Vergleichende Untersuchungen zum Nachweis von E. coli O157.H7-Stämmen aus künstlich kontaminiertem Rinderhackfleisch unter besonderer Berücksichtigung der immunomagnetischen Separation (IMS):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Giessen
Fachverl. Köhler
1999
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| Schriftenreihe: | Veterinärmedizin
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Autor: Heckötter, Susanne
Jahr: 1999
Inhaltsverzeichnis
INHALTSVERZEICHNIS
Seite
1 EINLEITUNG 1
2 LITERATURÜBERSICHT 3
2.1 Escherichia coli {E. coli) 3
2.2 Gesundheitlich bedenkliche E. coli 3
2.2.1 Verotoxinogene £ coli (VTEC) 7
2.2.2 Enterohämorrhagische E. coli (EHEC) 12
2.2.3 E. co//-SerotypenO157.H7undO157.H 15
2.3 Bedeutung als Krankheitserreger für den Menschen 19
2.4 Bedeutung als Krankheitserreger für das Tier 26
2.5 Epidemiologische Situation 26
2.5.1 Vorkommen bei Mensch und Tier 27
2.5.2 Vorkommen in Lebensmitteln 36
2.6 Bedeutung als Lebensmittelinfektionserreger 41
2.6.1 Sporadische Fälle und endemische Ausbrüche 41
2.6.2 Übertragungswege 45
2.6.3 Bekämpfung und Vorsorgemaßnahmen 49
2.7 Nachweismethoden für VTEC und EHEC unter besonderer 50
Berücksichtigung der Serogruppe 0157
2.7.1 Phänotypische Nachweismethoden 50
2.7.1.1 Zelltests 51
2.7.1.2 Kultivierung 52
2.7.1.3 Biochemische Reaktionen 56
2.7.1.4 Immunoassays 56
2.7.1.5 Immunomagnetische Separation (IMS) 58
2.7.2 Genotypische Nachweismethoden 61
2.8 Feintypisierung 63
Inhaltsverzeichnis 11
3 EIGENE UNTERSUCHUNGEN 66
3.1 Material 66
3.1.1 E. coli O157.H7-Prüfstämme 66
3.1.2 Probenmaterial 66
3.1.3 Nährmedien 67
3.1.3.1 Anreicherungsmedien 67
3.1.3.2 Subkultivierungsmedien 68
3.1.4 Immunomagnetische Separationsvorrichtung 69
3.2 Methode 69
3.2.1 Aufbewahrung und Anzüchtung von Prüfstämmen 69
3.2.2 Erfassung von Mikrofloraanteilen in Rinderhackfleisch 70
3.2.3 Prüfung von Anreicherungs- und Subkultivierungsmedien in Modellversuchen 71
3.2.4 Modellversuche zur immunomagnetischen Separation (IMS) 74
3.2.5 Einmischversuche von E. coli O157.H7 in Rinderhackfleisch 77
3.2.5.1 Anreicherung 77
3.2.5.2 Subkultivierung 77
3.2.5.3 Identifizierung und Bestätigung 77
3.2.6 Statistische Methoden 78
3.3 Ergebnisse 79
3.3.1 Reisolierung von E. coli O157.H7-Prufstämmen unter Berücksichtigung verschiedener Anreicherungs- und Subkultivierungsmedien 79
3.3.1.1 Mikrofloraanteile in Rinderhackfleischproben 79
3.3.1.2 Orientierende Vorversuche zur Auswahl eines geeigneten Subkultivierungsmediums mit optimaler Beimpfungstechnik 80
3.3.1.3 Einmischkonzentrationen der E. co/f O157.H7-Prüfstämme 81
3.3.1.4 Veraleichende Untersuchunaen von siehan 82
Anreicherungsmedien
3.3.2 Reisolierung des £ coli O157.H7-Prüfstammes mit der 88
immunomagnetischen Separation (IMS) in Modellversuchen
Inhaltsverzeichnis
3.3.2.1 Mikrofloraanteile in Rindertiackfleischproben 88
3.3.2.2 Einmischkonzentrationen des £. co//0157. H7-Prüfstammes 90
3.3.2.3 Logistische Regression mit schrittweisem Modellabbau
unter Berücksichtigung paarweiser Wechselwirkungen 91
potentieller Einflußfaktoren
3.3.2.3.1 Modellversuch „Reisolierungsraten des E. coli 0157.H7-
Prüfstammes nach immunomagnetischer Separation (IMS) 91
im Vergleich zum Kontrollverfahren ohne IMS nach fünf-
sowie sechsstündiger Anreicherung
3.3.2.3.2 Modellversuch „Reisolierungsraten des E. coli O157.H7-
Prüfstammes nach immunomagnetischer Separation (IMS) 93
nach sechs- sowie 24stündiger Anreicherung
3.3.2.4 Reisolierungsraten des Prüfstammes nach immunomagnetischer 96
Separation (IMS) im Vergleich zum Kontrollverfahren ohne IMS
3.3.2.4.1 Einfluß unterschiedlicher Anreicherungszeiten (5 h, 6 h) 96
3.3.2.4.2 Einfluß unterschiedlicher Anreicherungs-und 99
Subkultivierungsmedien
3.3.2.4.3 Einfluß unterschiedlichen Probenmaterials (frisch, 102
tiefgefroren gelagert)
3.3.2.4.4 Einfluß unterschiedlicher Einmischkonzentrationen 103
des Prüfstammes
3.3.2.5 Immunomagnetische Separation (IMS) nach sechs- und 105
24stündiger Anreicherung
3.3.2.5.1 Einfluß der Anreicherungs-und Subkultivierungsmedien 107
3.3.2.5.2 Kombination untersuchter Parameter zur Steigerung 109
der Reisolierungsraten
3.3.2.6 Selektivität 112
4 DISKUSSION 116
5 SCHLUSSFOLGERUNGEN 134
6 ZUSAMMENFASSUNG 135
7 SUMMARY 137
8 ANHANG 139
9 LITERATURVERZEICHNIS 143
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