Interferon-g-abhängige Induktion von Keratin 17 in HaCaT-Keratinozyten: Nachweis mittels Western-Blot und einer an Zellkultur-Platten direkt durchführbaren APAAP-ELISA-Technik
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
1.
EINLEITUNG
5
1.1
A
SPEKTE
ZUR
P
ATHOGENESE
DER
P
SORIASIS
5
1.1.1
E
PIDERMALE
P
ROLIFERATIONS
-
UND
D
IFFERENZIERUNGS
-M
ARKER
7
1.12
D
ERMALES
ENTZUENDLICHES
I
NFILTRAT
UND
ZUGEHOERIGES
Z
YTOKIN
-M
USTER
9
1.2
M
OLEKULARE
S
TRUKTUR
VON
IFN^Y
UND
SEINEM
ZUGEHOERIGEN
R
EZEPTOR
10
1.3
S
TRUKTURELLE
C
HARAKTERISTIKA
VON
K
ERATIN
17
12
1.4
F
RAGESTELLUNG
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
14
2.1
Z
USAMMENSTELLUNG
DER
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
14
2.1.1
C
HEMIKALIEN
UND
BIOLOGISCHE
A
GENZIEN
14
2.1.2
A
NTIKOERPER
18
2.1.2.1
PRIMAERANTIKOERPER
18
2.1.2.2
SEKUNDAER
UND
TERTIAERANTIKOERPER
18
2.2
G
ERAETE
19
2.3
M
ETHODIK
20
2.3.1.
Z
ELLKULTIVIERUNG
20
2.3.1.1
VERWENDETE
KULTURGEFAESSE
20
2.3.1.2
VERWENDETE
KULTURMEDIEN
20
2.3.1.3
ZELLKULTIVIERUNG
VON
HACAT
UND
HELA-ZELLEN
SOWIE
INKUBATION
MIT
IFN-Y
23
2
3.1.4
EXPANSIONSKULTIVIERUNG
VON
NICHT-TRANSFORMIERTEN,
PRIMAEREN
HUMAN
KERATINOZYTEN
24
2.3.1.4.1
3T3-"FEEDER-LAYER"
24
2.3.1.4.2
ISOLIERUNG
DER
KERATINOZYTEN
AUS
DEN
HAUTPRAEPARATEN
25
2.3.1.4.3
KULTIVIERUNG
UND
SUBKULTIVIERUNG
DER
NICHT-TRANSFORMIERTEN,
PRIMAEREN
HUMAN-KERATINOZYTEN
25
2.3.1
4
4
AUSSAAT
DER
NICHT-TRANSFORMIERTEN,
PRIMAEREN
HUMAN-KERATINOZYTEN
IN
96-WELL-PLATTEN
26
2.3.2.
K
ERATINEXTRAKTION
27
2.3.3
P
ROTEINBESTIMMUNG
28
2.3.4
E
INDIMENSIONALE
E
LEKTROPHORESE
29
2.3.4.1
HERSTELLUNG
DER
GELE
30
2.3.4.2
GELELEKTROPHORESE
31
2.3.4.3
LAUFBEDINGUNGEN
32
2.3.5
C
OOMASSIE
-F
AERBUNG
33
2.3.6
W
ESTERN
-B
LOT
-T
ECHNIK
33
2.3.6.1
AUFBAU
DER
"TRANSFERUNIT
"
FUER
DAS
ELEKTROBLOTTING
34
2.3.6.2
IMMUNCHEMISCHER
KERATINNACHWEIS
35
2.3.7
K17-DETEKTION
AN
ZELLKULTUREN
IN
96-WELL-PLATTEN
MITTELS
APAAP
ELISA
36
2.3.8
P
HOTODOKUMENTATION
UND
A
USWERTUNG
2.3.9
S
TATISTISCHE
A
USWERTUNG
38
39
3.
ERGEBNISSE
40
3.1
Q
UANTIFIZIERUNG
DER
K17-E
XPRESSION
MITTELS
SDS-E
LEKTROPHORESE
UND
W
ESTERN
-B
LOT
3.1.1
K17-EXPRESSION
IN
HACAT-ZELLEN
3.1.2
K17-EXPRESSION
IN
HELA-ZELLEN
3.2
K17-DIREKTBESTIMMUNG
MITTELS
APAAP-ELISA-TECHNIK
AN
96-WELL
P
LATTEN
3.2.1
K17-EXPRESSION
IN
H
A
C
A
T-ZELLEN
3.2.1.1
EINFLUSS
VON
IFN-Y
AUF
DIE
PROLIFERATION
VON
HACAT-ZELLEN
3.2.2
K17-EXPRESSION
IN
NICHT
TRANSFORMIERTEN,
PRIMAEREN
HUMAN
K
ERATINOZYTEN
3.2
2.1
EINFLUSS
VON
(FN-Y
AUF
DIE
PROLIFERATION VON
NICHT-TRANSFORMIERTEN,
PRIMAEREN
HUMAN-KERATINOZYTEN
3.2.3
V
ERGLEICHENDE
D
ARSTELLUNG
ZWISCHEN
H
A
C
A
T-Z
ELLEN
UND
NICHT
TRANSFORMIERTEN
,
PRIMAEREN
H
UMAN
-K
ERATINOZYTEN
43
43
45
47
47
49
51
53
55
4.
DISKUSSION
56
4.1
Z
USAMMENFASSENDE
D
ARSTELLUNG
DER
E
RGEBNISSE
MIT
KRITISCHER
W
ERTUNG
4.1.1
H
A
C
A
T-Z
ELLEN
ALS
GEEIGNETES
T
ESTSYSTEM
FUER
DIE
IFN-Y
ABHAENGIGE
I
NDUKTION
VON
K17
4.2
B
EDEUTUNG
DER
EIGENEN
B
EFUNDE
IM
V
ERGLEICH
ZU
BEGLEITENDEN
S
TUDIEN
ANDERER
U
NTERSUCHER
4
2
1
E
FFEKTE
VON
IFN-Y
AUF
DIE
K
ERATINOZYTEN
-V
ITALITAET
4.2.2
ELNFLUU
VON
IFN-Y
AUF
DIE
KERATINOZYTEN-PROLIFERATION
4.2.3
IFN-Y
ABHAENGIGE
INDUKTION
VON
KERATIN
17:
IMMUNZYTOLOGIE
UND
IN-SITU
56
58
59
59
60
H
YBRIDISIERUNG
4.3
B
EDINGUNGEN
DER
E
XPRESSION
VON
K
ERATIN
17
4.4
IFN-Y-ABHAENGIGE
GENREGULATION
4.5
B
EDEUTUNG
DER
I
NDUKTION
VON
K
ERATIN
17
DURCH
IFN-Y
FUER
DIE
P
ATHOGENESE
DER
P
SORIASIS
62
63
64
65
5.
ZUSAMMENFASSUNG
67
6.
LITERATURVERZEICHNIS
69
VORABVEROEFFENTLICHUNG
79
LEBENSLAUF
81 |
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