Verfügbarkeit: Das Phytochrom CP2 des Mooses Ceratodon purpureus

Das Phytochrom CP2 des Mooses Ceratodon purpureus: Expression und Charakterisierung

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Zeidler, Mathias 1969- (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1998
Schlagworte:	Hornzahnmoos - Phytochrom - Struktur-Aktivitäts-Beziehung Struktur-Aktivitäts-Beziehung Phytochrom Hornzahnmoos Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
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adam_text	?- DAS PHYTOCHROM CP2 DES MOOSES CERATODON PURPUREUS. EXPRESSION UND CHARAKTERISIERUNG DISSERTATION ZUM ERLANGEN DES GRADES DOKTOR DER NATURWISSENSCHAFTEN AM FACHBEREICH BIOLOGIE DER FREIEN UNIVERSITAET BERLIN VORGELEGT VON MATHIAS ZEIDLER BERLIN 1998 INHALT ABKUERZUNGEN 7 1 EINLEITUNG 9 1.1 MOOSE ALS MODELLORGANISMUS 9 1.2 MOLEKULARBIOLOGISCHE ANSAETZE BEI MOOSEN 11 1.2.1 TRANSFORMATION UND TRANSGEN-EXPRESSION . * 11 1.2.2 HOMOLOGE REKOMBINATION IN MOOSEN 12 1.3 PHYTOCHROM 14 1.4 PHYTOCHROM IN CERATODON 16 2 ARBEITSANSATZ UND ZIEL 18 2.1 HETEROLOGE EXPRESSION UND IN VITRO ANALYSE 18 2.2 ETABLIERUNG EINES EXPRESSIONSSYSTEMS IN CERATODON 18 2.3 VERSUCHE ZUR HOMOLOGEN REKOMBINATION IN CERATODON 18 2.4 EXPRESSION VON CP2HIS IN CERATODON 19 3 MATERIAL 20 3.1 ORGANISMEN 20 3.2 FEINCHEMIKALIEN UND MATERIALIEN 20 3.3 LOESUNGEN UND PUFFER 24 3.3.1 WASSER 24 3.3.2 FUER DIE MOOSANZUCHT 24 3.3.3 FUER DIE HEFEANZUCHT 24 3.3.4 ZUR PHYTOCHROMEXTRAKTION AUS HEFE 25 3.3.5 ZUR PHYTOCHROMEXTRAKTION AUS CERATODON 25 3.3.6 FUER DIE AFFINTTAETS- UND SIZE-EXCLUSION-CHROMATOGRAPHIE 25 3.3.7 ZUR PROTOPLASTIERUNG UND TRANSFORMATION 25 3.3.8 FUER DIE PROTEINEXTRAKTION ZUM GLUCORONIDASE ASSAY 26 3.3.9 FUER DIE AMIDOSCHWARZ-PROTEINBESTIMMUNG 26 3.3.10 FUER DIE BRADFORD PROTEINBESTIMMUNG 26 3.3.11 FUER DIE SDS-PAGE UND DIE WESTERNB,LOT-ANALYSE 27 3.3 12 FUER NATIVE GELE 28 3.3.13 FUER DNA MINI- UND MAXIPREPS AUS E. COLI 29 3.3.14 DNA EXTRAKTION AUS MOOS (MINIPREP) 30 3.3.15 DNA EXTRAKTION AUS MOOS (MAXIPREP) 30 3.3.16 FUER DIG-SOUTHERN BLOTTMG 30 4 METHODEN 32 4.1 ALLGEMEINE KLONIERUNG UND PLASMIDAUFBEREITUNG 32 4.1.1 DNA ANALYSE 32 4.1.2 KLONIERUNGEN 32 4.1.3 PRAEPARATIVE PCR 33 4.1.4 DNA PRAEPARATIONEN FUER MOOS TRANSFORMATIONEN 34 4.2 METHODEN FUER DIE EXPRESSION VON CP2HIS IN HEFE 34 4.2.1 KLONIERUNG DER CP2HIS CDS IN DEN HEFEEXPRESSIONSVEKTOR 34 4 2.2 PRAEPARATION VON ELEKTROKOMPETENTEN S. CEREVISIAE 35 4.2.3 TRANSFORMATION DER HEFE (S. CEREVISIAE,* 35 4.2.4 PHYTOCHROMEXTRAKTION AUS HEFE 35 4.2.5 NI-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE 36 4.2.6 PHYTOCHROM ASSEMBLIERUNG UND SPEKTRALANALYSE 