Streßproteine und Sauerstoffradikale: Untersuchungen zum intestinalen Reperfusionsschaden
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
1
1.1
KLINISCHE
GRUNDLAGEN
1
1.2
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
ISCHAEMIE
UND
DES
REPERFIISIONSSCHADENS
2
1.2.1
PATHOPHYSIOLOGIE
DER
ISCHAEMIE
2
1.2.2
REPERFIISION
UND
REPERFUSIONSSCHADEN
4
1.2.3
BILDUNG
FREIER
SAUERSTOFFRADIKALE
5
1.2.4
DER
RADIKALSTOFFWECHSEL
DER
ZELLE
6
13
UNTERSUCHUNGSMODELLE
8
1.3.1
BISHERIGE
MODELLE
ZUR
UNTERSUCHUNG
DES
REPERFIISIONSSCHADENS
AM
DARM
8
1.4
HITZESCHOCK
ODER
STRESSPROTEINE
9
1.4.1
STRESSPROTEINE
SIND
EVOLUTIONAER
HOCH
KONSERVIERT
11
1.4.2
INDUKTION
DER
STRESSANTWORT
12
1.43
STRUKTUR
UND
FUNKTION
DER
STRESSPROTEINE
13
1.4.4
YYMOLECULAR
CHAPERONE
"
15
1.4.4.1
HSP100
FAMILIE
15
1.4.4.2
HSP90
FAMILIE
16
1.4.43
HSP70
FAMILIE
17
1.4.4.4
HSP60
FAMILIE
18
1.4.4.S
NIEDRIG
MOLEKULARE
HSPS
HSP27/28
19
1.4.4.6
ROLLE
DER
HSP
IM
I/R
MODELL
19
INHALTSVERZEICHNIS
2
MATERIAL
UND
METHODEN
20
2.1
EIN
NEUES
MODELL
20
2.1.1
ZELLKULTUR
20
2.1.2
DIE
CACO-2
ZELLINIE
21
2.13
KULTURBEDINGUNGEN
23
2.2
HYPOXIE/REOXIGENIERUNGSEXPERIMENTE
24
2.2.1
AUFBAU
DER
HYPOXIEKAMMER
25
2.2.2
DURCHFUEHRUNG
DER
HYPOXIE
UND
DER
REPERFUESION
26
2.3
HITZESCHOCK
VERFAHREN
26
2.4
HPLC-ANALYTIK
DER
ATP-POOLS
27
2.4.1
EXTRAKTION
DER
ADENOSINNUKLEOTIDE
27
2.4.2
AUFTRENNUNG
VON
ATP,
ADP
UND
AMP
MITTELS
HPLC
28
2.5
BESTIMMUNG
DER
SUPEROXIDRADIKALE
30
2.5.1
DURCHFUEHRUNG
31
2.5.2
NACHWEIS
DER
SPEZIFITAET
DES
MTT
FORMAZAN
TESTS
AUF
SUPEROXID
31
2.6
BESTIMMUNG
DER
LAKTATDEHYDROGENASE
32
2.6.1
DURCHFUEHRUNG
33
2.7
NACHWEIS
DER
NEUSYNTHESE
VON
HSP72
33
2.7.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
PROTEINE
33
2.7.2
AUFBEREITUNG
DER
PROBEN
34
2.73
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
34
2.73.1
DURCHFUEHRUNG
DER
SDS-PAGE
35
2.7.4
2-DIMENSIONALE
ELEKTROPHORESE
36
INHALTSVERZEICHNIS
2.7.4.1
DURCHFUEHRUNG
DER
ISOELEKTRISCHEN
FOKUSSIERUNG
37
2.7.4.2
DURCHFUEHRUNG
DER
ZWEITEN
DIMENSION
(SDS-PAGE)
37
2.7.5
WESTERN
BLOT
UND
IMMUNODETEKTION
38
2.7.5.1
DURCHFUEHRUNG
DES
WESTERN
BLOTS
39
2.73.2
IMMUNODETEKTION
VON
HSP72
39
2.8
STATISTIK
40
3
ERGEBNISSE
41
3.1
ENERGIEREICHE
ADENOSINPHOSPHATE
41
3.2
SUPEROXIDRADIKALE
43
33
LDH-FREISETZUNG
47
3.4
NEUSYNTHESE
VON
HSP72
50
3.4.1
NACHWEIS
DER
STRESSINDUKTION
50
3.4.2
HSP72
UNTER
DEM
EINFLUSS
RADIKALER
SUBSTANZEN
53
3.4.3
HYPOXIE/REOXIGENIERUNG
55
4
DISKUSSION
58
4.1
INTRAZELLULAERE
ENERGIEREICHE
ADENOSINPHOSPHATE
58
4.2
ROLLE
DER
SAUERSTOFFRADIKALE
59
4.2.1
ROLLE
DER
XANTHINOXIDASE
BEI
DER
SUPEROXIDFREISETZUNG
61
4.2.2
XANTHIN
WIRKT
ANTIOXIDATIV
62
4.2.3
EXTRAZELLULAERE
SOD
WIRKT
INTRAZELLULAER
62
43
INDUKTION
VON
HSP72
DURCH
HYPOXIE/REOXIGENIERUNG
63
43.1
SUPEROXID
SPIELT
EINE
ROLLE
IN
DER
STRESSINDUKTION
63
4.4
CACO-2
ZELLEN
ZEIGEN
EINE
VERSTAERKTE
EXPRESSION
VON
HSC70
65
INHALTSVERZEICHNIS
43
4.6
4.6.1
4.6.2
4.63
4.6.4
5
6
6.1
63
6.3
7
IST
DIE
CACO-2
ZELLINIE
DAS
RICHTIGE
MODELL
FUER
H/R
DES
DARMS?
66
AUSBLICK
68
WELCHE
ROLLE
HAT
SUPEROXID
IN
DER
STRESSINDUKTION?
68
UEBERPRUEFUNG
DES
H/R
MODELLS
AN
EINER
ANDEREN
ZELLINIE
Z.B.
IEC-6
68
HAT
DIE
INDUKTION
VON
HSPS
EINEN
PROTEKTIVEN
CHARAKTER
AUF
DIE
INTEGRITAET
DER
INTESTINALEN
BARRIERE?
69
WELCHEN
EINFLUSS
HAT
DIE
UEBEREXPRESSION
VON
HSC70
AUF
DIE
RESISTENZ
VON
TUMORZELLEN
GEGENUEBER
STRESSFAKTOREN?
70
ZUSAMMENFASSUNG
71
ANHANG
74
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
74
VERWENDETE
SUBSTANZEN
UND
LOESUNGEN
76
VERWENDETE
GERAETE
80
LITERATURNACHWEIS
81 |
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