GTPasen als zentrale Regulatoren pflanzenspezifischer Prozesse: Isolierung und Charakterisierung von RAB- und ROP-GTPasen aus Arabidopsis thaliana
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
GTPASEN
ALS
MOLEKULARE
SCHALTER
.
1
1.2
KLASSIFIZIERUNG
VON
GTPASEN
.
2
1.3
STRUKTURELLE
MERKMALE
DER
KLEINEN
GTPASEN
.
3
1.4
DIE
FAMILIE
DER
RAB-GTPASEN
.
5
1.4.1
MOLEKULARE
MECHANISMEN
BEIM
VESIKELTRANSPORT
.
5
1.4.2
DIE
SPEZIFITAET
DER
GTPASEN
FUER
EINZELNE
TRANSPORTSCHRITTE
.
7
1.4.3
DIE
FUNKTION
DER
RAB
1
-GTPASEN
.
8
1.4.4
RAB
1
-GTPASEN
IN
PFLANZEN
.
9
1.5
DIE
FAMILIE
DER
RHO-GTPASEN
.
11
1.5.1
MOLEKULARE
MECHANISMEN
DER
KONTROLLE
DES
AKTINSKELETTS
.
11
1.5.2
DIE
EINZELNEN
GTPASEN
UND
HERVORGERUFENE
ZYTOSKELETTAENDERUNGEN
.
12
1.5.3
DIE
ROP-GTPASEN
AUS
PFLANZEN
.
13
2
ZIELSETZUNG
.
14
3
MATERIAL
UND
METHODEN
.
15
3.1
ORGANISMEN
.
15
3.1.1
PFLANZEN
.
15
3.1.2
HEFEN
.
15
3.1.3
BAKTERIEN
.
15
3.2
CHEMIKALIEN
.
16
3.2.1
ENZYME
.
16
3.2.2
SPEZIALCHEMIKALIEN
.
16
3.2.3
FILTER
UND
MEMBRANEN
.
17
3.2.4
FILMMATERIAL
.
18
3.2.5
GERAETE
.
18
3.2.6
DATENVERARBEITUNG
UND
WEB-ROUTINEN
.
18
3.2.7
KULTURMEDIEN
.
19
3.2.8
ANTIBIOTIKE,
HORMONE,
STAMMLOESUNGEN
.
21
3.2.9
CDNA-BANKEN
UND
VEKTOREN
.
21
3.3
NUKLEINSAEUREANALYTIK
.
23
3.3.1
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUS
ORGANISMEN
.
23
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.2
ENZYMATISCHE
REAKTIONEN
.
25
3.3.3
MUTAGENESE
.
27
3.3.4
GELELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
.
29
3.4
METHODEN
ZUR
PROTEINAUFARBEITUNG
.
31
3.4.1
PROTEINEXPRESSION
IN
E.
COLI
.
31
3.4.2
PROTEINISOLIERUNG
AUS
HEFE
.
32
3.4.3
PROTEINISOLIERUNG
AUS
TABAK-BY2-ZELLEN
.
33
3.4.4
PROTEINISOLIERUNG
AUS
PFLANZEN
.
33
3.4.5
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
.
33
3.4.6
PROTEINTRANSFER
AUS
PVDF-MEMBRANEN
.
34
3.4.7
INUNUNDETEKTION
FILTERGEBUNDENER
PROTEINE
.
34
3.4.8
METHODEN
ZUR
GTP-HYDROLYSE
.
35
3.5
E.
COLI
UND
HEFEANALYTIK
.
36
3.5.1
HERSTELLEN
UND
UEBERPRUEFEN
VON
TRANSGENEN
E.
COLI
.
36
3.5.2
HERSTELLEN
UND
UEBERPRUEFEN
VON
TRANSGENEN
HEFEN
.
36
3.5.3
KOMPLEMENTATIONSANALYSE
.
37
3.5.4
7WO-/IYFTRW-INTERAKTIONSTEST
.
38
3.6
METHODEN
ZUR
KULTIVIERUNG,
TRANSFORMATION
UND
ANALYSE
VON
PFLANZEN
.
40
3.6.1
KULTIVIERUNG
VON
^RAWCFO/WIS-SUSPENSIONSZELLEN
.
40
3.6.2
KULTIVIERUNG
VON
TABAK-BY2-SUSPENSIONSZELLEN
.
