Untersuchungen zu Transportprozessen an der peroxisomalen Membran der Hefe Saccharomyces cerevisiae:
Gespeichert in:
1. Verfasser: | |
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Format: | Buch |
Sprache: | German |
Veröffentlicht: |
1999
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Schlagworte: | |
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Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1999 |
Beschreibung: | IV, 113 S. Ill., graph. Darst. |
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J
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
PEROXISOMALE
ERKRANKUNGEN
BEIM
MENSCHEN
1
1.2
ISOLIERUNG
VON
MUTANTEN
MIT
DEFEKTEN
IN
DER
PEROXISOMALEN
BIOGENESE
2
1.3
DIE
PEX-GCNE
UND
IHRE
GENPRODUKTE,
DIE
PEROXINE
3
1.4
MODELL
ZUR
BIOGENESE
VON
PEROXISOMEN
5
1.5
PEROXISOMALE
SIGNALSEQUENZEN
7
1.6
PTS
REZEPTOREN
YY
8
1.7
IMPORTKOMPONENTEN
AN
DER
PEROXISOMALEN
MEMBRAN
10
1.8
DIE
SS-OXIDATION
VON
FETTSAEUREN
12
1.9
DIE
FAMILIE
DER
MITOCHONDRIALEN
TRANSPORTER
13
1.10
PROBLEMSTELLUNG
14
2
MATERIAL
UND
METHODEN
15
2.1
CHEMIKALIEN
15
2.2
MIKROORGANISMEN
.
'
16
2.2.1
ESCHERICHIA
COLI
,16
2.2.2
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
16
2.3
ANTISEREN
,-,17
2.4
VEKTOREN
17
2.5
ANALYTISCHE
METHODEN
17
2.5.1
PROTEINBESTIMMUNG
17
2.5.2
BESTIMMUNGEN
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
17
2.5.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
18
2.6
KULTIVIERUNG
VON
SACCHAROMYCES
CEREVISIAE
18
2.6.1
MEDIEN
18
2.6.2
WACHSTUM
VON
S.
CEREVISIAE
ZELLEN
AUF
FESTAGARPLATTEN
.
18
2.6.3
ANZUCHT
ZUR
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHEN
ANALYSE
18
2.6.4
ANZUCHT
FUER
BIOCHEMISCHE
ANALYSEN
YY
18
2.7
AUFSCHLUSSMETHODEN
FUER
S.
CEREVISIAE
ZELLEN
18
2.7.1
HERSTELLUNG
VON
S.
CEREVISIAE
TCA-GESAMMTZELLHOMOGENATEN
ZUR
IMMUNOLOGISCHEN
ANALYSE
18
2.7.2
ZELLAUFSCHLUSS
VON
S.
CEREVISIAE
ZELLEN
FUER
EINE
ANSCHLIESSENDE
KOIMMUNOPRAEZIPITATION
YY
19
INHALTSVERZEICHNIS
2.8
SEDIMENTATION
VON
GESAMTZELLMEMBRANEN
19
2.9
SUBZELLULAERE
FRAKTIONIERUNG
DURCH
DIFFERENTIELLE
ZENTRIFUGATION
19
2.10
FRAKTIONIERUNG
DURCH
DICHTEGRADIENTENZENTRIFUGATION
20
2.11
DISKONTINUIERLICHER
FLOTATIONSGRADIENT
20
2.12
LIMITIERTE
PROTEOLYSE
VON
ORGANELLEN
20
2.13
SUBPEROXISOMALE
FRAKTIONIERUNG
21
2.14
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ-MIKROSKOPIE
21
2.15
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
21
2.16
WESTERN
BLOTTING
UND
IMMUNDETEKTION
21
2.17
UEBEREXPRESSION
VON
MALTOSE-BINDEPROTEIN
(MBP)-FUSIONSPROTEINEN
AUS
E.
