Verfügbarkeit: Untersuchung der immunologischen Toleranz in HPV-transgenen Mäusen

Untersuchung der immunologischen Toleranz in HPV-transgenen Mäusen:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Borchers, Annette (VerfasserIn)
Format:	Abschlussarbeit Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1999
Schlagworte:	Hochschulschrift
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Beschreibung:	97 S. Ill., graph. Darst.

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adam_text	INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG _ 1 1.1 HUMANPATHOGENE PAPILLOMVIREN (HPV) - BIOLOGISCHE EIGENSCHAFTEN UND KLINISCHE BEDEUTUNG 1 1.2 HPV-GENOM UND HPV-INFEKTION 1 1.3 HPV E6 / E7 - ONCOGENE / TUMORANTIGENE 4 1.4 IMMUNOLOGIE DER HUMANPATHOGENEN PAPILLOMVIREN 4 1.5 BEHANDLUNG VON HPV-ASSOZIIERTEN ERKRANKUNGEN 6 1.6 IMMUNOLOGISCHE TOLERANZ 7 1.7 ANIMALE PAPILLOMVIREN - MODELLSYSTEME 8 1.8 TRANSGENE TIERMODELLE 9 1.9 ZIELSETZUNG DER EIGENEN UNTERSUCHUNGEN 10 2 MATERIAL _ 12 2.1 TRANSGENE MAEUSE 12 2.2 MAUSINZUCHTSTAEMME UND TIERHALTUNG 13 2.3 PEPTIDE 13 2.4 ANTIKOERPERKONJUGATE 13 2.5 ANTIKOERPER 14 2.6 TUMORZELLINIEN 14 2.7 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR 15 2.8 MEDIEN FUER DIE BAKTERIENKULTUR * 15 2.9 MEDIEN FUER DIE HEFEKULTUR 16 2.10 PUFFER ZUR EXTRAKTION DES E7-PROTEINS AUS HEFE UND ZUR REINIGUNG DES PROTEINS 16 2.11 WEITERE PUFFER 17 2.12 SONSTIGE LOESUNGEN 19 2.13 SILBERFAERBUNG VON PROTEINEN IM POLYACRYLAMIDGEL 20 3 METHODEN _ 21 3.1 TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 21 3.1.1 ZUCHT DER TRANSGENEN MAEUSE 21 INHALTSVERZEICHNIS 3.1.2 ANAESTHESIE DER VERSUCHSTIERE 21 3.1.3 IMMUNISIERUNG 21 3.1.4 TRANSPLANTATIONEN 22 3.2 CHARAKTERISIERUNG DER TRANSGENEN MAEUSE 22 3.2.1 AUFARBEITUNG VON DNA AUS MAUSSCHWANZBIOPSIEN 22 3.2.2 RADIOAKTIVE MARKIERUNG EINER HPV16 SPEZIFISCHEN DNA-SONDE (YYRANDOM PRIMING " ) 23 3.2.3 DNA - DNA - HYBRIDISIERUNG 24 3.2.4 POLYMERASEKETTENREAKTION ZUR DNA-ANREICHERUNG 24 3.2.5 GEWEBESCHNITTE 25 3.2.6 RNA-RNA IN SITU HYBRIDISIERUNG 25 3.2.7 ISOLIERUNG PERIPHERER BLUTLYMPHOZYTEN (PBL) AUS MAUSBLUT 26 3.2.8 DURCHFLUSSZYTOMETRIE AN PERIPHEREN BLUTLYMPHOZYTEN 26 3.2.9 ALLOZYTOTOXIZITAETSTEST /CONA BLAESTEN 27 3.3 ANTIGENPRAEPARATION 28 3.3.1 AUFARBEITUNG VON HPV 16 E7-PROTEIN IM E.COLI EXPRESSIONSSYSTEM 28 3.3.2 AUFARBEITUNG VON HPV 16 E7-PROTEIN IM S.POMBE EXPRESSIONSSYSTEM 28 3.3.3 BIOCHEMISCHE AUFREINIGUNG DES E7-PROTEINS AUS S. POMBE 29 3.3.4 PROTEINMENGENBESTIMMUNG 30 3.3.5 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN IM POLYACRYLAMIDGEL UND TRANSFER AUF IMMOBILEN P R MEMBRAN (WESTERN BLOT) 30 3.3.6 IMMUNOBLOTTING 31 3.4 ALLGEMEINE ZELLKULTURMETHODEN 31 3.4.1 KULTIVIERUNG VON ZELLEN 31 3.4.2 EINFRIEREN UND AUFTAUEN VON ZELLEN 31 3.4.3 BESTIMMUNG