In-vitro-Differenzierung dentritischer Zellen zur tumorspezifischen Vakzinierung bei Non-Hodgkin-Lymphomen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1999
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1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
DIE
GRUNDZUEGE
DES
IMMUNSYSTEMS
.
1
1.2.
T-ZELLEN
.
1
1.3.
ZYTOKINE
IM
TH1/TH2
SYSTEM
.
3
1.
4.
B-ZELL
ENTWICKLUNG
.
5
1.
5.
NON-HODGKIN-LYMPHOME
.
8
1.6.
DENDRITISCHE
ZELLEN
.
10
1.
7.
TUMOR-ASSOZIIERTE-ANTIGENE
(TAA)
.14
1.8.
IMMUNTHERAPIE
UND
TUMORVAKZINIERUNG
.
16
1.
9.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
17
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
19
2.1
MATERIALIEN
.19
2.1.1.
CHEMIKALIEN
.19
2.1.2.
PLASTIKMATERIALIEN
.
19
2.
1.
4.
PUTTER
UND
LOESUNGEN
.
21
2.
2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
23
2.
2.
1.
RNA
PRAEPARATION
UND
CDNA
SYNTHESE
.
23
2.
2.
2.
RT-PCR
VON
CDNA
.
24
2.
2.
3.
GELELEKTROPHORESE
.
25
2.
3.
IMMUN
UND
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
26
2.
3.
1.
ZELLKULTURBEDINGUNGEN
.
26
2.
3.
2.
PRAEPARATION
VON
EINZELZELLSUSPENSIONEN
.
26
2.
3.
3.
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
27
2.
3.
4.
GEFRIERKONSERVIERUNG
VON
ZELLEN
.
27
2.3.
5.
ISOLATION
VON
DC
VORIAEUFERZELLEN
.
28
MAGNETISCHE
ZELLTRENNUNG
.
28
ISOLATION
ADHAERENTER
PBMC
AUS
PERIPHEREM
BLUT
.
29
2.3.6.
IN
VITRO
DIFFERENZIERUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
AUS
CD34
ZELLEN
.
30
2.
3.
7.
DIFFERENZIERUNG
VON
DC
AUS
CD14
ZELLEN
UND
ADHAERENTEN
PBMC
.
30
2.
3.
8.
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
VON
ZELLOBERFLAECHENPROTEINEN
.
31
2.
3.
9.
IMMUNFLUORESZENZANALYSE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS).
32
2.
3.
10.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
32
2.
3.
11.
ELISA
(ENZYM-GEKOPPELTER-LMMUNOSORBENTTEST)
2.
3.12.
ISOLIERUNG
CD4
POSITIVER
T
LYMPHOZYTEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
.
35
2.
3.
13.
"
MIXED
LYMPHOCYTE
REACTION"
(MLR)
.
35
2.
3.
14.
NACHWEIS
IDIOTYPSPEZIFISCHER
T-ZELLEN
.
36
2.
3.15.
VAKZINIERUNG
MULTIPLER
MYELOM
PATIENTEN
MIT
IDIOTYP
BELADENEN
DC-34
.
37
2.
3.
16.
DETEKTION
VON
IMMUNGLOBULIN
UND
IMMUNGLOBULIN
LEICHTKETTEN
IM
SERUM
.
38
2.
3.17.
DETEKTION
IDIOTYPSPEZIFISCHER
T-ZELLEN
MITTELS
ELISPOT
.
39
2.
4.
PROTEIN
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
41
2.
4.1.
AUFREINIGUNG
VON
IDIOTYP
PROTEINEN
.
41
2.
4.
2.
SDS-PAGE
.
42
2.5.
FIRMENVERZEICHNIS
.
44
3.
ERGEBNISSE
.
46
TEIL
I
3.1.
ZYTOKINPROFIL
BEI
B-NHL
ERKRANKUNGEN
.
46
3.1.1.
ZYTOKINMUSTER
IN
PATIENTEN
MIT
B-CLL
AUF
PROTEINEBENE
.
46
3.1.
2
ISOLIERUNG
VON
T
UND
B-LYMPHOZYTEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
.
47
3.1.3.
ZYTOKINMUSTERDER
B-CLL
AUF TRANSKRIPTIONSEBENE
MITTELS
RT-PCR
.
48
3.1.4.
ZYTOKINMUSTER
BEI
PATIENTEN
MIT
MULTIPLEM
MYELOM
.
52
TEIL
II
3.
2.
IN
VITRO
DIFFERENZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DENDNTISCHER
ZELLEN
.
53
3.
2.1.
