Identifizierung und Charakterisierung des humanen Adrenomedullin-, RDC1- und CGRP-Rezeptors und deren Expression für pharmakologische Studien:
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Format: | Abschlussarbeit Buch |
Sprache: | German |
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[1999]
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ADRENOMEDULLIN
1
1.2
ZELLULAERE
SIGNALTRANSDUKTION
4
1.2.1
G-PROTEIN
GEKOPPELTE
REZEPTOREN
5
1.3
ADRENOMEDULLIN-REZEPTOR
9
2.
ZIEL
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
11
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
13
3.1
MATERIALIEN
13
3.1.1
CHEMIKALIEN,
VERBRAUCHSMATERIAL
UND
ENZYME
13
3.1.2
RADIOAKTIV
MARKIERTE
NUKLEOTIDE
13
3.1.3
CAMP-RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)
14
3.1.4
BAKTERIEN
UND
PHAGENSTAEMME
14
3.1.5
VERWENDETE
EUKARYONTISCHE
ZELLINIEN
14
3.1.6
PLASMIDE
15
3.1.7
CDNA
UND
CDNA-BIBLIOTHEKEN
15
3.1.8
ZUSAMMENSETZUNG
DER
NAEHRMEDIEN/PLATTEN
16
3.1.9
ZUSAMMENSETZUNG
DER
VERWENDETEN
PUFFER
17
3.1.10
SUBSTANZEN
UND
KULTURMEDIEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
19
3.1.11
LOESUNG
FUER
DIE
IN
SITA-HYBRIDISIERUNG
20
3.1.12
PUFFER
FUER
DEN
CAMP-LUZIFERASE-TEST
21
3.1.13
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
21
3.1.13.1
HUMANER
ADRENOMEDULLIN-REZEPTOR
21
3.1.13.2
HUMANER
RDC
1
-REZEPTOR
22
3.1.13.3
HUMANER
CALCITONIN
GENE-RELATED
PEPTIDE
(CGRP)-REZEPTOR
22
3.1.13.4
PRIMER
FUER
DIE
IN
SIRU-HYBRIDISIERUNG
23
3.2
ANALYTISCHE
METHODEN
UND
GERAETE
24
3.3
METHODEN
25
3.3.1
SCREENING
VON
CDNA-BIBLIOTHEKEN
25
3.3.1.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
25
3.3.1.2
HERSTELLEN
VON
E.COLI-ZELLEN
ZUR
INFEKTION
MIT
X
ZAP
IL-PHAGEN
26
3.3.1.3
TITERBESTIMMUNG
UND
PLATTIEREN
EINER
CDNA-BIBLIOTHEK
27
3.3.1.4
TRANSFER
DER
PHAGEN
AUF
NITROCELLULOSE-FILTER
27
3.3.1.5
HYBRIDISIERUNG
DER
A-[
32
P]
MARKIERTEN
DNA-PROBEN
MIT
DER
AUF
DEN
NITROCELLULOSE-FILTERN
IMMOBILISIERTEN
DNA
28
3.3.1.6
WASCHEN
DER
NITROCELLULOSE-FILTER
UND
AUTORADIGRAPHIE
30
3.3.1.7
IDENTIFIZIERUNG
DER
GESUCHTEN
PHAGEN
30
3.3.1.8
IN
VIVO
EXCISION
VON
REKOMBINANTEN
PBLUESCRIPT-KLONEN
31
3.3.1.8.1
ANZUCHT
VON
XL
1
BLUE
31
3.3.1.8.2
IN
VIVO
EXCISIONREAKTION
(PLASMID-INDUKTION)
31
3.3.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
33
3.3.2.1
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
(MINIPRAEP)
33
3.3.2.2
PIAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
(MAXIPRAEP)
34
3.3.3
SCHNEIDEN
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
36
3.3.4
ELEKTROPHORESE
VON
DNA
AUF
AGAROSE-GELEN
36
3.3.4.1
PRAEPARATIVE
DNA-GELELEKTROPHORESE
37
3.3.5
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
37
3.3.5.1
SOUTHERN-BLOT
38
3.3.5.2
HYBRIDISIERUNG
MIT
A-[
32
P]-MARKIERTEN
PROBEN
38
3.3.6
DNA-CYCLE-SEQUENZIERUNG
38
3.3.7
DNA-SUBKLONIERUNG
IN
DEN
EXPRESSIONSVEKTOR
PCDNA3
40
3.3.8
E.
