Untersuchungen zur Regulation von Tumor-Nekrose-Faktor alpha bei knochenmarktransplantierten Patienten:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINLEITUNG
.
4
1.
DIE
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
.
4
1.1.
ENTWICKLUNG
UND
ERGEBNISSE
DER
ALLOGENEN
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
.
4
1.2.
PRINZIP
DER
ALLOGENEN
KMT
.
5
1.3.
KOMPLIKATIONEN
DER
ALLOGENEN
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
.
6
2.
ZUR
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
AGVHD
UND
ASSOZIIERTER
KOMPLIKATIONEN
.
9
3.
DER
TUMOR
NEKROSE
FAKTOR
ALPHA
UND
SEINE
LOESLICHEN
REZEPTOREN
.
10
3.1.
ENTDECKUNG
DER
TUMOR
NEKROSE
FAKTOREN
.
10
3.2.
SYNTHESE
UND
STRUKTUR
VON
TNFA
.
11
3.3.
WICHTIGE
EFFEKTE
UND
REGULATOREN
VON
TNFA
.
12
3.4.
SIGNALTRANSDUKTION
VON
TNFA
.
13
3.5.
LOESLICHE
TNF-REZEPTOREN
.
13
4.
LNTERIEUKIN-10
.15
4.1.
STRUKTUR
UND
PRODUKTION
VON
IL-1
0
.
15
4.2.
IL-10-EFFEKTE
.
15
5.
ZIELSETZUNG
DER
DISSERTATION
.16
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
18
1.
MATERIAL
.18
1.1.
CHEMIKALIEN
/
BIOCHEMIKA
.18
1.2.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
19
1.3.
ZELLKULTUR
.
22
1.4.
ENZYME
/
KITS
/
ANTIKOERPER
/
NUKLEINSAEUREN
.
24
1.5.
VERBRAUCHSMATERIAL
/
GERAETE
.
24
1.6.
SOFTWARE
.
25
2.
KNOCHENMARKTRANSPLANTATION
(KMT)
.
25
3.
METHODEN
.
26
3.1.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
26
3.1.1.
ELISA
FUER
HUMANES
TNFA
IN
SEREN
UND
KULTURUEBERSTAENDEN
.
26
3.1.2.
WIEDERFINDUNG
VON
REKOMBINANTEM
HUMANEM
TNFA
IM
TNFA-ELISA
.
27
3.1.3.
IRMA
FUER
LOESLICHE
TNFA-REZEPTOREN
IN
HUMANSEREN
.
28
3.1.4.
ELISA
FUER
HUMANES
IL-1
0
IN
SEREN
UND
KULTURUEBERSTAENDEN
(DNAX)
.
28
3.1.5.
ANTIKOERPERFAERBUNG
ZUR
BESTIMMUNG
DES
MONOZYTENGEHALTS
EINER
ZELLFRAKTION
MITTELS
FACSCAN
.
28
3.2.
ZELLKULTURMETHODEN
.
29
3.2.1
.
BESTIMMUNG
VON
ZELLKONZENTRATIONEN
.
29
3.2.2.
ANZUCHT
VON
ZELLEN
.
29
3.2.2.1.
PRIMAERKULTUREN
.
29
3.2.2.1.1.
KULTUR
PERIPHERER
MONONUKLEAERER
BLUTZELLEN
(PBMNC)
.
29
3.2.2.1.2.
KULTUR
VON
MONOZYTEN
.
30
3.2.2.2.
KULTUR
VON
ZELLINIEN
.
30
3.2.2.2.1.
KULTUR
VON
L929
.
30
3.2.2.2.2.
KULTUR
VON
HL-60
.
31
3.2.2.2.3.
KULTUR
VON
MONO-MAC
6
.
31
3.2.3.
Y-BESTRAHLUNG
VON
ZELLEN
ZUR
ZYTOKININDUKTION
.
31
3.2.4.
GEWINNUNG
VON
KULTURUEBERSTAENDEN
.
32
3.2.5.
BIOASSAY
FUER
TNFA
.
32
3.2.6.
PRAEPARATION
UND
FIXIERUNG
VON
ZELLEN
FUER
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
33
3.3.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
33
3.3.1.
KULTUR
UND
LAGERUNG
PLASMIDTRAGENDER
WIRTSBAKTERIEN
.
33
3.3.2.
PLASMIDISOLIERUNG
AUS
WIRTSBAKTERIEN
.
33
3.3.3.
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
VON
NUKLEINSAEUREN
.
34
3.3.4.
GELELEKTROPHORESE
.
34
3.3.4.1.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
FUER
DNA
.
34
3.3.4.2.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
FUER
RNA
.
35
3.3.5.
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
.
35
3.3.6.
GEWINNUNG
DIGOXIGENIN-MARKIERTER
RNA-PROBEN
.
35
3.3.7.
UEBERPRUEFUNG
DER
MARKIERUNG
VON
RNA-PROBEN
.
36
3.3.8.
DEIONISIEREN
VON
FORMAMID
.
36
3.3.9.
NACHWEIS
VON
ZYTOKINEXPRESSION
AUF
EINZELZELLEBENE
DURCH
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
37
4.
STATISTIK
.
38
III.
ERGEBNISSE
.
39
1.
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DES
IMMUNOLOGISCH
NACHWEISBAREN
TNFA
IN
KULTURUEBERSTAENDEN
UND
SEREN
.
39
1.1.
KULTURUEBERSTAENDE
UNSTIMULIERTER
UND
STIMULIERTER
PBMNC
.
40
1.2.