36 4.2.7SDS-PAGE UND WESTERN BLOTTING 36 4.2.8 NATIVE GELELEKTROPHORESE 37 4.2.9SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHIE 57 4.2.10 LASER-BLITZPHOTOLYSE 38 4.3 METHODEN FUER DIE TRANSGEN-EXPRESSION IN CERATODON 40 4.3.1 MOOSANZUCHT 40 4.3.2 UEBERSICHT UEBER DIE HERSTELLUNG DER EXPRESSIONSKONSTRUKTE 40 4.3.3 TRANSFORMATION VON CERATODON 42 4.3.4 MINI-PROTEINEXTRAKTION 43 4.3.5 REPORTERGENANALYSE 43 4.3.6 DNA EXTRAKTION AUS CERATODON 44 4 3.7 D1G SONDENHERSTELLUNG 45 4.3.8DIG-SOUTHERN BLOTTMG 45 4.4 METHODEN FUER DEN VERSUCH DES GEN-TARGETING 46 4.4.1 HERSTELLUNG DES VEKTORS 46 4 4.2 TRANSFORMATION UND SELEKTION 46 4.5 METHODEN FUER DIE EXPRESSION VON CP2HIS IN CERATODON 47 4.5.1 TRANSFORMATION VON CERATODON 47 4.5.2 LICHTPHYSIOLOGISCHE UNTERSUCHUNG DER TRANSFORMANTEN 47 4.5.3 PHYTOCHROMEXTRAKTION AUS CERATODON 48 4.5.4 PHYTOCHROMMESSUNGEN AM RATIOSPEC 48 5 ERGEBNISSE 49 5. /EXPRESSION VON CP2HIS INS. CEREVISAE 49 5.1 1 KLOMERUNG DER CP2HIS CDS FUER DIE HEFEEXPRESSION 49 5.1.2 TRANSFORMATION UND SELEKTION 50 51.3 REINIGUNG DES HETEROLOG EXPRIMIERTEN CP2HIS 51 5.1.4 ASSEMBLIERUNG 53 5.1.5 PHOTOGLEWHGEWICHT 54 5 1.6 ABSORPTIONSSPEKTREN 56 5.1.7 DUNKELREVERSION 60 5.1.8PHOTOKONVERSION: LASER-BLITZPHOTOLYSE 61 5 1.9 GELFILTRATION UND NATIVE GELELEKTROPHORESE 62 5.1.10 ZUSAMMENFASSUNG DER UNTERSUCHUNGEN DES HETEROLOG EXPRIMIERTEN CP2HIS 63 5.2 TRANSGEN-EXPRESSION IN CERATODON 64 5.2.1 UEBERSICHT UEBER DIE EXPRESSWNSPLASMIDE 64 5.2.2 ANALYSE DES SCHICKSALS VON TRANSGENEN ANHAND VON GFP 65 5.2.3 SOUTHERN-BLOT ANALYSE VERSCHIEDENER TRANSFORMANTEN 67 5.2.4 ZUSAMMENFASSUNG DER EXPRESSIONSERGEBNISSE 69 5.3 VERSUCH DES TARGETINGS DES GENOMISCHEN LOCUS VON CP2 70 5 3.1 HERSTELLUNG DES KONSTRUKTES 70 5.3.2 TRANSFORMATION UND SELEKTION 70 5.3.3 ANALYSE DER TRANSFORMANTEN ANHAND DES PHOTOTROPISMUS 71 5.3.4 ANALYSE DER TRANSFORMANTEN MIT PCR UND SOUTHERN BLOTTMG 71 5.3.5 ZUSAMMENFASSUNG DER ERGEBNISSE DES GEZIELTEN AUSSCHALTENS VON CP2 74 5.4 EXPRESSION VON CP2HISIN CERATODON 75 5. 4.1 DAS EXPRESSIONSPLASMID 75 5.4.2 SELEKTION 76 5.4.3 PHYTOCHROMEXTRAKTION AUS CERATODON 77 5.4.4 ANALYSE DES PHYTOCHROMGEHALTES: RATIOSPEC UND WESTERN BLOT 77 5.4.5 PHAENOTYPISCHE BESONDERHEITEN / PHOTOTROPISMUS 79 5.4.6 ZUSAMMENFASSUNG DER CP2HIS-EXPRESSIONSERGEBNISSE M CERATODON 82 6 DISKUSSION 83 6.1 HETEROLOGE EXPRESSION VON CP2HIS 83 6.2 TRANSGEN EXPRESSION IN CERATODON 86 6.3 VERSUCH DES TARGETINGS DES GENOMISCHEN LOCUS VON CP2 87 6.4 UEBEREXPRESSION VON CP2HISW CERATODON 89 7 ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK 90 8 LITERATUR 92 9 LEBENSLAUF 100
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