COLI
22
2.18
GEWINNUNG
VON
ANTISEREN
GEGEN
DAS
NATIVE
PEXL3P
22
2.19
REINIGUNG
VON
HISS-FUSIONSPROTEINEN
22
2.20
GEWINNUNG
VON
ANTISEREN
GEGEN
DAS
DENATURIERTE
PEX5
UND
PMP35-PROTEIN
23
2.21
IMMUN-AFIFINITAETSAUFREINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
23
2.21.1
AUFREINIGUNG
VON
ANTI
PEXL7P-ANTIKOERPEM
23
2.22
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEININTERAKTIONEN
23
2.22.1
TWO-HYBRID
SYSTEM
23
2.22.2
KOIMMUNOPRAEZIPITATION
MIT
HILFE
VON
MAGNETKUGELN
23
2.23
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
24
2.23.1
ANZUCHT
VON
.
COLI
ZUR
DNA
ISOLIERUNG
24
2.23.2
TRANSFORMATION
VON
E
COLI
24
2.23.3
ISOLIERUNG
VON PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
24
2.23.4
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSE-GELEN
24
2.23.5
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
24
2.23.6
DNA
SEQUENZIERUNG
24
2.23.7
AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MITTELS
PCR
25
2.23.8
TRANSFORMATION
VON
S.
CEREVISIAE
26
2.23.9
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER-DNA
AUS
S.
CEREVISIAE
26
2.23.10
ERZEUGUNG
VON
DELETIONSMUTANTEN
26
3
ERGEBNISSE
27
3.1
UNTERSUCHUNG
DES
PMP35-PROTEINS
27
3.1.1
IDENTIFIZIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
DES
PMP35-PROTEINS
27
INHALTSVERZEICHNIS
3.12
ERSTELLUNG
UND
UEBERPRUEFUNG
EINER
GENDELETIONSMUTANTE
DES
PMP35-QEOS
30
3.1.3
GEWINNUNG
EINES
PMP35P-SPEZIFISCHEN
ANTISERUMS
_31
3.1.3.1
HETEROLOGE
EXPRESSION
DES
PMP35-PROTEINS
IN
E.
COLI
31
3.1.3.2
ERZEUGUNG
POLYKLONALER
ANTISEREN
GEGEN
DAS
PMP35-PROTEIN
32
3.1.4
SPEZIFISCHE
DETEKTION
DES
PMP35-PROTEINS
33
3.1.5
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DES
PMP35P
34
3.1.5.1
DAS
PMP35-PROTEIN
IST
PEROXISOMAL
34
3.1.5.2
ANALYSE
DER
MEMBRANASSOZIATION
DES
PMP35P
36
3.1.5.3
LIMITIERTE
PROTEOLYSE
ISOLIERTER
ORGANELLEN
38
3.1.6
UNTERSUCHUNG
ZUR
FUNKTION
VON
PMP35P
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
PMP35A-MUTANTE
39
3.1.6.1
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
ANALYSE
DERPMP35A-MUTANTE
39
3.1.6.2
UNTERSUCHUNG
DES
IMPORTES
VON
MATRIYPROTEINEN
IN
DER
MUTANTE
PMP35E
40
3.1.6.3
DIE
EXPRESSION
VON
PMP35
IST
DURCH
OELSAEURE
INDUZIERBAR
43
3.1.6.4
MODELL
ZUR
FUNKTION
DES
PMP35P
44
3.1.6.5
WACHSTUMSANALYSEN
DER
MUTANTE
PMP35E
AUF
GESAETTIGTEN
UND
UNGESAETTIGTEN
FETTSAEUREN
46
3.2
UNTERSUCHUNGEN
DES
PEXL3-PROTEINS
