Charakterisierung der molekularen Grundlagen des protektiven Effektes von Shear Stress auf die Apoptose von Endothelzellen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Konstanz
Hartung-Gorre
2000
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 112 S. Ill. 21 cm |
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1. EINLEITUNG 1
1.1. Atherosklerose 1
1.1.1. Klinische Bedeutung 1
1.1.2. Entstehung der Atherosklerose 1
1.1.2.1. Rolle der glatten Muskelzellen 2
1.1.2.2. Rolle des Endothels 2
1.1.3. Risikofaktoren 3
1.1.3.1. Hyperlipoproteinämie und „Oxidiertes Low Density Lipoprotein . 3
1.1.3.2. Hypertonie und Angiotensin II 4
1.1.3.2. Entzündung und TNFa 5
1.1.3.3. Oxidativer Stress und reaktive Sauerstoffspezies 5
1.2. Apoptose 6
1.2.1. Signaltransduktion der Apoptose 6
1.2.1.1. Caspase Kaskade 7
1.2.1.2. Familie der Bcl 2 Proteine 7
1.2.2. Protein Kinasen und Phosphatasen 8
1.2.2.1. MAP Kinase Kaskade 8
1.2.2.2. Proteinkinase B oder Akt 9
1.2.3. Rolle der Apoptose in der vaskulären Biologie 11
1.2.3.1. Angiogenese 11
1.2.3.2. Entstehung der Atherosklerose 11
1.3. Shear Stress 12
1.3.1. Einfluß von Shear Sress auf Struktur und Funktion des Endothels 12
1.3.2. Signal und Mechanotransduktion von Shear Stress 14
1.3.3. Rolle von Shear Stress in der Pathophysiologie der Atherosklerose 14
1.4. Fragestellung 16
2. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. Zellkultur 17
2.1.1. HUVEC 17
2.1.2. COS 7 Zellen 17
2.2. Zelunkubation 18
2.2.1. Verwendete Stimulantien und Inhibitoren 18
2.2.1.1. Kommerzielle Substanzen 18
2.2.1.2. Generierung reaktiver Oi Spezies 18
2.2.1.3. Oxidiertes „Low Density Lipoprotein 18
2.2.2. „Shear Stress Exposition 19
2.2.3. Transfektion 19
2.2.3.1. Antisense Oligonukleotide 19
2.2.3.2. Plasmide 20
2.3. Methoden zur Apoptosedetektion 22
2.3.1. Morphologischer Nachweis von apoptotischen Zellen nach Kernfärbung ....22
2.3.2. DNA Fragmentierung 22
2.3.2.1. DNA Isolation 22
2.3.2.2. Auftrennung der DNA im Agarosegel und Southemblot 22
2.3.3. Apoptose ELISA 23
2.4. Zellviabiljtätsmessung 23
2.5. LDH AKTIVITÄTSMESSUNG 23
2.6. Untersuchung der Genexpression 24
2.6.1. RNA Isolation 24
2.6.2. Auftrennung der RNA im Agarosegel und Northernblot 24
2.6.3. Hybridisierung der Northernblot Membran 24
2.6.4. Isolation von Zellkernen 25
2.6.5. Nukleares Run On Experiment 25
2.7. Methoden zur Proteinanalyse 25
2.7.1. Aufarbeitung der Proteine 25
2.7.1.1. Zytoplasmatische Proteine 25
2.7.1.2. Phosphorylierte Proteine 26
2.7.2. Immunpräzipitation 26
2.7.3. SDS Gelelektrophorese 26
2.7.4. Westernblot 26
2.7.4.1. Semi dryBIot 26
2.7.4.2. Wet Blot 27
2.7.5. Immundetektion von Westernblots 27
2.7.6. Caspase 3 Aktivitätsmessung 28
2.7.7. SOD ELISA 29
2.8. Statistik 29
3. ERGEBNISSE 30
3.1 . APOPTOSE IN HUVEC 30
3.1.1. Induktion von Apoptose 30
3.1.2. Aktivierung von Caspasen 31
3.2. Apoptoseinhibition durch Wachstumsfaktoren 32
3.2.1. Antiapoptotische Wirkung von Insulin und VEGF 32
3.2.2. Rolle der Proteinkinase Akt 33
3.3. Apoptoseinhibition durch Shear Stress 35
3.3.1. Antiapoptotische Wirkung von Shear Stress 35
3.3.2. Rolle der MAP Kinase ERK1/2 37
3.3.2.1. Signaltransduktion der Shear Stress induzierten Aktivierung von
ERK1/2 37
3.3.2.2. Bedeutung der Shear Stress induzierten ERK1/2 Aktivierung für den
antiapoptotischen Effekt von Shear Stress 38
3.3.3. Rolle der ERK1/2 Dephosphorylierung 39
