Charakterisierung human Endothelin 1 transgener Mäuse:
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A
EINLEITUNG.YY.YY.YYYYYY.,.YYYY.YYYY.YY,.YY,YYYYYY.YYYY.YYYY,.YYYYYYYYI
B
LITERATURUEBERSICHT
.2
1.
DAS
ENDOTHELINSYSTEM
.2
1.1.
ENTDECKUNG
UND
AUFBAU
DER
ENDOTHELINE
.
2
1.2.
LOKALISATION
UND
SYNTHESE
.
3
1.3.
ENDOTHELINREZEPTOREN
.
7
1.3.1.
ALLGEMEIN
.
7
1.3.2.
DER
ETA-REZEPTOR
.
9
1.3.3.
DER
ETB-REZEPTOR
.
10
1
4
ABBAU
DER
ENDOTHELINE
.
11
2.
DIE
BEDEUTUNG
DES
ENDOTHELINS
FUER
KARDIOVASKULAERE
ERKRANKUNGEN
.
11
2.1.
ENDOTHELIN
UND
HYPERTONIE
.
11
2.2.
ENDOTHELIN
UND
NIERE
.
11
2
3.
ENDOTHELIN
UND
MITOGENESE
.
11
3.
TRANSGENE
TIERE
UND
ENDOTHELIN
_
17
3.1.
TRANSGENE
TIERE
.
17
3.2.
BEDEUTUNG
DER
TRANSGENEN
TIERE
.
19
3
2.1.
ANALYSE
DER
GENREGULATION
.19
3.2
2.
ANALYSE
DER
GENFUNKTION
.
20
3.2.2.1.
FUNKTIONSGEWINN
.
20
3.2.2
2.
FUNKTIONSVERLUST
.21
3.3.
TRANSGENE
MODELLE
MIT
DEM
ENDOTHELINGEN
.
21
3.4.
HUMAN
ENDOTHELIN
1
TRANSGENE
MAEUSE
.
22
4.
ZIELSETZUNG
.24
II
C
MATERIAL
UND
METHODEN
.
25
1.
MATERIAL
.
.25
1.1.
GERAETE:
.
25
1.2.
MATERIALIEN
.
26
2.
METHODEN
.
28
2.1.
BIOCHEMISCHE
METHODEN:
.
28
2
1.1.
ENDOTHELIN
1,2
RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)
.
28
2.1.1.1.
PRINZIP
.
28
2.1.12
ORGANENTNAHME
.
29
2.1.1.3
ENDOTHELINEXTRAKLION
AUS
GEWEBE
.
29
2.1.14.
PROBENAUFBEREITUNG
FUER
DEN
ET-1.2-RIA
.
30
2.1.1.5.
LOESUNGEN
.
30
2.1.1.6.
STANDARDKURVE.
31
2.1.1.7
PIPETTIERSCHEMA
.
31
2.1.1.8.
MESSUNG
IM
LKB
GAMMACOUNLER
.
32
2.1.2.
PROTEINBESTIMMUNG
.
33
2.1.2.L
LOESUNGEN
.
33
2.1.2
2.
PROBEN
.
34
2
1.2.3.
BELEGEN
DER
MIKROTITERPLATTE
.
34
2.1.2.4
MESSUNG
.
34
2.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
34
22.1.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
34
2.2.11.
VORBEREITUNG
DER
GLASWAREN
UND
LOESUNGEN
.
35
2.2.1.2.
PLASMIDISOLIERUNG
.
35
2.2.1.2.1.
PRINZIP
.
35
2.2.1.2.2.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.
36
2.2.12
3
DURCHFUEHRUNG
.
37
2.2
1
2.4.
ALKOHOLFAELLUNG
NUT
DEM
ELUAT
.
38
2.1.2.2
5.
AGAROSE-GEL
.
38
2
2.1.2.6
VORBEREITUNG
DER
PROBE
FUER
DIE
ELEKTROPHORESE
.