SEREN
KNOCHENMARKTRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
.
41
1.3.
SEREN
KNOCHENMARKTRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
UNTER
BEHANDLUNG
MIT
DEM
MONOKLONALEN
ANTI-HUMAN-TNFA
ANTIKOERPER
MAK
195
.
43
2.
LOESLICHE
REZEPTOREN
FUER
TNFA
IN
SEREN
KNOCHENMARK
TRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
.
46
2.1.
WIEDERFINDUNG
VON
TITRIERTEM
REKOMBINANTEM
HUMANEN
TNFA
IN
SEREN
KNOCHENMARKTRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
IM
TNFA-ELISA
.
46
2.2.
MAXIMALE
SERUMSPIEGEL
AN
LOESLICHEN
REZEPTOREN
FUER
TNFA
(QUERSCHNITTUNTERSUCHUNG)
.
47
2.3.
SERUMSPIEGEL
IM
VERIAUF
DER
KMT
(LAENGSSCHNITTUNTERSUCHUNG)
.
53
2.4.
BEZIEHUNG
VON
STNFR-SPIEGELN
MIT
DER
WIEDERFINDUNG
VON
TITRIERTEM
RHUTNFA
IM
TNFA-ELISA
.
57
3.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
FREISETZUNG
VON
IL-10
BEI
KNOCHENMARK
TRANSPLANTIERTEN
PATIENTEN
.
58
3.1.
IL-1O-SERUMSPIEGEL
KNOCHENMARKTRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
.
58
3.1.1.
SERUMSPIEGEL
IM
VERLAUF
DER
KMT
(LAENGSSCHNITTUNTERSUCHUNG)
.
58
3.1.2.
ANALYSE
MOEGLICHER
FAKTOREN
FUER
ERHOEHTE
IL-10-SERUMSPIEGEL
.
59
3.2.
SEKRETION
VON
IL-10
DURCH
PBMNC
KNOCHENMARK
TRANSPLANTIERTER
PATIENTEN
.
62
3.2.1.
KULTUREN
BEI
AUFNAHME
IN
DIE
KMT-EINHEIT
.
63
3.2.2.
KULTUREN
UNTER
KONDITIONIERUNG
.
66
3.2.3.
KULTUREN
NACH
KMT
.
67
3.2.4.
SEKRETION
VON
IL-10
UND
TNFA
DURCH
PBMNC
IM
VERLAUF
DER
KMT
(LAENGSSCHNITTUNTERSUCHUNG)
.
70
4.
UNTERSUCHUNG
DER
MOEGLICHEN
INDUKTION
VON
TNFA
BEI
PATIENTEN
UNTER
KONDITIONIERUNG
ALS
DIREKTE
FOLGE
DER
ZYTOTOXISCHEN
BEHANDLUNG
.
70
4.1
IN
VIVO-BEFUNDE:
BESTRAHLUNGSKINETIKEN
.
70
4.2
UNTERSUCHUNGEN
EX
VIVO:
ZYTOKINSEKRETION
DURCH
PBMNC
VON
PATIENTEN
UNTER
KONDITIONIERUNG
.
72
4.3.
IN
VITRO-MODELLE:
Y-BESTRAHLUNG
VON
PBMNC
BZW.
HL-60
.
72
5.
ETABLIERUNG
EINER
METHODE
ZUR
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
FUER
TNFA-EXPRESSION
AN
PBMNC
VON
KMT-PATIENTEN
.
75
5.1.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
AN
MONOZYTEN
.
77
5.2.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
MIT
DER
ZELLINIE
MONO-MAC
6
.
81
5.3.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
AN
PBMNC
VON
KMT-PATIENTEN
.
85
IV.
DISKUSSION
.
87
1.
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
DES
IMMUNOLOGISCH
NACHWEISBA
REN
TNFA
IN
KULTURUEBERSTAENDEN
UND
SEREN
VON
KMT-PATIENTEN
.
87
1.1.
SICHERHEIT
DER
METHODE
.
87
1.2.
BIOAKTIVITAET
VON
TNFA
IN
KULTURUEBERSTAENDEN
UND
SEREN
VON
PATIENTEN
OHNE
ANTI-TNFA-BEHANDLUNG
.
89
1.3.
BIOLOGISCHE
AKTIVITAET
VON
TNFA
IN
SEREN
ANTI
TNFA
BEHANDELTER
PATIENTEN
.
89
2.
LOESLICHE
REZEPTOREN
FUER
TNFA
IN
SEREN
KNOCHENMARKTRANSPLAN
TIERTER
PATIENTEN
.
90
2.1.
MAXIMALE
SERUMSPIEGEL
UND
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
LOESLICHEN
TNFA-REZEPTOREN
.
90
2.2.
EINFLUSS
VON
STNFR-SPIEGELN
AUF
DIE
WIEDERFINDUNG
VON
TITRIERTEM
RHUTNFA
IM
TNFA-ELISA
.
93
3.
SYSTEMISCHE
FREISETZUNG
VON
IL-10
UND
PRODUKTION
DURCH
PBMNC
VON
KMT-PATIENTEN
.
95
4.
INDUKTION
VON
TNFA
BEI
KMT-PATIENTEN
ALS
DIREKTE
FOLGE
DER
ZYTOTOXISCHEN
BEHANDLUNG
UNTER
KONDITIONIERUNG
.
100
5.
ETABLIERUNG
EINER
METHODE
ZUR
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
FUER
TNFA
AN
EINZELZELLEN
.
101
V.
ZUSAMMENFASSUNG
UND
AUSBLICK
.
103
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
.
107 |
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