Sekundärstoffwechsel in drei biotechnologischen Systemen: Zellkulturen von Argania spinosa, transgenen Pflanzen von Ruta graveolens und transgenen E. coli:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Göttingen
Cuvillier
1999
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1999 |
| Beschreibung: | V, 129 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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SEKUNDAERSTOFFWECHSEL IN DREI BIOTECHNOLOGISCHEN
SYSTEMEN:
ZELLKULTUREN VON ARGANIA SPINOSA, TRANSGENEN
PFLANZEN VON RUTA GRAVEOLENS UND TRANSGENEN E. COLI
VON DER NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET
DER TECHNISCHEN UNIVERSITAET CAROLO-WILHELMINA
ZU BRAUNSCHWEIG
ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES
DOKTORS DER NATURWISSENSCHAFTEN
(DR. RER. NAT.)
GENEHMIGTE
DISSERTATION
VON HASSAN ZAREAPOUR AUS TEHERAN-IRAN
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV, V
1 EINLEITUNG 1
1.1 DIE VERSUCHSPFLANZEN 8
1.1.1 ARGANIA SPINOSA (EISENHOLZBAUM) 8
1.1.2 RUTA GRAVEOLENS 10
1.1.3 DER TRANSFORMIERTE E. CO//-STAMM 10
1.2 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 11
2 MATERIAL UND METHODEN 13
2.1 BAKTERIENSTAEMME, PFLANZEN UND ZELLKULTUREN 13
2.1.1 KALLUSKULTURENVONV4RGAMA 13
2.1.2 TRANSFORMIERTE UND GENETISCH VERAENDERTE AEM/A-PROBEN 13
2.1.3 BAKTERIENSTAEMME: 13
2.2 NAEHRMEDIEN 14
2.2.1 AM 4/1-ZELLKULTURMEDIUM 14
2.2.2 MEDIUM FUER BACILLUS SUBTILIS 15
22 3 KULTURMEDIUM VON E.COLI 15
2.2.4 CP-AGAR FUER DIE ALGE 16
2.2.5 NB-AGAR FUER DIE BAKTERIEN 17
2.2.6 MPY-AGAR FUER DIE PILZE 17
2.3 ANZUCHT VON E. COLI ATRPED27 17
2.3.1 AUFARBEITUNG DES KULTURANSATZES 17
2.4 CHROMATOGRAPHIE-VERFAHREN. 18
2.4.1 SAEULEN-CHROMATOGRAPHIE: 18
2.4.2 DCCC:DROPLET COUNTER CURRENT CHROMATOGRAPHY 18
2.4.3 DUENNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE 19
2.4.3.1 DETEKTION ._ - 19
2.4.4 HOCHLEISTUNGSFLUESSIG-CHROMATOGRAPHIE (HPLC) 20
2.4.5 HPLC-TRENNUNG MIT DIODEN-ARRAY DETEKTOR 20
2.5 MIKROBIOLOGISCHE METHODEN 20
2.5.1 TEST AUF ANTIMIKROBIELLE AKTIVITAET 20
2.5.2 FOLIENSTREIFENTEST NACH WOLTERS (1969) 21
2.6 BIOCHEMISCHE METHODEN 22
2.6.1 REVERSE TRANSKRIPTASE 22
2.6.2 TYROSIN-KINASE (NACH WESSELS ET AL., 1999) 23
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.7 RADIOCHEMISCHE METHODEN 23
2.7.1 AUTORADIOGRAPHIE 23
2.7.2 RADIO-DUENNSCHICHTSCANNER 24
2.7.3 RADIO-HPLC 24
2.8 SPEKTROSKOPISCHE METHODEN 24
2.8.1 GC-MS 24
2.8.2 FAB-MS 25
2.8.3 EI-MS 25
2.8.4 NMR-SPEKTROSKOPIE 25
2.9 CHEMIKALIEN 25
3 ERGEBNISSE: ISOLIERUNGSVERFAHREN 26
3.1 ISOLIERUNG NEUER VERBINDUNGEN AUS /4RGONIA-KULTUREN 26
3.1.1 SOXHLET-EXTRAKTION 26
3.1.2 UNTERSUCHUNG DER SOXHLET-EXTRAKTE 26
3.1.3 DUENNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE 26