39
2.2
1
3.
VORBEREITUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
.
39
2.2.1.4.
ORGANPRAEPARATION
DER
TIERE
.
39
2.2.1.5
HERSTELLEN
DER
GEFRIERSCHNITTE
.
40
2.2.1
6
FIXIEREN
DER
GEWEBESCHNITTE
.
40
2.2.16.1.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.
40
2.2.L6.2.
DURCHFUEHRUNG
.41
2.2.1.7.
LINEANSIEREN
DER
PLASMIDE,
RESTRIKTIONSANSATZ
.
41
2.2.1.7
1.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.41
2.2.1.7.2.
PRINZIP
.
42
IN
2
2
1
7
3.
TESTANSATZ
ZUR
SPALTUNG
DES
PLASMIDS
.43
2.2
1
8
TRANSKRIPTION
.
44
2.2
I
8
1
PRINZIP
.
44
2
2
1
8.2.
LOESUNGEN
.
44
2.2.1.8.3.
ANSATZ
.
44
2.2
1.9
ALKOHOLFAELLUNG
.
45
2.2
1
10
RADIOAKTIVITAETSBESTINUNUNG
DER
TRANSKRIPTIONSLOESUNG
.
46
2.2
1
11
HYBRIDISIERUNG
.
46
2
2
1111
PRINZIP
.
46
2.2
1.11
2.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.
46
22
1
11.3
DURCHFUEHRUNG
.
48
2
2
1
114.
HERSTELLEN
DES
PROBEN-UND
HYBRIDISIERUNGSGEMISCHES
.
49
2.2
1
114
1
PROBENGEMISCH
.
49
2
2
1.11
4
2
HYBNDISIERUNGSMISCHUNG
.
50
2.2.1.11.5.
AUFTRAEGEN
DER
SONDEN
.
50
2.2
1
12.
WASCHEN
DER
GEWEBESCHNITTE
NACH
BEENDETER
HYBRIDISIERUNG
.
51
2
2
1.12.1.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.
51
2
2
1
12.2
WASCHEN
DER
SCHNITTE
.
52
2
2
113.
AUTORADIOGRAPHIE
.53
22
113.1
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.53
2.2
1
13
2.
BESCHICHTEN
DER
GEWEBESCHNITTE
MIT
PHOTOEMULSION
.
53
2.2
114.
ENTWICKELN
UND
FIXIEREN
.53
2.2.1
14
1
PRINZIP
.53
2
2
1.14.2.
BENOETIGTE
LOESUNGEN
.54
2
2
1.14.3.
DURCHFUEHRUNG
.
54
2.2
1
15
KONTROLLEN
.
54
2
2
1
15.1.
NEGATIVKONTROLLE
.
54
2.2
1
15.2
KONTROLLE
ZUM
AUSSCHLUSS
CHEMOGRAPHISCHER
ARTEFAKTE
.55
2.2.1
16.
FOTOGRAPHISCHE
DOKUMENTATION
.55
2.2
1
17
AUSWERTUNG
.
55
2.3.
HISTOLOGISCHE
METHODEN
.
56
2.3.1
FIXIERUNG
.
56
2
3.2.
PARAFFINEINBETTUNG
MIT
EINER
HISTOKINETTE
.56
2.3
3
HE-FAERBUNG
.
57
2.3.3.1.
PRINZIP
.
57
2.3.3
2
BENOETIGTE
LOESUNGEN:
.
58
2.3.3
3
FAERBUNG
.
58
2.3
4
PENODSAEURE-SCHIFTSCHE-FAERBUNG
[PAS]
.
59
2
3.4.1
PRINZIP
.
59
2.3.4.2
LOESUNGEN
.
59
2.3.4
3
FAERBUNG
.59
2.3.5.
BESTIMMUNG
DES
SKLEROSEINDEX
NACH
RAU
ET
AL
(1984)
.
60
2
3.6
ZAEHLUNG
DER
NIERENZYSTEN
.
