Physiologie und molekulare Wirkungsweise der Brassinosteroide:
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1999
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1
INHALTSVERZEICHNIS
ABBILDUNGS- UND TABELLENVERZEICHNIS IV
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS VI
1 EINLEITUNG 1
1.1 METABOLISMUS DER BRASSINOSTEROIDE 1
1.2 BR-BIOSYNTHESE DEFIZIENTE MUTANTEN 3
1.2.1
DIMLDWFL
4
1.2.2
DET2
5
1.2.3
DWF4
" 6
1.2.4
CBBUECPD
6
1.3 BR-SIGNALTRANSDUKTION 8
1.4 WECHSELWIRKUNGEN MIT ANDEREN PHYTOHORMONEN 10
2 ZIELSETZUNG 13
3 MATERIAL UND METHODEN 14
3.1 MATERIAL 14
3.1.1 CHEMIKALIEN UND ENZYME 14
3.1.2 OLIGONUKLEOTIDE 14
3.1.3 VEKTOREN 16
3.1.4 BAKTERIEN-UND HEFESTAEMME 17
3.1.5 PFLANZEN 17
3.1.6 BAKTERIEN-, HEFE- UND PFLANZENMEDIEN 17
3.1.7 PROTOPLASTENMEDIEN 18
3.2 METHODEN 18
3.2.1 KLONIERUNGEN UND PCR 18
3.2.2 TRANSFORMATION VON BAKTERIEN UND HEFEN 19
3.2.3 RNA-PRAEPARATION UND RNA-BLOT-ANALYSE 19
3.2.4 DNA-BLOT-ANALYSE 20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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II
3.2.5 PFLANZENKULTURBEDINGUNGEN 20
3.2.6 STRESS- UND HORMONBEHANDLUNGEN 21
3.2.7 TRANSFORMATION VON A. THALIANA 22
3.2.8 ISOLIERUNG, TRANSFORMATION UND SELEKTION VON PROTOPLASTEN AUS
TABAK-BLAETTERN 22
3.2.9 PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONSANALYSEN IM HEFE 2-HYBRID-SYSTEM 24
3.2.10 PROTEINEXPRESSION IN
E.COLI UND NACHWEIS DER OPR AKTIVITAET 25
3.2.11 NACHWEIS DER SS-GIUCURONIDASE AKTIVITAET IN PFLANZENGEVVEBEN 25
3.2.12 FAERBUNG DER ZELLKERNE MIT DAPI 25
4 ERGEBNISSE
I. CHARAKTHRISIHRUNG UL-S
TBFI
GL-NS AUS
ARAHIDOPSIS THALIANA
4.1 DAS
TBFI GEN AUS A. THALIANA 26
4.1.1 PROTEIN-PROTEIN-INTERAKTIONSANALYSEN 27
4.1.2 PHYSIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER FUNKTION VON TBFI 28
4.1.3 SUBZELLULAERE LOKALISATION 33
4.1.4 PHAENOTYP DER TBFI -GUS EXPRIMIERENDEN PFLANZEN 36
II. CHARAKLIMSIHRUNCI I INI
S
NI L I N OL L -YL I,L.()W-T;N/YMI HOMOIOGN
AUS
AEKAHMOPSIS
THAUANA
4.2
OPR3
-
EINE NEUE BR-INDUZIERBARE OPDA-REDUKTASE 38
4.2.1 NACHWEIS DER OPDA-REDUKTASE AKTIVITAET 39
4.2.2 NACHWEIS DER BR-INDUKTION DER
OPR3 GENEXPRESSION 40
4.2.3 INDUKTION DER OPR3 GENEXPRESSION DURCH ABIOTISCHEN STRESS 41
4.2.4 HERSTELLUNG TRANSGENER LINIEN MIT VERAENDERTER
OPR3 GENEXPRESSION 45
III. IDKNTIFIZIKRUNG NIUARTIGHR GLINK DKS BR-ML; I'AHOI.ISMUS UNI) DIR
BR-
SLGN AI.TRANSDUKTION
4.3 ACTIVATION-TAGGING 45
4.3.1 SELEKTION AUF BR-INSENSITIVE MUTANTEN (SELEKTION I) 47
4.3.2 SELEKTION AUF BR- UND AUXIN-UNABHAENGIGKEIT (SELEKTION II) 49
4.4 ISOLIERUNG EINER BR-INSENSITIVEN
ARABIDOPSIS MUTANTE 51
4.5 ANTISENSE-INHIBIERUNG DER EXPRESSION VON
CPD HOMOLOGEN IN A. THALIANA 52
111
IV. AUFKLAERUNG DER PHYSIOLOGISCHEN RELEVANZ DER BRS DURCH MODULATION DER
ENDOGENEN BR-GEHALTE
4.6 ANTISENSE-CPD PFLANZEN ZEIGEN GRADUELLEN,
CABBAGE-ARTIGCN PHAENOTYP 54
4.7 MODIFIKATION DER
NT-CYP90 EXPRESSION IN N. TABACUM 57
4.7.1 ISOLIERUNG DES 5 ' BEREICHS DER
NT-CYP90 CDNA 57
4.7.2 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
ANTISENSE-NT-CYP90 PFLANZEN 58
5 DISKUSSION 62
I. CHARAKTERISIERUNG DES
TBFI
GENS AUS ARABIDOPSIS THAUANA
5.1 TBFI - EIN ESSENTIELLER TRANSKRIPTIONSFAKTOR 62
II.
CHARAKTERISIERUNG EINES NEUEN OLD-YEI.I.OW-EN/.YME HOMOLOGS AUS
ARABIDOPSIS
THAUANA
5.2
OPR3 - EIN NEUES OYE HOMOLOG AUS A. THALIUNA MIT OPDA-REDUKTASE AKTI- 65
VITAET
5.2.1 REGULATION DER
OPR3 GENEXPRESSION DURCH BRS UND ABIOTISCHEN STRESS 66
5.2.2 TRANSGENE PFLANZEN MIT VERAENDERTER
OPR3 GENEXPRESSION 68
III. IDENTIFIZIERUNG NEUARTIGER GENE: DES BR-MI I AHOI ISMUS UND DER BR-
SIGNAETRANSDUKTION
5.3 ACTIVATION-TAGGING - EINE METHODE ZUR ISOLIERUNG VON DOMINANTEN
YYGAIN-OF- 69
FUNCTION
" MUTANTEN
5.3.1 ANWENDUNG DES ACTIVATION-TAGGINGS ZUR ISOLIERUNG VON GENEN DES BR-
70
METABOLISMUS UND KOMPONENTEN DER BR-SIGNALTRANSDUKTION
IV.
AUFKLAERUNG DER PHYSIOLOGISCHEN RELEVANZ DER
BRS
DURCH MODULATION DER
ENDOGENEN
BR-GEHALTE
5.4 ANTISENSE-INHIBIERUNG DER EXPRESSION DES
CPD GENS 73
5.5 ANTISENSE-INHIBIERUNG DER
NT-CYP90 EXPRESSION 75
6 ZUSAMMENFASSUNG 77
7
LITERATURVERZEICHNIS
79 |
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