DER ANZAHL LEBENDER ZELLEN 32 3.4.4 INAKTIVIERUNG VON ZELLEN 32 3.4.5 UEBERPRUEFUNG DER EXPRESSION VON E7 IN 2F1 1 (RMA-E7) ZELLEN 32 3.5 IMMUNOLOGISCHE EXPERIMENTE 32 3.5.1 ELISA 32 3.5.2 SUB UND ISOTYPEN-ELISA 33 3.5.3 HERSTELLUNG VON EINZELZELLSUSPENSIONEN AUS MILZ UND LYMPHKNOTEN 33 3.5.4 T-ZELL KULTIVIERUNG 34 3.5.5 ZYTOTOXIZITAETSTEST 34 3.5.6 LIMITING DILUTION ASSAY 35 3.5.7 KLONIERUNG EINER MILZZELLKULTUR 35 3.5.8 DURCHFLUSSZYTOMETRIE AN ZYTOTOXISCHEN T-ZELL LINIEN (CTL-LINIEN) 36 INHALTSVERZEICHNIS 4 ERGEBNISSE _ : _ 37 4.1 ANALYSE DES GEREINIGTEN E7-PROTEINS 37 4.2 CHARAKTERISIERUNG DER TUMORZELLTRANSFEKTANTEN 40 4.2.1 ANALYSE DER MHC-I-EXPRESSION IN DER DURCHFLUSSZYTOMETRIE 40 4.2.2 UNTERSUCHUNG DER E7-EXPRESSION IN 2F11-ZELLEN 40 4.3 UEBERPRUEFUNG DER RUECKZUECHTUNG DER TRANSGENEN MAEUSE : TRANSGENE MAEUSE DER SECHSTEN GENERATION SIND MHC KLASSE I-HOMOZYGOT 42 4.3.1 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 42 4.3.2 ALLOGENER ZYTOTOXIZITAETSTEST 47 4.4 TRANSGENEXPRESSION NACH RUECKZUECHTUNG 49 4.4.1 HISTOLOGIE DER HAUT UND DES THYMUS 49 4.4.2 RNA-RNA IN SITU HYBRIDISIERUNG 49 4.5 ETABLIERUNG VON IMMUNISIERUNGSSCHEMATA ZUR INDUKTION E7-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER UND CTLS 52 4.5.1 DAS ADJUVANS 52 4.5.2 INDUKTION E7-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER 52 4.5.3 INDUKTION E7-SPEZIFISCHER CTLS 54 4.6 CHARAKTERISIERUNG DER E7-SPEZIFISCHEN CTL-ANTWORT IN NICHT TRANSGENEN MAEUSEN 57 4.6.1 E7-SPEZIFISCHE ZYTOTOXIZITAET DER MILZZELLEN AUS NICHT TRANSGENEN MAEUSEN WIRD DURCH CD8+-T-ZELLEN VERMITTELT 57 4.6.2 DIE E7-SPEZIFLSCHEN MILZZELLINIEN AUS NICHT TRANSGENEN MAEUSEN EXPRIMIEREN CD3 UND CD8, NICHT ABER EINEN MARKER FUER NK-ZELLEN 60 4.7 E7-SPEZIFISCHE B-ZELLANTWORT IN TRANSGENEN MAEUSEN 63 4.7.1 TRANSGENE MAEUSEN BILDEN NICHT SPONTAN ANTIKOERPER GEGEN HPV 16 E7 63 4.7.2 E7-SPEZIFISCHE ANTIKOERPER KOENNEN IN TRANSGENEN MAEUSEN DURCH IMMUNISIERUNG INDUZIERT WERDEN 63 4.7.3 ISO UND SUBTYPENCHARAKTERISIERUNG DER E7-SPEZIFISCHEN ANTIKOERPER IN TRANSGENEN UND NICHT TRANSGENEN MAEUSEN 65 4.8 E7-SPEZIFISCHE CTL-ANTWORT IN TRANSGENEN MAEUSEN 67 4.8.1 IN TRANSGENEN MAEUSEN IST KEINE SPONTANE E7-SPEZIFISCHE CTL-ANTWORT NACHWEISBAR 67 4.8.2 E7-SPEZIFISCHE CTLS KOENNEN IN TRANSGENEN MAEUSEN DURCH IMMUNISIERUNG NICHT INDUZIERT WERDEN 68 4.8.3 KLONIERUNG EINER TRANSGENEN T-ZELLINIE 71 4.8.4 LIMITING DILUTION ASSAY 72 4.9 TRANSGENE MAEUSE ENTWICKELN EINE CTL-ANTWORT GEGEN EIN KONTROLLPROTEIN 73 INHALTSVERZEICHNIS 4.10 OVALBUMIN KANN IN TRANSGENEN MAEUSEN KEINE YYHELFERFUNKTION " FUER DIE INDUKTION E7 SPEZIFISCHER CTLS LIEFERN 4.11 HAUTTRANSPLANTATION 74 75 5 DISKUSSION 77 6 ZUSAMMENFASSUNG _ 87 7 SUMMARV 88 8 ABKUERZUNGEN 89 9 LITERATUR 91
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