48
3.2.1
ERZEUGUNG
POLYKLONALER
ANTISEREN
GERICHTET
GEGEN
DAS
PEX5
UND
PEXL3-PROTEIN
48
3.2.2
UNTERSUCHUNG
ZUR
MEMBRANASSOZIATION
DES
PEX7-PROTEINS
IN
ABWESENHEIT
DES
PEXL4P
49
3.2.3
PEXL3P
INTERAGIERT
IM
TWO-HYBRID-SYSTEM
MIT
DEM
PTS2-REZEPTOR
PEX7P
51
3.2.4
KOIMMUNOPRAEZIPITIENMG
DES
PEXL3P
UND
MYCPEX7P
,53
3.2.5
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
TOPOLOGIE
DES
PEXL
3-PROTEINS
55
3.2.6
PEXL3P
IST
FUER
DIE
LOKALISATION
DES
PEXL4P
AN
PEROXISOMALEN
MEMBRANEN
NOTWENDIG
57
3.2.7
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
DES
PEXL4P
INPEX73A-ZELLEN
59
3.2.8
GERICHTETE
MUTAGENESE
DES
PEX13
UND
PEX14
61
3.2.9
DAS
PXXP-MOTIV
DES
PEXL4P
IST
VON
BEDEUTUNG
FUER
DIE
INTERAKTION
MIT
PEXL3P
62
3.2.10
DIE
RT-SCHLEIFE
DES
PEXL3P
IST
VON
BEDEUTUNG
FUER
DIE
INTERAKTION
MIT
DEM
PEXL4P
63
3.2.11
DAS
MODIFIZIERTE
PEXL4P
IST
WEITERTUN
FUNKTIONELL
65
3.2.12
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LOKALISATION
DES
PEXL4P
UND
PEXL4PAXXA
67
3.2.13
UNTERSUCHUNG
ZUR
LOKALISATION
VON
MEMBRANPROTEIEN
IN
DEN
MUTANTEN
PEX3E
UND
PEX!9&
70
4
DISKUSSION
73
4.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
PMP35-PROTEIN
74
4.1.1
DAS
PMP35-PROTEIN
IST
EIN
MITGLIED
DER
MITOCHONDRIALEN
TRANSPORTERFAMILIE
74
4.1.2
DAS
PMP35P
IST
EIN
PEROXISOMALES
PROTEIN
75
4.1.3
DAS
PMP35P
IST
EIN
PEROXISOMALES
MEMBRANPROTEIN
76
4.1.4
DAS
PMP35-GEN
IST
NICHT
ESSENTIELL
FUER
DIE
BIOGENESE
DER
PEROXISOMEN
78
4.1.5
UNTERSUDIUNGEN
ZUR
FUNKTION
DES
PMP35-PROTEINS
IM
PEROXISOMALEN
STOFFWECHSEL
79
4.1.6
IST
DAS
PMP35P
DAS
ORTHOLOGE
PROTEIN
ZUM
CBPMP47P?
81
INHALTSVERZEICHNIS
4.2
UNTERSUCHUNGEN
ZU
KOMPONENTEN
DER
PEROXISOMALEN
TRANSLOKATIONS-MASCHINERIE
FUER
MATRIXPROTEINE
82
4.2.1
PEX7P
INTERAGIERT
MIT
DEM
INTEGRALEN
PEROXISOMALEN
MEMBRANPROTEIN
PEXL3P
4.2.2
WELCHE
BEDEUTUNG
HAT
DIE
PEXL3P/PEX7P-INTERAKTION?
4.2.3
WO
ERFOLGT
DIE
BINDUNG
DES
PEX7P
INNERHALB
DES
PEXL3P?
4.2.4
PEX5P/PEX7P-INTERAKTION
_
4.2.5
DIE
BINDUNG
DES
PEXL7P
AN
DEN
TRANSLOKATIONSKOMPLEX
BEDARF
DER
ANWESENHEIT
DES
PEXL4P
4.2.6
BINDUNG
DER
THIOLASE
AN
DEN
PTS2-REZEPTOR
_
4.2.7
DAS
PEXL3P
IST
FUER
DIE
LOKALISATION
DES
PEXL4P
AN
DER
PEROXISOMALEN
MEMBRANEN
NOTWENDIG
4.2.8
MISLOKALISATION
DES
PEXL4P
IN
PEX/3A-ZELLEN
_
4.2.9
MODELL
ZUM
PEROXISOMALEN
PROTEINIMPORT
91
5
ZUSAMMENFASSUNG:
94
6
LITERATUR
96
7.
ANHANG
114 |
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