Zytomegalie-Virus DNA-Nachweis mit der Polymerase-Ketten-Reaktion:
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Veröffentlicht: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
GESCHICHTE
1
1.2
ZYTOMEGALIEVIRUS
1
1.2.1
GENOMISCHER
AUFBAU
UND
REPLIKATIONSZYKLUS
2
1.2.2
PROTEINE
2
1.3
EPIDEMIOLOGIE
3
1.4
INFEKTIONSWEG
UND
INFEKTIONSART
4
1.5
KLINIK
4
1.6
PROPHYLAXE
UND
THERAPIE
5
1.6.1
IMMUNGLOBULINE
5
1.6.2
ACYCLOVIR
5
1.6.3
GANCICLOVIR
6
1.6.4
FOSCAVIR
7
1.7
NACHWEISMETHODEN
FUER
HCMV-INFEKTIONEN
7
1.7.1
INDIREKTER
ERREGERNACHWEIS
8
1.7.2
DIREKTER
ERREGERNACHWEIS
9
1.8
AUFGABENSTELLUNG
11
2
MATERIAL
UND
METHODEN
12
2.1
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
(PCR):
12
2.1.1
REAGENZIEN
FUER
DIE
PCR
12
2.1.2
PRIMER
12
2.1.3
BEDINGUNGEN
DER
PCR
13
2.1.4
PRAEPARATION
DER
DNA
AUS
PATIENTENMATERIALIEN
13
2.1.5
HERSTELLUNG
EINES
LYSATS
AUS
HCMV
INFIZIERTEN
ZELLEN
14
2.1.6
KONTAMINATIONSVERMEIDUNG
14
2.2
ANALYSE
DER
AMPLIFIKATE
15
2.2.1
GELELEKTROPHORESE
15
2.2.2
KAPILLARBLOT
DER
AMPLIFIKATE
MIT
NACHFOLGENDER
HYBRIDISIERUNG
15
2.3
PLASMIDE
UND
BAKTERIEN
16
2.4
FIBROBLASTEN
UND
HCMV
PROPAGIERUNG
16
2.5
PLASMIDPRAEPARATION
16
2.6
HYBRIDISIERUNGSSONDEN
16
2.7
SEROLOGISCHE
METHODEN
17
2.7.1
KBR
17
2.7.2
ELISA
17
3
ERGEBNISSE
18
3.1
ETABLIERUNG
UND
STANDARDISIERUNG
DER
PCR
FUER
ZYTOMEGALIEVIRUS
18
INHALTSVERZEICHNIS
II
3.1.1
BESTIMMUNG
DER
SENSITIVITAET
DES
HCMV-NACHWEISES
AUS
ZELLLYSAT
18
3.1.2
DER
EINFLUSS
VON
ZELLULAERER
DNA
AUF
SENSITIVITAET
UND
SPEZIFITAET
DES
HCMV-NACH
WEISES
19
3.1.3
EFFEKT
VON
FORMAMID
AUF
SENSITIVITAET
UND
SPEZIFITAET
DER
PCR
19
3.1.4
OPTIMIERUNG
DER
ANNEALINGTEMPERATUR
20
3.1.5
EINFLUSS
DER
MGCL2-KONZENTRATION
21
3.1.6 EXTENSIONSZEITANPASSUNG
BEI
LAENGEREN
ZIELSEQUENZEN
22
3.1.7 SENSITIVITAETSBESTIMMUNG
UNTER
EINSATZ
EINES
IN
ZELLLYSAT
GELOESTEN
PLASMIDS
22
3.1.8
EMPFINDLICHKEITSSTEIGERUNG
DES
HCMV-NACHWEISES
DURCH
SOUTHERN-BLOT
23
3.1.9
KONTAMINATIONEN
UND
IHRE
VERMEIDUNG
25
3.1.10
EINFLUSS
DER
UTP-KONZENTRATION
AUF
DIE
AMPLIFIZIERUNGSEFFIZIENZ
25
3.1.11
PRODUKTABBAU
DURCH
URACIL
N-GLYKOSYLASE
(UNG)
26
3.2
STELLENWERT
MIT
DER
PCR
IN
EINEM
PATIENTENKOLLEKTIV
27
3.2.1
DEFINITION
DES
POSITIVEN
HCMV-PCR
NACHWEISES
27
3.2.2 ANZAHL
DER
PATIENTEN
UND
EINZELUNTERSUCHUNGEN
27
3.2.3
AUFSCHLUESSELUNG
DER
EINZELUNTERSUCHUNGEN
NACH
MATERIALIEN
28
3.2.4
EINZELFALLDARSTELLUNGEN
29
3.2.5 IGG-SEROSTATUS
36
3.2.6
ABHAENGIGKEIT
DES
DNA-NACHWEISES
VON
DER
GESAMTZELLZAHL
DER
PROBE
37
4
DISKUSSION
38
4.1
SENSITIVITAET
38
4.2 DEFINITION
EINES
POSITIVEN
PCR-ERGEBNISES
39
4.3 EINFLUSS
DES
SEROSTATUS
DES
EMPFAENGERS
UND
DES
SPENDERS
39
4.4
BEDEUTUNG
DES
NACHWEISES
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
MATERIALIEN
40
4.5
ZUR
KORRELATION
VON
LABORBEFUNDEN
UND
KRANKENGESCHICHTE
41
4.6
WERTIGKEIT
DES
HCMV-DNA
NACHWEISES
43
4.7
UNTERSCHEIDUNG
ZWISCHEN
LATENTER
UND
AKTIVER
INFEKTION
44
5
ZUSAMMENFASSUNG
46
6
LITERATURVERZEICHNIS
47 |
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