Genomanalyse verschiedener Isolate des Bovinen Leukosevirus unter besonderer Berücksichtigung des serologischen Status und der geographischen Herkunft des Rindes:
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I
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
LITERATURUEBERSICHT
3
2.1.
ENZOOTISCHE
RINDERLEUKOSE
(ERL)
3
2.1.1.
AGENS
DER
ENZOOTISCHEN
RINDERLEUKOSE
3
2.1.2.
VORKOMMEN
UND
VERBREITUNG
3
2.1.3.
EPIDEMIOLOGIE
UND
UEBERTRAGUNG
4
2.1.4.
PATHOGENESE
UND
KLINISCHES
BILD
7
2.1.5.
PROPHYLAXE
UND
BEKAEMPFUNG
10
2.1.6.
BOVINE
LEUKOSEVIRUS-INFEKTIONEN
ANDERER
SPEZIES
12
2.2.
STRUKTUR
DES
BOVINEN
LEUKOSEVIRUS
13
2.2.1.
MORPHOLOGIE
13
2.2.2.
GENOM
14
2.2.3.
GENOMVARIATIONEN
17
2.2.4.
PROTEINE
19
2.2.5.
REPLIKATION
UND
EXPRESSION
22
2.3.
ZIELZELLEN
23
2.4.
DIAGNOSTISCHE
NACHWEISVERFAHREN
24
2.4.1.
HAEMATOLOGISCHER
NACHWEIS
24
2.4.2.
SEROLOGISCHE
NACHWEISVERFAHREN
25
2.4.3.
DIREKTE
NACHWEISVERFAHREN
26
2.5.
IMMUNOLOGIE
28
2.6.
SEQUENZIERUNGSMETHODEN
30
2.6.1.
MAXAM-GILBERT-METHODE
30
2.6.2.
SANGER-METHODE
31
2.6.3.
MODIFIZIERTE
SEQUENZIERUNGSVERFAHREN
32
2.6.4.
DIREKTE
SEQUENZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
33
2.6.5,
AUTOMATISCHE
SEQUENZANALYSE
UNTER
VERWENDUNG
FLUORESZENSFARBSTOFF-
33
MARKIERTER
PRIMER
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
35
3.1.
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
35
3.1.1.
TIERMATERIAL
35
3.1.2.
KONTROLL-DNA
37
N
3.2.
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
37
3.3.
CHEMIKALIEN
UND
TESTKITS
41
3.4.
DNA-PRAEPARATION
42
3.4.1.
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
AUS
BLUT
42
3.4.2.
MINIPRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
(PDNA)
43
3.4.3.
GROSSPRAEPARATION
VON
PDNA
44
3.5.
ISOLIERUNG
VON
EINZELSTRANG-DNA
(SSDNA)
44
3.6.
DNA-QUANTIFIZIERUNG
UND
QUALITATIVE
CHARAKTERISIERUNG
45
3.7.
REINIGUNG
VON
PDNA
45
3.7.1.
PHENOLREINIGUNG
45
3.7.2.
CAESIUMCHLORID-REINIGUNG
45
3.8.
SPALTUNG
VON
PDNA
UND
AMPLIFIKATEN
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
46
3.9.
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
46
3.10.
KLONIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
46
3.10.1.
HERSTELLUNG
SPEZIFISCHER
DNA-FRAGMENTE
46
3.10.2.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
47
3.10.3.
LIGATION
47
3.10.4.
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
ZELLEN
48
3.11.
SEQUENZANALYSE
48
3.11.1.
FUER
DIE
SEQUENZIERUNG
VERWENDETE
PRIMER
UND
DEREN
MARKIERUNG
49
3.11.2.
SEQUENZIERUNGSREAKTION
49
3.11.3.
ACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
51
3.11.4.
AUTORADIOGRAPHIE
52
3.12.
POLYMERASEKETTENREAKTION
52
3.12.1.
VERWENDETE
PRIMER
52
3.12.2.
AMPLIFIKATIONSREAKTION
53
3.12.3.
ARBEITSBEDINGUNGEN
55
3.13.
LEUKOZYTENKURZZEITKULTUR
55
3.14.
ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBET
ASSAY
56
3.15.
WESTERN
BLOT
57
3.15.1.
PROBENAUFBEREITUNG
57
3.15.2.
ELEKTROPHORESE
57
3.15.3.
ELEKTROTRANSFER
IM
SEMIDRY-VERFAHREN
58
3.15.4.
IMMUNOLOGISCHER
PROTEINNACHWEIS
MIT
DER
TROPIX-METHODE
58
4.
ERGEBNISSE
59
4.1.
BLV-ANTIKOERPERSTATUS
VON
37
UNTERSUCHTEN
RINDERN
IM
VERGLEICH
MIT
59
ERGEBNISSEN
AUS
DEM
BLV-PROVIRUSNACHWEIS
MITTELS
PCR
4.2.
VERGLEICH
UNTERSCHIEDLICHER
SEQUENZIERUNGSMETHODEN
61
M
4.3.
UNTERSUCHUNG
DER
LTR-REGION
65
4.3.1.
PCR
DER
BLV-LTR-REGION
65
4.3.2.
RESTRIKTIONSENZYMANALYSEN
KLONIERTER
BLV-LTR
FRAGMENTE
66
4.3.3.