40
3.6.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
TABAK-BY2-PROTOPLASTEN
.
40
3.6.4
STABILE
INTEGRATION
VON
TRANSGENEN
IN
TABAK-BY2-SUSPENSIONSZELLEN
.
43
3.6.5
PHYSIOLOGISCHE
VERSUCHE
MIT
SUSPENSIONSKULTUREN
.
44
3.6.7
TRANSFORMATION
VON
ARABIDOPSIS
.
45
3.6.8
KULTIVIERUNG
VON
PFLANZEN
.
45
3.6.9
QUALITATIVE
GUS-ANALYSE
.
46
3.7
MIKROSKOPIE
.
47
3.7.1
VISUALISIEREN
VON
ER-KOMPARTIMENTEN
IN
HEFE
UND
PFLANZENZELLEN
.
47
3.7.2
ANFAERBUNG
DES
NUKLEUS
DURCH
DAPI
.
47
3.7.3
VISUALISIEREN
DES
AKTIN-ZYTOSKELETTS
.
47
3.7.4
ANFAERBEN
DER
ZELLWAND
.
48
3.7.5
DETEKTION
VON
GFP-FUSIONSPROTEINEN
.
48
3.7.6
DIGITALE
BILDVERARBEITUNG
.
48
3.8
KONSTRUKTION
VON
GFP-FUSIONSVEKTOREN
.
48
INHALTSVERZEICHNIS
4
ERGEBNISSE
.
51
4.1
ISOLIERUNG
VERSCHIEDENER
GTPASEN
.
51
4.1.1
IMMUNDETEKTION
VON
RAB1-HOMOLOGEN
.
51
4.1.2
ISOLIERUNG
VON
GTPASE-GENEN
.
52
4.2
CHARAKTERISIERUNG
VON
GTPASEN
DER
RAB-FAMILIE
.
56
4.2.1
KOMPLEMENTATION
.
56
4.2.2.
EXPRESSIONSANALYSE
DER
ATRABL
-GENE
.
58
4.2.3
FUNKTIONALITAET
UND
LOKALISIERUNG
VON
GFP-RAB
1
-FUSIONSPROTEINEN
IN
HEFE
.
66
4.2.4
TRANSIENTE
EXPRESSION
VON
GFP-RAB
1
-FUSIONSPROTEINEN
.
69
4.2.5
EXPRESSION
VON
GFP-ATRABLB
IN
ARABIDOPSIS
.
71
4.2.6
ANALYSE
VON
GFP-ATRABLB
IN
TRANSGENEN
BY2-TABAKSUSPENSIONSZELLEN
.
72
4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
GTPASEN
DER
RHO-FAMILIE
.
78
4.3.1
GRUPPENEINTEILUNG
ANHAND
DER
HOMOLOGIE
UND
DES
C-TERMINUS
.
78
4.3.2
KOMPLEMENTATION
.
79
4.3.3
EXPRESSION
DER
ATROP-GENE
.
80
4.3.4
HETEROLOGE
EXPRESSION
VON
ROP-GTPASEN
BZW.
MUTANTEN
UND
DEREN
KINETIK.
80
4.3.5
SUBZELLULAERE
LOKALISIERUNG
.
82
4.3.6
EINE
FUNKTION
FUER
ATROPOE
IN
DER
REGULATION
DES
ZYTOSKELETTS
.
86
4.4
ISOLIERUNG
UND
UNTERSUCHUNG
VON
REGULATORISCHEN
KOFAKTOREN
.
87
4.4.1
HOMOLOGE
ZU
RHOGDI
AUS
ARABIDOPSIS
.
87
4.4.2
ATRABGDIL
AUS
ARABIDOPSIS
.
95
5
DISKUSSION
.
99
5.1
FUER
WELCHE
PFLANZENSPEZIFISCHEN
PROZESSE
WERDEN
GTPASEN
GEBRAUCHT?
.
99
5.2
RAB-GTPASEN
ALS
SPEZIFISCHE
REGULATOREN
ZELLULAERER
PROZESSE
.
100
5.3
BILDEN
ROP-GTPASEN
EINE
EIGENE
GRUPPE
MIT
PFLANZENSPEZIFISCHER
FUNKTION?
108
5.4
PERSPEKTIVEN:
DIE
GTPASE
ALS
REGULIERTER
REGULATOR
.
113
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
114
7
ANHANG
.
116
8
LITERATUR
.
129 |
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