60
2
3.7
BESTIMMUNG
DER
INTERSTITIELLEN
FIBROSE
MITTELS
MASSON-GOLDNER-FAERBUNG
.
61
2
3
7.1
PRINZIP
.
61
2.3.7.2.
LOESUNGEN
.
61
2
3
7.3
ENTPARAFFINIERUNG
UND
FAERBUNG
.
62
2.3
7
4
AUSWERTUNG
.63
2
3
8.
MAY
GRUNWALD
FAERBUNG
FUER
DIE
BLUTBILDER
.63
2
3.8.1
MATENAL
.
63
2.3
8.2
DURCHFUEHRUNG
.63
2.3.8.3.
AUSWERTUNG'
.
64
IV
2.4.
PHYSIOLOGISCHE
METHODEN
.
64
2.4.1.
BLUTDRUCKMESSUNG DER
HUMAN
ENDOTHDIN-1
TRANSGENEN
MAUSE
.
64
2.4.1.1.
TIERE
.
64
2.4.1
2.
INSTRUMENTIERUNG
UND
DURCHFUEHRUNG
DER
AKUTEXPERIMENTE
.
64
2.4.1.3.
IMPLANTATION
DES
BLASENKATHETERS
.
65
2.4.1.4.
HAEMODYNAMISCHE
MESSUNGE:
.
66
2.4.1
5.
BIOCHEMISCHE
NICRENFUNKTIONSPRUEFUNG
.
66
2.4.16.
URINUNTERSUCHUNG
.
66
2.4.1
7.
SERUMUNTERSUCHUNG
.
66
2.4
2.
STOFFWECHSELKAEFIGE
.
67
2.4.2.1.
TIERE
.
67
2.4.2.2.
VERSUCHSDURCHFIIHRUNG
.
67
2.4.2.3.
BERECHNUNG
.
67
3.
STATISTIK
.
?
.
68
D
ERGEBNISSE
HUMAN
ENDOTHEUN-1
TRANSGENE
MAEUSE
1.
KOERPER
UND
ORGANGEWICHTE
.
69
2.
BLUTUNTERSUCHUNG
.
73
3.
NIERENFUENKTIONSPRIIFUNG
.
76
4.
RADIOIMMUNOASSAY
DES
ENDOTHELIN
1
.
79
5.
NIERENZYSTEN
.
82
6.
SKLEROSEINDEX
.
85
7.
INTERSTITIELLE
FIBROSE
.
90
8.
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG
.
92
9.
HISTOLOGISCH
MORPHOMETRISCHE
ANALYSE
.
97
9.1
BESTIMMUNG
DER
ZELLDICHTE
IN
IM
ET-1
TRANSGENEN
MAEUSENIEREN
.
98
10.
ARTERIELLE
BLUTDRUCKMESSUNG
.
99
E
DISKUSSION
YYYYYYYYYY YYYYYY
1.
BLUTDRUCK
IN
HUMAN
ET
1
TRANSGENEN
MAEUSEN
.
101
2.
MAKROSKOPISCHE
UND
MIKROSKOPISCHE
PATHOLOGISCHE
BEFUNDE
.104
2.1
HYPERPLASIE
.
194
2.2.
NIERENZYSTEN
.
104
2.3.
GLOMERULOSKLEROSE
UND
INTERSTITIELLE
FIBROSE
.
106
V
F
ZUSAMMENFASSUNG.
110
G
SUMMARY.
_
.
_
.
_
.
_
.
_
.
112
H
AUSBLICK.
113
I
ANHANG
.
114
1.
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
114
J
LITERATURVERZEICHNIS
.
117
1.
VORABVEROEFFENTLICHUNGEN
.
117
2.
WEITERE
VEROEFFENTLICHUNGEN
AN
DENEN
ICH
BETEILIGT
WAR
.
118
3.
ALLGEMEINES
LITERATURVERZEICHNIS
.
119 |
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