Experimentelle Untersuchungen zur Darstellung und Populationsgenetik der humanen DNA-Polymorphismen im alpha-Fibrinogen und im D21S11 Locus:
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
S
HORT
T
ANDEM
R
EPEATS
2
D21S11
3
FGA
3
S
ENSITIVITAET
4
Z
UVERLAESSIGKEIT
6
P
OPULATIONSGENETIK
7
E
LEKTROPHORESE
8
Z
IELE
DER
U
NTERSUCHUNG
9
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
II
1.
DNA-E
XTRAKTION
11
2.
DNA-Q
UANTIFIZIERUNG
11
2.1
P
HOTOMETRISCHE
Q
UANTIFIZIERUNG
11
2.2
H
UMANSPEZIFISCHE
Q
UANTIFIZIERUNG
MIT
EINER
DNA-S
ONDE
12
2.2.1
ALLGEMEINES
12
2.2.2
DENATURIERUNG
UND
IMMOBILISIERUNG
DER
DNA
AUF
DER
NYLONMEMBRAN
/
BLOT
12
2.2.3
HYBRIDISIERUNG
MIT
DER
DNA-SONDE
D17Z1
13
2.2.4
DETEKTION
DER
HYBRIDISIERUNG
MITTELS
CHEMILUMINESZENZ
13
3.
DNA-M
ISCHUNGEN
14
4.
P
OLYMERASE
-K
ETTENREAKTION
(PCR)
14
4.1
PCR-O
PTIMIERUNG
14
4.2
A
MPLIFIKATION
VON
D2
1
S
11
15
4.2.1
AMPLIFIKATIONSANSATZ
15
4.2.2
PRIMER
15
4.2.3
PCR-TEMPERATURZYKLUS
16
4.3
A
MPLIFIKATION
VON
H
UM
FGA
(F
IBRA
)
16
4.3.1
AMPLIFIKATIONSANSATZ
16
4.3.2
PRIMER
17
4.3.3 PCR-TEMPERATURZYKLUS
17
4.4
A
NFERTIGUNG
DER
A
LLELLEITER
18
5.
E
LEKTROPHORESE
19
5.1
A
MPLIFIKATIONSTESTGELE
19
5.2
SLLBERFARBUNG
20
5.3
H
ORIZONTALE
NATTVE
P
OLYACRYLAMID
-G
ELELEKTROPHORESE
20
5.4
V
ERTIKALE
NATIVE
P
OLYACRYLAMID
-G
ELELEKTROPHORESE
21
5.5
V
ERTIKALE
DENATURIERENDE
P
OLYACRYLAMID
-G
ELELEKTROPHORESE
22
5.6
A
UTOMATISCHE
L
ASER
-F
LUORESZENZ
-D
ETEKTION
22
6. A
USWERTUNG
DER
P
OPULATIONSDATEN
23
III.
ERGEBNISSE
DER
VERSCHIEDENEN
ELEKTROPHORESEVERFAHREN
25
1,
H
ORIZONTALE
NATIVE
P
OLYACRYLAMID
-G
ELELEKTROPHORESE
2,
VERTIKALE
NATIVE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
3.
VERTIKALE
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
4,
A
UTOMATISCHE
L
ASER
-F
LUORESZENZ
-D
ETEKTION
25
26
31
34
IV.
ERGEBNISSE FUER
DEN
GENORT
D21S11
39
LPCR
1.1
P
RIMERKONZENTRATION
1.2
A
NNEALING
-T
EMPERATUR
1.3
O
PTIMIERUNG
DER
PCR-T
EMPERATURPROFILE
1.4
Z
YKLENZAHL
1.5
F
LUORESZENZ
-
UND
N
ICHTFLUORESZENZ
-P
RIMER
2.
SENSINVITAET
3.
DNA-M
ISCHUNGEN
4.
DIE
D21S11-ALLELLEITER
5.
P
OPULATIONSSTUDIE
6.
P
OPULATIONSGENETISCHE
B
ERECHNUNGEN
39
39
39
40
42
43
46
53
55
56
62
V.
ERGEBNISSE
FUER
DEN
GENORT
HUMFGA
/
FIBRA
65
L.PCR
1.1
P
RIMERKONZENTRATION
1.2
A
NNEALING
-T
EMPERATUR
1.3
O
PTIMIERUNG
DER
PCR-T
EMPERATURPROFILE
1.4
ZYKLENZAHL
1.5
FLUORESZENZ
-P
RIMER
2,
SENSITIVITAET
3.
DNA-MISCHUNGEN
4.
DIE
FGA-A
LLELLEITER
5.
P
OPULATIONSSTUDIE
6.
POPULATIONSGENETISCHE
BERECHNUNGEN
7,
UNABHAENGIGKEIT
DER
BEIDEN
GENORTE
65
65
66
66
69
69
70
74
76
78
83
85
VI.
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
87
LPCR
2.
E
LEKTROPHORESE
3.
P
OPULATIONSGENETIK
87
89
94
VH.
ZUSAMMENFASSUNG
97
VIII.
LITERATURVERZEICHNIS
99
IX.
ANHANG
107
L
OESUNGEN
C
HEMIKALIEN
S
ONSTIGE
M
ATERIALIEN
G
ERAETE
107
108
108
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