3.1.4DROPIETCOUNTERCURRENTCHROMATOGRAPHY 28
3.1.5 SAEULEN-CHROMATOGRAPHIE 28
3.2 BESTIMMUNG UND ISOLIERUNG VON VERBINDUNGEN AUS RUTA GRAVEOLENS 29
3.2.1 AETHEREXTRAKT 29
3.2.2 QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER ACRIDONEPOXIDE 29
3.2.3 QUALITATIVE UND QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER CUMARINE 32
3.2.4 SALZSAEURE-EXTRAKT 33
3.2.5 QUANTITATIVE BESTIMMUNG DER FUROCHINOLINE 33
3.3 PRAEPARATIVE ISOLIERUNG VON FLUORESZIERENDEN VERBINDUNGEN AUS DEM
KULTURMEDIUM VON
TRANSFORMIERTEN E. COLI - VERFAHREN 1 33
3.3.1 EXTRAKTION 33
3.3.2 SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE TRENNUNG 35
3.3.3 HPLC-TRENNUNG 38
3.4 PRAEPARATIVE ISOLIERUNG VON FLUORESZIERENDEN VERBINDUNGEN AUS DEM
KULTURMEDIUM VON TRANSFORMIERTEN E. COLI - VERFAHREN II 38
3.4.1 EXTRAKTION 38
3.4.2 SAEULEN-CHROMATOGRAPHIE 38
3.4.3 HPLC-TRENNUNG UND ISOLIERUNG 40
4 ERGEBNISSE: SUBSTANZANALYSE 41
4.1 ANALYSE DER STEROLE UND TRITERPENE AUS/IRGAMA-KULTUREN 41
4.1.1 UNTERSUCHUNG DER INHALTSSTOFFE VONA. SPINOSA-KAUEAS 41
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS III
4.1.2 UNTERSUCHUNG DER INHALTSSTOFFE DER JUNGEN TRIEBE VON A. SPINOSA 44
4.1.3 UNTERSUCHUNG DER INHALTSSTOFFE VON A. SPINOSA- BLAETTERN 49
4.1.4 VERSUCHE ZUM NACHWEIS DER SAPONINE IN A. SPINOSA 50
4.2 ANALYSE DES SEKUNDAERSTOFFSPEKTRUMS TRANSGENER RUTA
GROVEO/ENS-PFLANZCN 53
4.2.1 IDENTIFIZIERUNG UND QUANTIFIZIERUNG VON ACRIDONEPOXIDEN 53
4.2.2 QUALITATIVES UND QUANTITATIVES SPEKTRUM DER FURANOCUMARINE 55
4.2.3 IDENTIFIZIERUNG UND QUANTIFIZIERUNG DER FUROCHINOLINE 59
4.2.4 IDENTIFIZIERUNG VON TRYPTAMIN-DERIVATEN 67
4.3 IDENTIFIZIERUNG VON NEUARTIGEN, FLUORESZIERENDEN SEKUNDAERSTOFFEN AUS
MIT EINEM
ANTHRANILATSYNTHASE-GEN TRANSFORMIERTEN E. COLI 69
4.3.1 FRAKTIONIERTE EXTRAKTION DER SEKUNDAERSTOFIE 69
4.3.2 UNTERSUCHUNG DES CYCLOHEXAN EXTRAKTES DURCH MASSENSPEKTROMETRIE 69
4.3.3 TRENNUNG DURCH SAEULENCHROMATOGRAPHIE 70
4.3.4 HPLC-TRENNUNG DES CYCLOHEXAN-EXTRAKTES 70
4.3.5 HPLC-TRENNUNG MIT DIODEN-ARRAY-DETEKTOR 73
4.3.6 IDENTIFIZIERUNG DER NEUEN NATURSTOFFE MITTELS SPEKTROSKOPISCHER
METHODEN 75
4.3.7 INTERPRETATION DER SPEKTROSKOPISCHEN DATEN DER ERSTMALIG NEU
ISOLIERTEN NATURSTOFFE AUS DEM
KULTURMEDIUM VON TRANSFORMIERTEN E. COLI 100
4.3.8 UNTERSUCHUNG ZUM EINBAU VON ANTHRANILSAEURE IN DIE NEUEN
SEKUNDAERSTOFFE DES AS-TRANSFORMIERTEN E.
CO/I-STAMMES 105
4.3.9 BIOLOGISCHE AKTIVITAET DER ISOLIERTEN NATURSTOFFE AUS DEM
KULTURMEDIUM TRANSGENER E. COLI 108
5 DISKUSSION 109
5.1 ZEIL-KULTUREN ^ARGANLA-SPINOSA . 109
5.2 MODIFIKATION DES SEKUNDAERSTOFFWECHSEL IN TRANSGENEN PFLANZEN 114
5.3 NEUE NATURSTOFFE AUS *TRANSGENE E. COLI 119
6 ZUSAMMENFASSUNG 122
7 LITERATURVERZEICHNIS... 124
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