Untersuchungen zur Regulation des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors (VEGF) in humanen Granulosazellen in vitro:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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I
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DIE
ENTWICKLUNG
DES
MENSCHLICHEN
CORPUS
LUTEUM
1
1.2.
DIE
ANGIOGENESE
DES
CORPUS
LUTEUM
3
1.3.
DER
VASCULAR
ENDOTHELIAL
GROWTH
FACTOR
(VEGF)
5
1.4.
DIE
VEGF-SYNTHESE
IM
HERANREIFENDEN
FOLLIKEL
UND
IM
CORPUS
LUTEUM
8
1.5.
ANOMALIEN
DER
OVARIELLEN
VEGF-SYNTHESE
10
1.6.
DIE
SIGNALWEGE
DER
VEGF-SYNTHESE
IN
GRANULOSAZELLEN
11
1.7.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
12
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
14
2.1.
IN
VITRO
KULTUR
HUMANER
GRANULOSAZELLEN
14
2.1.1.
PATIENTINNEN
14
2.1.2.
GEWINNUNG
DER
GRANULOSAZELLEN
14
2.1.3.
ZELLKULTUR
15
2.1.4.
VITALITAETSBESTIMMUNG
DER
KULTIVIERTEN
ZELLEN
17
2.2.
IMMUNHISTOLOGIE
AN
ZELLKULTUREN
17
2.2.1.
KULTUR
UND
FIXIERUNG
17
2.2.2.
IMMUNFLUORESZENZ
FUER
INHIBIN
17
23.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
18
2.3.1.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
ADHAERENTEN
ZELLKULTUREN
18
2.3.2.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
AUS
GEWEBE
19
2.3.3.
AUFBEREITUNG
DER
RNA
19
2.3.4.
RNA-QUANTIFIZIERUNG
20
2.3.5.
RNA-GELELEKTROPHORESE
20
2.3.6.
ANALYTISCHER
UND
PRAEPARATIVER
VERDAU
ZUR
HERSTELLUNG
VON
GEN-SONDEN
21
2.3.7.
RNA-SLOT
BLOTTING
22
2.3.8.
QUANTIFIZIERUNG
SPEZIFISCHER
MRNA
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
SONDEN
23
N
2.3.9.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
CDNA
23
2.3.10.
VORHYBRIDISIERUNG
DER
NITROCELLULOSE-MEMBRAN
24
2.3.11.
HYBRIDISIERUNG
DER
MRNA
24
2.3.12.
REHYBRIDISIERUNG
DER
MRNA
24
2.3.13.
AUSWERTUNG
DER
RNA-HYBRIDISIERUNG
25
2.3.14.
BERECHNUNG
DER
RELATIVEN
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
25
2.4.
PROTEINANALYTISCHE
METHODEN
26
2.4.1.
BESTIMMUNG
DER
VEGF-KONZENTRATION
IM
MEDIENUEBERSTAND
26
2.4.2.
BESTIMMUNG
DER
PROGESTERON-KONZENTRATION
IM
MEDIENUEBERSTAND
26
2.S.
BESTIMMUNG
DER
CA
1
*
UND
MG
'
*-KONZENTRATION
IN
KULTURMEDIUM
27
2.6.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
27
3.
ERGEBNISSE
28
3.1
HUMANE
GRANULOSAZEILEN
IN
DER
IN
VITRO
KULTUR
28
3.1.1.
IDENTIFIZIERUNG
DER
GRANULOSAZEILEN
DURCH
INHIBIN
31
3.1.2.
EINFLUSS
DES
KULTURMEDIUMS
UND
DER
KONZENTRATION
VON
FCS
AUF
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
UND
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
34
3.2.
EINFLUSS
URINIRER
UND
REKOMBINANTER
HUMANER
GONADOTROPINE
AUF
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
UND
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
UND
PROGESTERON
38
3.2.1.
3-STUNDEN-STIMULATION
MIT
URINAEREM
HCG,
R-HCG
UND
R-LH
38
3.2.2.
24-STUNDEN-STIMULATION
MIT
R-HCG
UND
R-LH
40
33.
EINFLUSS
VON
ACTINOMYCIN
D
AUF
DIE
HCG-INDUZIERTE
EXPRESSION
DER
VEGF
MRNA
42
3.4.
ERHOEHUNG
DES
INTRAZELLULOEREN
CALCIUMSPIEGELS
MIT
DEM
CALCIUM-IONOPHOR
A
23187
44
IN
3.5.
HEMMUNG
DER
SPANNUNGSABHAENGIGEN
CALCIUM-KANAELE
MIT
IO
JI
M
VERAPAMIL
45
3.6.
EINFLUSS
DER
EXTRAZELLULAEREN
CALCIUM
UND
MAGNESIUMKONZENTRATION
AUF
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
UND
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
48
3.6.1.
48-STUNDEN-KULTUR
IN
MEDIEN
UNTERSCHIEDLICHER
CA
2
*-UND
MG^-KONZENTRATION
48
3.6.2.1.
SIEBEN
TAGE
KULTUR
IN
MEDIEN
UNTERSCHIEDLICHER
CA
2
'
UND
MG^-KONZENTRATION
52
3.6.2.2.
SEKRETION
VON
VEGF
IN
MEDIEN
UNTERSCHIEDLICHER
CA
2+
-
UND
MG
2
*
KONZENTRATION
AN
TAG
3,
TAG
5
UND
TAG
7
NACH
JEWEILS
48
H
KULTUR
54
3.7.
EINFLUSS
EINES
MG^-UEBERANGEBOTS
IM
KULTURMEDIUM
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
VEGF-MRNA
UND
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
56
3.7.1.
EFFEKTE
VON
150
%
MG
2+
NACH
48
H
KULTUR
56
3.7.2.
EFFEKTE
VON
150%
MG
2
*
NACH
SIEBEN
TAGEN
KULTUR
58
3.8.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DER
CA
2
*-ABHAENGIGEN
UND
DER
CAMP
ABHAENGIGEN
PROTEINKINASEN
AUF
DIE
HCG-INDUZIERTE
EXPRESSION
DER
VEGF
MRNA
60
3.8.1.
EINFLUSS
DER
PKC-INHIBITOREN
GOE
6983
UND
GF
109203X
AUF
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
60
3.8.2.
EINFLUSS
DES
PKA-INHIBITORS
KT
5720
AUF
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
62
3.8.3.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
HEMMUNG
DER
VEGF-MRNA-EXPRESSION
BEI
MAXIMALER
KONZENTRATION
DER
PKC
UND
PKA-INHIBITOREN
63
4.
DISKUSSION
64
4.1.
DIE
GRANULOSAZELLKULTUR
64
4.2.
DIE
VEGF-SYNTHESE
HUMANER
GRANULOSAZELLEN
68
43.
DER
LH/HCG-REZEPTOR
UND
MOEGLICHE
SIGNALWEGE
71
4.3.1.
CALCIUM
UND
DIE
EXPRESSION
DER
VEGF-MRNA
72
4.3.2.
CALCIUM
UND
DIE
SEKRETION
VON
VEGF
UND
PROGESTERON
74
4.3.4.
MAGNESIUM
76
4.3.5.
DIE
PROTEINKINASEN
A
UND
C
77
IV
4.4.
SCHLUSSFOLGERUNGEN
78
5.
ZUSAMMENFASSUNG
81
6.
LITERATUR
84 |
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