Untersuchungen zur Membrantopologie des muskulären Chloridkanals hCIC-1 mit Hilfe sechs gezielter Histidin-Mutationen:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
SEITE
1 EINLEITUNG 1
2 ALLGEMEINER TEIL 2
2.1 EXPRESSIONSSYSTEME 2
2.2 DIE CIC-FAMILIE 4
2.3 DER MUSKULAERE CHLORIDKANAL CIC-1 8
2.3.1. ELEKTROPHYSIOLOGIE 8
2.3.2. MEMBRANTOPOLOGIE-MODELL 11
UND STRUKTUR-FUNKTIONSBEZIEHUNGEN
2.3.3. ZN
2+ UND DEPC ALS BLOCKIERENDE REAGENZIEN 14
2.3.4. MUTATIONEN 15
2.4. MYOTONIA CONGENITA 16
3 MATERIAL UND METHODEN 18
3.1 HEK-293 / TSA201 -ZELLEN ALS EXPRESSIONSSYSTEME 18
3.1.1 ZELLINIEN 18
3.1.2 TRANSIENTE TRANSFEKTION (MUTANTEN) 18
3.1.3 STABILE TRANSFEKTION (WILDTYP) 19
3.1.4 MUTAGENESE 19
3.2 ELEXTROPHYSIOLOGIE 20
3.2.1. FUNKTIONSPRINZIP DES PATCH-CLAMP-VERSTAERKERS 21
3.2.2 MESSANORDNUNGEN 23
3.2.3 MESSFEHLER 24
3.2.4 KOMPENSATIONSMOEGLICHKEITEN 25
3.2.5 DURCHFUEHRUNG DER EXPERIMENTE 28
3.2.5.1. APPLIKATION DER REAGENZIEN 30
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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4 ERGEBNISSE
4.1. PH-ABHAENGIGKEIT DER ZN
2+ UND DEPC-BLOCKADE
4.2. CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTEN
4.2.1. STROM-SPANNUNGS-BEZIEHUNG
4.2.2. OFFENWAHRSCHEINLICHKEIT
4.3. BLOCKADE DURCH ZN
2+ UND DEPC
4.4 DOPPELMUTANTE H180A/H451A
5 DISKUSSION
6 ZUSAMMENFASSUNG
7 LITERATURVERZEICHNIS
32
32
34
35
38
40
43
46
50
52
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