Entwicklung und Validierung eines In-vitro-Bioassays für Parathormon:
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| Sprache: | German |
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1998
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| Beschreibung: | Frankfurt (Main), Univ., Diss., 1999 |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I EINLEITUNG AND ZIELSETZUNG.1
II ALLGEMEINES.3
1. PARATHORMON. .3
1.1 PHYSIOLOGISCHE WIRKUNGEN.3
1
.2
BIOSYNTHESE VON PANITHORMON.5
1.3 REGULATION DER PARATHORMON-EXPRESSION.6
1.4 PERIPHERER METABOLISMUS VON PARATHORMON.7
1.5 BIOCHEMISCHE MECHANISMEN DER PARATHORMON-WIRKUNG .9
2. BIOASSAY.12
2.1 DIE BEDEUTUNG DES BIOASSAYS IN DER QUALITAETSKONTROLLE.12
2.2 BIOASSAYS FUER PARATHORMON.13
2.3 STANDARDISIERUNG VON PARATHORMON.15
III MATERIAL UND METHODEN
.16
1. MATERIAL
.16
1.1 CHEMIKALIEN.16
1.2 LOESUNGEN UND PUFFER.16
1.3 MATERIALIEN.17
1.4 MEDIEN, MEDIENZUSAETZE UND LOESUNGEN FUER DIE ZELLKULTUR.18
1.5 PARATHORMON.18
1.5.1 PTH-FRAGMENTE.18
1.5.2 PTH-STANDARD.19
1.6 ZELLINIEN.19
1.6.1 UMR106.19
1.6.2 AC6B2.19
1.7 TIERE. 19
2. METHODEN.20
2.1 KULTIVIERUNG DER UMR106-ZELLINIE.20
2.2 KULTIVIERUNG DER AC6B2-ZELLINIE.20
2.3 BESTIMMUNG DER LEBENDZELLZAHL.20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
2.4 TIERHALTUNG.,.21
2.5 PROBENVERDQNMMG.21
2.6 VERSUCHSDURCHF&HRUNG ZELLASSAY.21
2.6.1 BESTIMMUNG VON ZYKLISCHEM AMP.22
2.7 VERSUCHSDURCHFUHRUNG CHICKEN-ASSAY.23
2.7.1 BESTIMMUNG DER SERUM-KALZHIM-KONZENTRATION AM AAS.24
2.8 AUSWERTUNG DER ASSAYS.Z7. 25
2.9 STATISTIK.29
2.9.1 DARSTELLUNG DER VERSUCHSDATEN.29
2.9.2 STATISTISCHE TESTVERFAHRE
N.29
IV ERGEBNISSE.30
1. ENTWICKLUNG DER ZEUEASSAYS.30
1.1 DOSISFINDUNG.30
1.2 IBMX-EINWIRKZEH.32
1.3 KINETIK DER PTH-WIRKUNG.33
1.4 RANDOMISIERUNG DER PROBEN AUF DER MIKROTITERPLATTE.34
1.5 OP
TIMIERUNG DER INKUBATIONSTCMPCRATUR.35
1.6 VERSUCHSAUSWERTUNG.36
2. VALIDIERUNG DER BIOASSAYS.38
2.1 VALIDIERUNG DES BIOASSAYS MIT UMR106-ZELLEN.38
2.1.1 LINEARITFIT.38
2.1.2 SPEZIFITST.39
2.1.3 RICHTIGKEIT UND PRAEZISION.41
2.2 VALIDIERUNG DES BIOASSAYS MIT AC6B2-ZELLEN.44
2.2.1 LINEARITAET. 44
2.2.2 SPEZIFITAET.45
2.2.3 RICHTIGKEIT UND PRAEZISION.47
2.3 VALIDIERUNG DES BIOASSAYS AN HUEHNERKUEKEN (CHICKEN-ASSAY).49
2.3.1 LINEARITAET.50
2.3.2 SPE
ZIFITAET._._._._50
2.3.3 RICHTIGKEIT UND PRAEZISION.51
INHALTSVERZEICHNIS
3. ETABLIERUNG EINER R^EFEREMSUBSTANZ FUER PTH(L-37) UND ABGLEICB
GEGEN DEN INTERNATIONALEN STANDARD.
.53
4.
UNTERSUCHUNGEN ZUR BESTIMMUNG DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN VON
PARATHORMON-FRAGMENTEN
.55
4.1 VERGLEICH DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN DER PTH(L-34)-FRAGMENTE IM
UMR106-ZELLASSAY.56
4.2 VERGLEICH DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN DER PTH( 1 -34)-FRAGMENTE IM
AC6B2-ZELLASSAY.57
4.3 VERGLEICH DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN DER PTH( 1 -34)-FRAGMENTE IM
CHICKEN-ASSAY.59
4.4 VERGLEICH DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN DER PTH(L-34)-FRAGMENTE
IN DEN BIOASSAYS.60
4.5 DIE BIOLOGISCHE AKTIVITAET CARBOXYTERMINALER PTH-FRAGMENTE IN DEN
BIOASSAYS.61
V ' DISKUSSION.63
1. ENTWICKLUNG UND VALIDIERUNG EINER
IN
V/FRO-ASSAY-METHODE FUER
DIE AKTIVITAETSBESTIMMUNG VON PARATHORMON.63
2. ABGLEICH DES ARBEITSSTANDARDS PTH 9701 MIT DEM WHO
INTERNATIONALEN STANDARD.66
3. BESTIMMUNG DER BIOLOGISCHEN AKTIVITAETEN VON PARATHORMON-FRAGMENTEN
.67
VI ZUSAMMENFASSUNG.69
ABKUERZUNGEN.71
LITERATURVERZEICHNIS.73 |
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