3.3.3.1. Bedeutung der MAP Kinase Phosphatase 1 und 3 für die durch pro
atherosklerotische Faktoren induzierten Dephosphorylierung von
ERK1/2 39
3.3.3.2. Effekt einer dominant negativen MKP 3 Mutanten auf die Ang II
induzierte Dephosphorylierung von ERK2 40
3.3.3.3. Effekt einer dominant negativen MKP 3 Mutanten auf die Ang II
induzierte Apoptose 40
3.3.3.4. Effekt von Shear Stress auf die Ang ll induzierte Dephosphorylierung
von ERK1/2 und die Transkription der MKP 3 41
3.3.3.5. Effekt von Shear Stress auf die MKP 3 Aktivität 42
3.3.4. Rolle der Proteinkinase Akt 43
3.3.4.1. Signaltransduktion der Shear Stress induzierten Aktivierung von Akt ...43
3.3.4.2. Bedeutung der Shear Stress induzierten Akt Aktivierung für den
antiapoptotischen Effekt von Shear Stress 45
3.3.4.3. Substrate von Akt 46
3.3.5. Rolle der Akt Dephosphorylierung 50
3.3.5.1. Mechanismus der TNFcc induzierten Dephosphorylierung von Akt 50
3.3.5.2. Bedeutung der TNFcc induzierten Dephosphorylierung von Akt für die
Induktion vonApoptose 52
3.3.6. Rolle der transkriptionellen Aktivierung der eNOS und antloxidativer Enzyme
durch Shear Stress 52
3.3.6.1. Signaltransduktion der Shear Stress induzierten eNOS Transkription...52
3.3.6.2. Bedeutung der Shear Stress induzierten Aktivierung antioxidativer
Enzyme 55
4. DISKUSSION 59
4.1. Schlüsselrolle der Proteinkinase Akt 61
4.1.1. Signaltransduktion der Akt Aktivierung und Bedeutung für die
Apoptoseinhibition 61
4.1.2. Signaltransduktion der Akt Inhibition und Bedeutung für die
Apoptoseinduktion 63
4.1.3. Bedeutung der Substrate von Akt für die antiapoptotische Wirkung 64
4.2. Schlüsselrolle der MAP Kinase ERK1/2 67
4.2.1. Signaltransduktion der ERK1/2 Aktivierung und Bedeutung für die
Apoptoseinhibition 68
4.2.2. Signaltransduktion der ERK1/2 lnhibition und Bedeutung für die
Apoptoseinduktion 69
4.3. Bedeutung der Regulation der Genexpression der eNOS und antioxidativer
Enzyme 72
4.3.1. Signaltransduktion der eNOS Transkription 72
4.3.2. Rolle der eNOS und antioxidativer Enzyme für die Apoptoseinhibition durch
Shear Stress 73
4.4. Zusammenspiel der Stellglieder der pro und antiapoptotischen Balance.75
5. ZUSAMMENFASSUNG 77
6. LITERATUR 78
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| spelling | Hermann, Corinna Verfasser aut Charakterisierung der molekularen Grundlagen des protektiven Effektes von Shear Stress auf die Apoptose von Endothelzellen Corinna Hermann 1. Aufl. Konstanz Hartung-Gorre 2000 112 S. Ill. 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Zugl.: Frankfurt (Main), Univ., Diss., 1999 Arteriosklerose (DE-588)4068866-5 gnd rswk-swf Shear-Stress (DE-588)4602338-0 gnd rswk-swf Pathogenese (DE-588)4115512-9 gnd rswk-swf Arterie (DE-588)4003066-0 gnd rswk-swf Mediator (DE-588)4132052-9 gnd rswk-swf Endothelzelle (DE-588)4152192-4 gnd rswk-swf Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 gnd rswk-swf Apoptosis (DE-588)4291096-1 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Arterie (DE-588)4003066-0 s Shear-Stress (DE-588)4602338-0 s Endothelzelle (DE-588)4152192-4 s Apoptosis (DE-588)4291096-1 s Mediator (DE-588)4132052-9 s Molekularbiologie (DE-588)4039983-7 s DE-604 Arteriosklerose (DE-588)4068866-5 s Pathogenese (DE-588)4115512-9 s HBZ Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008883099&sequence=000002&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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