SEQUENZIERUNG
VON
BLV-LTR
FRAGMENTEN
68
4.4.
UNTERSUCHUNG
DER
ENV-REGION
DES
BLV
68
4.4.1.
RESTRIKTIONSENZYMANALYSEN
KLONIERTER
UND
NICHT
KLONIERTER
PCR
ENV
1
1
FRAGMENTE
4.4.2.
DARSTELLUNG
DER
DNA-SEQUENZIERUNGSERGEBNISSE
UND
VERGLEICH
DER
74
ERMITTELTEN
ENV-SEQUENZ
UNTERSUCHTER
PROVIREN
MIT
DER
BEKANNTER
BLV-
ISOLATE
4.4.3.
AUSWIRKUNGEN
VON
DNA-SEQUENZVERAENDERUNGEN
AUF
DIE
RNA
79
SEKUNDAERSTRUKTUR
DER
BLV-ENV-REGION
4.4.4.
AUSWIRKUNGEN
VON
DNA-SEQUENZVERAENDERUNGEN
AUF
DIE
AMINOSAEURE
83
SEQUENZ
UND
DIE
PROTEINSEKUNDAERSTRUKTUR
DER
BLV-ENV-REGION
4.5.
UNTERSUCHUNG
DERPOZ-REGION
DES
BLV
86
4.5.1.
RESTRIKTIONSENZYMANALYSEN
KLONIERETER
POZ-FRAGMENTE
86
4.5.2.
DARSTELLUNG
DER
DNA-SEQUENZIERUNGSERGEBNISSE
UND
VERGLEICH
DER
87
ERMITTELTEN
POZ-SEQUENZ
UNTERSUCHTER
PROVIREN
MIT
DER
BEKANNTER
BLV-
ISOLATE
4.5.3.
EINFLUSS
VON
DNA-SEQUENZAENDERUNGEN
AUF
SPLEISSDONOR-,
88
SPLICEAKZEPTOR
UND
STARTCODONSEQUENZEN
DER
BLV-POZ-REGION
4.5.4.
AUSWIRKUNGEN
VON
DNA-SEQUENZVERAENDERUNGEN
AUF
DIE
AMINOSAEURE-
89
SEQUENZ
UND
DIE
PROTEINSEKUNDAERSTRUKTUR
DER
BLV-POZ-REGION
4.6.
UNTERSUCHUNG
DER
ZAR-REGION
DES
BLV
91
4.6.1.
DARSTELLUNG
DER
DNA-SEQUENZERGEBNISSE
UND
VERGLEICH
DER
ERMITTELTEN
91
ZAR-SEQUENZ
UNTERSUCHTER
PROVIREN
MIT
DER
BEKANNTER
BLV-ISOLATE
UNTER
BESONDERER
BERUECKSICHTIGUNG
VON
SPLICEAKZEPTORSEQUENZEN
DER
REGION
4.6.2.
AUSWIRKUNGEN
VON
DNA-SEQUENZAENDERUNGEN
AUF
DIE
AMINOSAEURE-
92
SEQUENZ
UND
DIE
PROTEINSEKUNDAERSTRUKTUR
DER
BLV-ZOX-REGION
4.6.3.
SEQUENZVERGLEICHE
SECHS
VERSCHIEDENER
KLONE
DES
GLEICHEN
94
AUSGANGSMATERIALS
4.7.
'
LEUKOZYTENKURZZEITKULTIVIERUNG
94
S.
DISKUSSION
97
5.1.
VERGLEICHENDE
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
NACHWEIS
EINER
BLV-INFEKTION
98
MITTELS
AGID,
ELISA,
LEUKOZYTENKURZZEITKULTUR
UND
PCR
5.2.
DIE
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
99
5.3.
UNTERSUCHUNGEN
IN
DER
LTR-REGION
DES
BLV
106
IV
5.4.
UNTERSUCHUNGEN
VON
PCR-PRODUKTEN
AUS
DER
ENV-,POZ-UND
TAX-REGION
108
DES
BLV
VERSCHIEDENER
ISOLATE
5.5.
DER
EINFLUSS
VON
NUKLEOTIDVERAENDERUNGEN
AUF
DIE
RNA-UND
113
PROTEINSEKUNDAERSTRUKTUR
DES
BLV
5.6.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
VORKOMMEN
VON
BLV-PROVIRUSMUTANTEN
UND
IHRE
115
BEZIEHUNG
ZUM
SEROLOGISCHEN
STATUS
UND
DER
HERKUNFT
DES
WIRTSTIERES
6.
ZUSAMMENFASSUNG
119
7.
SUMMARY
121
8.
LITERATURVERZEICHNIS
123
9.
ANHANG
154
9.1.
DNA-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
154
DER
ENV-REGION
9.2.
AS-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
DER
162
ENV-REGION
9.3.
DNA-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
165
DER
POZ-REGION
9.4.
AS-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
DER
168
POZ-REGION
9.5.
DNA-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
169
DER
TAX-REGION
9.6.
AS-SEQUENZVERGLEICH
VON
AUSGEWAEHLTEN
BLV-PROVIRUSABSCHNITTEN
DER
172
TAX-REGION
DANKSAGUNG
173
LEBENSLAUF
174 |
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