cyclasen in Neuroblastomazellinien:
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1998
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ABKUERZUNGEN
.
4
1
EINLEITUNG.
_
.
_
.6
1.1
SIGNALTRANSDUKTION
.
6
1.2
HORMONREZEPTOR
.
8
1.3
G-PROTEINE
.
11
1.4
ISOFORMEN
DER
ADENYLYLCYCLASE
UND
DEREN
REGULATION
.
15
AC-V
1
.
17
1.5
DAS
ADENYLYL-CYCLASE
SYSTEM
IN
NEUROBLASTOMA
ZELLINIEN
.
20
1.6
ZELLDIFFERENZIERUNG
VON
NEUROBLASTOMAZELLEN
DURCH
RETINSAEURE
.
21
1.7
AUSGANGSLAGE
UND
ZIEL
DER
ARBEIT
.
22
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.23
2.1
MATERIAL
.
23
2.2
METHODEN
DER
ZELLKULTUR
.
27
2.2.1
ZELLINIEN
.
27
2.2.2
ZELLDIFFERENZIERUNG
.
27
2.2.3
MEMBRANPRAEPARATION
.
28
2.3
PROTEINCHEMISCHE
UND
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
30
2.3.1
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
30
2.3.2
WESTEMBLOT
.
33
2.3.3
DETEKTION
DURCH
CHEMILUMINESZENZ
.
33
2.3.4
BESTIMMUNG
DER
ADENYLYL-CYCLASE
AKTIVITAET
.
35
2.3.5
PROTEINBESTIMMUNG
.
37
2.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
38
2.4.1
RNA
PRAEPARATION
.
38
2.4.2
A
+
RNA-REINIGUNG
.
40
2.4.3
C-DN
A
SYNTHESE
.
41
2.4.4
DIG-DUTP
MARKIERTE
PCR
.
42
2.4.5
POLYACIYLAMIDGEL
FUER
PCR
PRODUKTE
.
46
2.4.6
SEMIDRYBLOT
.
47
2.4.7
DETEKTION
DER
PCR
PRODUKTE
DURCH
CHEMILUMINESZENZ
.
48
3
ERGEBNISSE
.
_
.50
3.1
DIFFERENZIERUNG
VON
NEUROBLASTOMAZELLEN
DURCH
RETINSAEURE
.
50
3.1.1
LAN-1
.
50
3.1.2
LAN-LD
.
51
3.1.3
SH-SY5Y
.
52
3.1.4
SH-SY5Y-D
.
53
3.1.5
NG-108-15
.
54
3.1.6
NG-108-15
D
.
55
3.2
DETEKTION
DER
ADENYLYL-CYCLASE
AUS
NEUROBLASTOMAZELLMEMBRANEN
MIT
DEM
BBC-2
ANTIKOERPER
IM
WESTEMBLOT
.
56
3.2.1
LAN-L/LAN-LD
.
57
3.2.2
NG
108-15/NG
108-15
D
.
58
3.2.3
SH-SY5
Y/SH-S
Y5
Y
D
.
59
3.3
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
STIMULANTIEN
AUF
DIE
ADENYLYL-CYCLASE
AKTIVITAET
.
60
3.3.1
LAN-1
.
60
3.3.2
LAN-1
D
.
61
3.3.3
NG
108-15
.
62
3.3.4
NG
108-15
D
.
63
3.3.5
SH-SY5Y
.
64
3.3.6
SH-SY5Y
D
.
65
3.4
NACHWEIS
DER
EXPRESSION
VERSCHIEDENER
ADENYLYL-CYCLASETYPEN
DURCH
DIE
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
66
3.4.1
LAN-1
.
66
3.4.2
LAN-1
D
.
67
3.4.3
NG108-15
.
68
3.4.4
NG108-15
D
.
69
3.4.5
SH-SY5Y
.
70
3.4.6
SH-SY5Y
D
.
71
2
4
DISKUSSION.
72
4.1
DIFFERENZIERUNG
VON
NEUROBLASTOMA
ZELLEN
.
72
4.2
DER
EINFLUSS
DER
DIFFERENZIERUNG
VON
NEUROBLASTOMA
ZELLEN
DURCH
RETINSAEURE
AUF
DAS
ADENYLYL-CYCLASE-SYSTEM
.
73
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
.79
6
LITERATUR
-----
.
_
.
_
.81
7
DANKSAGUNG.
_
.
.
91
8
ERKLAERUNG
.92
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