Untersuchungen zur Regulation der lytischen DNA-Replikation des Epstein-Barr-Virus:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
2000
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 2000 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG.!
1.1
DAS
EPSTEIN-BARR
VIRUS
.
2
1.2
DIE
LATENTE
PHASE
DES
EPSTEIN-BARR
VIRUS
.
5
1.3
DIE
LYTISCHE
PHASE
DES
EPSTEIN-BARR
VIRUS
.
5
1.3.1
VIRALE
REPLIKATIONSPROTEINE
.
6
1.3.2
DER
LYTISCHE
REPLIKATIONSURSPRUNG
ORILYT
.
7
1.3.3
REGULATION
DER
LYTISCHEN
REPLIKATION
.
9
1.4
GEZIELTE
DELETION
VON
GENEN
DURCH
"GENE
TARGETING"
.
13
1.5
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
.
17
2
MATERIAL
**YYYYYYYYYYYY***YY**YYYYYY*YY*YY**YYYYYYYY*YYYY*YY****YY*YYYYYYYYYY*****YYYYYY******YYYYYYYY*****YYYYYYYYYY*YY *
18
2.1
ZELLINIEN
.
18
2.2
BAKTERIEN,
HEFEN
UND
PLASMIDE
.
19
2.3
OLIGONUKLEOTIDE
.
21
2.4
PUFFER
UND
MEDIEN
.
22
2.5
ENZYME,
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
SONSTIGES
.
23
2.4
ANTIKOERPER
.
25
3
METHODEN.
.
2
6
3.1
BAKTERIENKULTUR
.
26
3.1.1
VERMEHRUNG
UND
AUFBEWAHRUNG
VON
BAKTERIEN
.
26
3.1.2
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
.
26
3.2
ZELLKULTUR
UND
ANALYSE
VON
ZELLEN
.
27
3.2.1
ZELLINIEN
.
27
3.2.2
AUFBEWAHRUNG
VON
ZELLEN
.
27
3.2.3
ZELLZAEHLUNG
.
28
3.2.4
TRANSFEKTION
VON
ZELLEN
.
28
3.2.5
ISOLIERUNG
VON
RNA
.
29
3.2.6
TRANSIENTER
REPLIKATIONSVERSUCH
.
29
3.2.7
PRAEPARATION
VON
KEMEXTRAKTEN
(DIGNAM
ET
AL.,
1983)
.
30
3.2.8
INFEKTIONEN
VON
RAJI-ZELLEN
MIT
VIRUSUEBERSTAENDEN
.
31
3.3
DNA-ARBEITSTECHNIKEN
.
31
3.3.1
SOUTHERN-BLOT-ANALYSEN
.
31
3.3.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
.
32
3.3.3
PCR-ANALYSEN
.
34
3.3.4
CDNA-BANK-ANALYSEN
.
35
3.3.5
GELRETENTIONS-EXPERIMENTE
.
36
3.3.6
DNASEL-SCHUTZEXPERIMENTE
.
36
3.3.7
METHYLIERUNGS-INTERFERENZ-FOOTPRINTING
.
37
3.4
RNA-ANALYSE
.
38
3.4.1
NORTHERNBLOT-ANALYSEN
.
38
3.4.2
KARTIERUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
DURCH
PRIMERVERLAENGERUNG
.
39
3.5.
PROTEIN-ARBEITSTECHNIKEN
.
40
3.5.1
REINIGUNG
BAKTERIELL
EXPRIMIERTER
PROTEINE
.
40
3.5.2
WESTERNBLOT-ANALYSEN
.
41
4
ERGEBNISSE
.
43
4.1
ISOLIERUNG
TD-BINDENDER
PROTEINE
MIT
HILFE
DES
"ONE
HYBRID
SCREENS"
IN
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
.
45
4.2
ISOLIERUNG
DER
VOLLSTAENDIGEN
CDNAS:
DURCHSUCHEN
EINER
CDNA-BIBLIOTHEK
.