COLI-TRANSFORMATION
41
3.3.9
PCR
(POLYMERASE
KETTEN-REAKTION)
42
3.3.9.1
RT-PCR
(REVERSE
TRANSKRIPTASE-PCR)
42
3.3.9.1.1
CDNA-ERSTSTRANG-SYNTHESE
43
3.3.9.1.2
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
43
3.3.9.2
PCR-REAKTIONEN
44
3.3.10
DNA-KLONIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
MITTELS
TA-VEKTOR
45
3.3.11
TRANSFEKTION
UND
EXPRESSION
DER
HUMANEN
G-PROTEIN
GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
IN
SAEUGER-ZELLEN
46
3.3.11.1
TRANSFEKTION
DER
G-PROTEIN
GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
IN
EINE
CAMP-SENSITIVE
CHO-ZELLINIE
(CH01UC9AQ)
46
3.3.11.1.1
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
MIT
TRYPSIN
UND
EINSAEEN
DER
ZELLEN
46
3.3.11.1.2
TRANSFEKTION
DER
ZELLEN
MITTELS
LIPOSOMEN
49
3.3.11.1.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
UND
EXPRESSION
IN
COS-7
ZELLEN
50
3.3.11.1.3.1
DNA-TRANSFEKTION
MIT
DER
CALCIUMPHOSPHAT-METHODE
50
3.3.11.1.3.2
DNA-TRANSFEKTION
DURCH
ELEKTROPORATION
50
3.3.11.2
REZEPTOR-LUZIFERASE-ASSAY
51
3.3.11.2.1
CAMP-LUZIFERASE-VORTEST
51
3.3.11.2.2
VEREINZELUNG
DER
ADRENOMEDULLIN/CAMP
POSITIVEN
KLONE
51
3.3.11.2.3
CAMP-LUZIFERASE-TEST
52
3.3.11.3
LANGZEITLAGERUNG
UND
KRYOKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
53
3.3.11.4
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
53
3.3.12
ADRENOMEDULLIN/CAMP-RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)
54
3.3.13
IN
SIM-HYBRIDISIERUNG
55
3.3.13.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDSONDEN
55
3.3.13.2
HERSTELLUNG
DES
BIOLOGISCHEN
PRAEPARATS
56
3.3.13.2.1
BESCHICHTUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
56
3.3.13.2.2
PRAEPARATION
UND
FIXIERUNG
DER
GEWEBESCHNITTE
57
3.3.13.3
HYBRIDISIERUNG
UND
WASCHEN
DER
GEWEBESCHNITTE
57
3.3.13.4
AUTORADIOGRAPHIE
57
3.3.14
NORTHEM-BLOT-ANALYSE
58
3.3.15
AUSWERTUNGSPROGRAMME
VON
DNA
UND
PROTEINDATEN
59
4.
ERGEBNISSE
4.1
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HUMANEN
ADRENOMEDULLIN-REZEPTORS
60
4.1.1
SEKUNDAER-UND
TERTIAER-STRUKTURVORHERSAGEN
64
4.2
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HUMANEN
RDC1-REZEPTORS
66
4.2.1
SEKUNDAER-UND
TERTIAER-STRUKTURVORHERSAGEN
73
4.3
KLONIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
HUMANEN
CGRP-REZEPTORS
75
4.3.1
SEKUNDAER-UND
TERTIAER-STRUKTURVORHERSAGEN
82
4.4
TRANSKRIPTION
UND
VERTEILUNG
DER
G-PROTEIN
GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
IN
HUMANEN
GEWEBEN
UND
GEWEBEN
DER
RATTE
87
4.4.1
NORTHEM-BLOT-ANALYSE
87
4.4.2
IN
SZTU-HYBRIDISIERUNG
91
4.4.2.1
ADRENOMEDULLIN-REZEPTOR
91
4.4.2.2
RDC1-REZEPTOR
92
4.4.2.3
CGRP-REZEPTOR
92
4.5
UNTERSUCHUNG
ZUR
EXPRESSION
UND
PHYSIOLOGISCHEN
FUNKTION
DER
REZEPTOREN
IN
STABIL
TRANSFIZIERTEN
EUKARYONTISCHEN
ZELLINIEN
98
4.5.1
LUZIFERASE-TEST
98
4.5.1.1
REPORTER-ZELLINIEN
AUF
DER
BASIS
VON
CH01UC9
99
4.5.1.1.1
HUMANER
ADRENOMEDULLIN-REZEPTOR
99
4.5.1.1.2
HUMANER
RDC1-REZEPTOR
101
4.5.1.1.3
HUMANER
CGRP-REZEPTOR
102
4.5.1.2
REPORTER-ZELLINIEN
AUF
DER
BASIS
VON
CH01UC9ASM
103
4.5.1.3
REPORTER-ZELLINIEN
AUF
DER
BASIS
VON
COS-7
ZELLEN
105
4.5.2
ADRENOMEDULLIN/CAMP-RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)-TEST
106
5.
DISKUSSION
107
5.1
ADRENOMEDULLIN
IN
HYPERTONIE
UND
ARTERIOSKLEROSE
107
5.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
HUMANEN
ADRENOMEDULLIN
REZEPTORS
(HADM-R)
108
5.3
HUMANER
RDC
1
-REZEPTOR
(HRDC
1
-R)
110
5.4
HUMANER
CALCITONIN
GENE-RELATED
PEPTIDE
REZEPTOR
(HCGRP-R)
111
5.5
EXPRESSIONSMUSTER
DER
GAS-PROTEIN
GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
112
5.5.1
ADM-R
112
5.5.2
RDC1-R
113
5.5.3
CGRP-R
113
5.6
PHYSIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
DER
GAS-PROTEIN
GEKOPPELTEN
REZEPTOREN
114
5.7
ADRENOMEDULLIN/CAMP-RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)-TEST
117
6.
AUSBLICK
119
7.
ZUSAMMENFASSUNG
123
8.
ANHANG
125
9.
LITERATUR
129
ABKUERZUNGEN
137 |
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spelling | Prajitno, Teguh Yodiantara 1967- Verfasser (DE-588)121289346 aut Identifizierung und Charakterisierung des humanen Adrenomedullin-, RDC1- und CGRP-Rezeptors und deren Expression für pharmakologische Studien vorgelegt von Teguh Yodiantara Prajitno [1999] 138 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 1999 Calcitonin gene-related peptide (DE-588)4281695-6 gnd rswk-swf Adrenomedullin (DE-588)4556335-4 gnd rswk-swf Rezeptor (DE-588)4049722-7 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Adrenomedullin (DE-588)4556335-4 s Rezeptor (DE-588)4049722-7 s DE-604 Calcitonin gene-related peptide (DE-588)4281695-6 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008669259&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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