Charakterisierung der Adenosinrezeptor mRNA Expression am nichtinsuffizienten und insuffizienten menschlichen Herzen:
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| Published: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG 1
2. MATERIAL UND METHODEN 8
2.1 HERZGEWEBE UND CHARAKTERISTIKA DER PATIENTEN 8
2.2 RNA PRAEPARATION 9
2.3 MRNA ANREICHERUNG NACH DER OLIGOTEXMETHODE 11
2.4 NORTHERN BLOT VERFAHREN 12
2.4.1 PRAEHYBRIDISIERUNG 12
2.4.2 HERSTELLUNG DER RADIOAKTIV MARKIERTEN CDNA SONDEN 13
2.4.3 HYBRIDISIERUNG 14
2.4.4 WASCHEN 14
2.4.5 EXPOSITION 14
2.4.6 ENTFERNUNG DER CDNA SONDEN 14
2.4.7 SPEZIFITAET UND NACHWEISGRENZE 15
2.4.8 SUBSTANZEN UND LOESUNGEN 15
2.5 HERSTELLUNG DER CDNA SONDEN 15
2.5.1 HERSTELLUNG KOMPETENTER E. COLI 15
2.5.2 TRANSFORMATION 16
2.5.3 MINI-PRAEPARATION VON PLASMID DNA AUS E. COLI 17
2.5.4 LARGE SCALE PRAEPARATION 17
2.5.5 CDNA GEWINNUNG AUS AGAROSEGELEN DURCH ELUTION 19
2.6 RNASE PROTECTION ASSAY 20
2.6.1 LINEARISIERUNG DER PLASMIDE 20
2.6.2 GSA MRNA 21
2.6.3 IN VITRO TRANSKRIPTION DER ANTISENSE SONDEN 21
2.6.4 HYBRIDISIERUNG DER CRNA ANTISENSE MIT GESAMT-RNA AUS
MENSCHLICHEM GEWEBE 22
2.6.5 RNASE VERDAU 22
2.6.6 AUFTRENNUNG UND DETEKTION DER MRNA 23
2.6.7 LINEARITAET UND QUANTIFIZIERUNG 23
2.6.8 SUBSTANZEN UND LOESUNGEN 25
2.7 STATISTIK 25
2.8 SUBSTANZEN UND GERAETE 26
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.8.1 SUBSTANZEN 26
2.8.2 GERAETE 27
3. ERGEBNISSE 36
3.1 QUALITATIVER NACHWEIS DER VERSCHIEDENEN ADENOSINREZEPTOR
MRNAS IN MENSCHLICHEN HERZEN MIT HILFE DES NORTHERN BLOTS 36
3.2 ADENOSINREZEPTOR MRNA BESTIMMUNG IN MENSCHLICHEN HERZEN
MIT HILFE DES RNASE PROTECTION ASSAYS 36
3.2.1 QUALITATIVER NACHWEIS 36
3.2.2 QUANTITATIVE VERAENDERUNGEN 37
3.2.3 ABHAENGIGKEIT DES ADENOSINREZEPTOR
MRNA-GEHALTS VOM ALTER DER PATIENTEN 40
3.2.4 REGIONALE UNTERSCHIEDE 40
3.2.5 HERZINFARKT 41
4. DISKUSSION 53
4.1 QUALITATIVER NACHWEIS DER ADENOSINREZEPTOR MRNAS MIT
HILFE DES NORTHERN BLOTS 53
4.2 QUALITATIVER NACHWEIS DER ADENOSINREZEPTOR MRNAS
IM RNASE PROTECTION ASSAY 54
4.3 QUANTITATIVE VERAENDERUNGEN DER ADENOSINREZEPTOR MRNA
EXPRESSION BEI DER MENSCHLICHEN HERZINSUFFIZIENZ 59
4.4 ZUSAMMENFASSENDE BEWERTUNG 66
5. ZUSAMMENFASSUNG 69
6. LITERATURVERZEICHNIS 72 |
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