48
4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
GENOMISCHEN
SEQUENZ
VON
TD-BP7
.
50
4.4
ANALYSE
DER
TRANSKRIPTION
DES
TD-BP7-GENS
.
53
4.4.1
NORTHEM-BLOT-ANALYSEN
.
53
4.4.2
REVERSE
TRANSKRIPTASE
PCR
.
54
4.4.3
KOMPETITIVE
PCR
.
55
4.4.4
INVERSE
PCR
.
58
4.4.5
KARTIERUNG
DES
TRANSKRIPTIONSSTARTPUNKTES
DURCH
PRIMERVERLAENGERUNG
.
61
4.5
ANALYSE
DER
RNA-TRANSKRIPTION
DES
TD-BP17-GENS
.
63
4.6
DIE
CDNAS
TD-BP7
UND
TD-BP17
KODIEREN
FUER
UNBEKANNTE
PROTEINE
.
64
4.7
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
GEGEN
TD-BP7
UND
TD
BP17
.
66
4.8
INTERAKTION
VON
TD-BP7
UND
TD-BP17
MIT
DER
"DOWNSTREAM"
KOMPONENTE
VON
ORILYT:
IN
VITRO-BINDUNGSSTUDIEN
.
68
4.8.1
DIE
REKOMBINANTEN
PROTEINE
TD-BP7
UND
TD-BP17
BINDEN
IN
VITRO
AN
DAS
TD-ELEMENT
VON
ORILYT
.
68
4.8.2
METHYLIERUNGS-INTERFERENZ-ANALYSE
DER
PROTEIN-DNA
KONTAKT
PUNKTE
.
72
4.8.3
INTERAKTION
VON
PROTEINEN
AUS
ZELLKERNEXTRAKTEN
MIT
DEM
TD
ELEMENT
.
74
4.9
EINFLUSS
DER
PROTEINE
TD-BP7
UND
TD-BP17
AUF
DIE
LYTISCHE
REPLIKATION
VON
EBV
.
76
4.10
TD-BP7
REPRIMIERT
DIE
BINDUNG
VON
SPL
AN
DAS
TD-ELEMENT
.
79
4.11
DIE
EXPRESSION
VON
TD-BP7
INHIBIERT
DIE
DNA-REPLIKATION
VON
EBV
.
81
4.12
ENTFERNUNG
DES
TD-BP7-GENS
IN
SAEUGERZELLKULTUREN
DURCH
"GENE
TARGETING"
.
84
4.12.1
STRATEGIE
DER
HOMOLOGEN
REKOMBINATION
DES
TD-BP7-GENS
.
85
4.12.2
DELETION
DES
TD-BP7-GENS
IN
SOMATISCHEN
ZELLEN
.
91
4.12.3
ANALYSE
DER
TRANSKRIPTION
NACH
DELETION
DES
TD-BP7-GENS
.
96
5
DISKUSSION.
.
9
8
5.1
CHARAKTERISIERUNG
ZELLULAERER
TD-BINDENDER
PROTEINE
.
99
5.2
DIE
"DOWNSTREAM"-KOMPONENTE
ALS
BINDESTELLE
FUER
ZELLULAERE
PROTEINE
.
101
5.3
DER
LYTISCHE
REPLIKATIONSURSPRUNG
ORILYT
WIRD
NEGATIV
REGULIERT
.
104
5.4
MODELL
FUER
DIE
REGULATION
DER
LYTISCHEN
DNA-REPLIKATION
DES
EPSTEIN-BARR
VIRUS
.
107
5.5
SOMATISCHE
DELETION
VON
ZELLULAEREN
GENEN
ZUR
ANALYSE
DER
GENFUNKTION
.
109
5.6
AUSBLICK
.
110
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
112
7
ABKUERZUNGEN
.113
8
LITERATUR
.
115 |
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