IN
VITRO
DIFFERENZIERUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
53
3.
2.
2.
EXPRESSION
VON
ZELLOBERFLAECHENMOLEKUELEN
IN
VITRO
GENERIERTER
DC.
56
3.2.5.
T-ZELL
STIMULATION
IM
VERLAUF
DER
DC
IN
VITRO
DIFFERENZIERUNG
.
63
3.
2.
6.
AUTOLOGE T-ZELL
STIMULATION
DURCH
DENDRITISCHE
ZELLEN
.
63
3.
2.
7.
ZYTOKIN-SEKRETIONSMUSTER
IM
VERLAUF
DER
T-ZELL
STIMULATIONEN
.
64
3.
2.
8.
DC-34
UND
B-ZELLEN
IN
DER
ANTIGENSPEZIFISCHEN
T-ZELL
STIMULATION
.
66
3.
2.
9.
STIMULATION
VON
CD4/
CD45RA
UND
CD4/
CD45RO
T-ZELLEN DURCH
DC
.
66
3.
2.10.
INDUKTION
PRIMAERER
T-ZELL
ANTWORTEN
DURCH
DENDRITISCHE
ZELLEN
.
70
TEIL
III
3.
3.
DC
IN
DER
TUMORSPEZIFISCHEN
VAKZINIERUNG
BEIM
MULTIPLEN
MYELOM
.
72
3.
3.1.
T-ZELL
ANWORTEN
BEI
MULTIPLEN
MYELOM
PATIENTEN
VOR
VAKZINIERUNG
.
72
3.3.2.
AUFREINIGUNG
UND
PRAEPARATION
DER
IDIOTYP
FRAGMENTE
.
76
3.3.3.
DC-34
IN
DER
VAKZINIERUNG
MULTIPLER
MYELOM
PATIENTEN
MIT
TUMOR-IDIOTYP
.
77
3.
3.4.
T-ZELL
FUNKTION
BEI
MM
PATIENTEN
PRAE
UND
POST
DC-34
VAKZINIERUNG
.
79
3.3.5.
IDIOYTP-SPEZIFISCHE
B-ZELL
ANTWORT
BEI
MM
PATIENTEN
.
79
3.
3.6.
PARAPROTEINKONZENRATION
DER
MM
PATIENTEN
NACH
DC
VAKZINIERUNG
.
81
3.
3.
7.
ZUSAMMENSTELLUNG
DER
PATIENTEN
CHARAKTERISTIKA
.
83
4.
DISKUSSION
.
84
4.1.
ZYTOKINMUSTER
BEI
PATIENTEN
MIT
B-CLL
.
84
4.2.
ZYTOKINMUSTER
BEI
PATIENTEN
MIT
MULTIPLEM
MYELOM
.
86
4.
3.
IN
VITRO
DIFFERENZIERUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN:
VERGLEICH
VON
CD34
POSITIVEN
STAMMZELLEN,
CD14
MONOZYTEN
UND
MAKROPHAGEN
.
87
4.
4.
OBERFLAECHENMARKER
UND
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
88
4.
5.
FUNKTIONELLE
ANALYSEN
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
89
4.
5.1.
ZYTOKINEXPRESSION
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
89
4.
5.
2.
T-ZELL
STIMULATION
DURCH
IN
VITRO
DIFFERENZIERTE
DENDRITISCHE
ZELLEN
.
90
4.
5.3.
IN
VITRO
DIFFERENZIERTE
DENDRITISCHE
ZELLEN
UND
B-ZELLEN
ALS
APC
.
91
4.6.
DC-34
UND
DC-14
VERMITTELTE
T-ZELL
STIMULATION
BEIM
MULTIPLEN
MYELOM
.
92
4.
7.
RATIONALE
FUER
DEN
EINSATZ
DENDRITISCHER
ZELLEN
IN
DER
IMMUNTHERAPIE.
94
4.
8.
PLASMAZELLEN
ALS
APC
BEI
MULTIPLEN
MYELOM
PATIENTEN
.
96
4.9.
DAS
MULTIPLE
MYELOM
IN
DER
IMMUNTHERAPIE
.
96
4.10.
DENDRITISCHE
ZELLEN:
AUSBLICK
.
100
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
01
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
102
7.
ANHANG
.
117
7.1.
KLINISCHES
PRUEFPROTOKOLL
ZUR
VORLAGE
DER
LOKALEN
ETHIKKOMMISSION
(AUSZUG)
.
117
7.
2.
DEKLARATION
VON
HELSINKI
.
126
7.
3.
ANMERKUNGEN
.
127
7.
4.
LEBENSLAUF
.
129 |
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