Hepatotoxizität von Valproinsäure in isolierten Rattenhepatozyten: Einfluß von Prooxidantien und Hungern
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1
E
INLEITUNG
UND
A
UFGABENSTELLUNG
.
14
2
L
ITERATURUEBERSICHT
.
16
2.1
VALPROINSAEURE
(VPA)
.
16
2.1.1
THERAPIE
DER
EPILEPSIE
.
16
2.1.2
PHARMAKODYNAMISCHE
EIGENSCHAFTEN
.
16
2.1.2.1
ANTIKONVULSIVE
WIRKUNGEN
VON
VPA
.
16
2.1.2.2
MOEGLICHE
WIRKUNGSMECHANISMEN
VON
VPA
.
17
2.1.3
PHARMAKOKINETISCHE
EIGENSCHAFTEN
UND
PROTEINBINDUNG
.
17
2.1.3.1
ABSORPTION,
DISTRIBUTION,
ELIMINATION,
EFFEKTIVE
DOSIS
UND
THERAPEUTISCHE
BLUTKONZENTRATION
.
18
2.1.3.2
PROTEINBINDUNG
.
19
2.1.4
METABOLISMUS
VON
VPA
.
21
2.1.4.1
METABOLISMUSWEGE
.
21
2.1.4.2
MITOCHONDRIALER
METABOLISMUS
.
21
2.1.4.3
MIKROSOMALER
METABOLISMUS
.
23
2.1.4.4
WEITERE
METABOLITEN,
INSBESONDERE
KONJUGATIONSPRODUKTE
.
24
2.1.4.5
QUANTITATIVE
VERTEILUNG
DER
HAUPTMETABOLITEN
.
27
2.1.4.6
BETEILIGUNG
DER
SS
BZW.
CO-OXIDATION
ENDOGENER
FETTSAEUREN
UND
DES
AMINOSAEURESTOFFWECHSELS
AM
VPA-METABOLISMUS
.
29
2.1.5
HUNGERN
UND
DESSEN
EINFLUSS
AUF
VPA-KINETIK
UND
VPA-METABOLISMUS
.
30
2.1.5.1
EINFLUSS
VON
HUNGERN
AUF
DEN
ORGANISMUS,
INSBESONDERE
DIE
LEBER
.
30
2.1.5.2
HUNGERN
UND
VPA-KINETIK
UND
-METABOLISMUS,
LEBERBIOCHEMIE
UND
LEBERHISTOLOGIE
.
32
2.2
ALLGEMEINES
ZUR
HEPATOTOXLZITAET
VON
VPA
.
35
2.2.1
FORMEN
DER
HEPATOTOXIZITAET
.
35
2.2.1.1
REVERSIBLE
HEPATOTOXIZITAET
.
35
2.2.1.2
IRREVERSIBLE
HEPATOTOXIZITAET
.
35
2.2.2
HAEUFIGKEIT,
HAUPTRISIKOGRUPPE
UND
EINFLUSSFAKTOREN
.
37
2.3
MOEGLICHE
MECHANISMEN
DER
HEPATOTOXIZITAET
UND
BEEINFLUSSUNG
VON
STOFFWECHSELWEGEN
.
38
2.3.1
VERAENDERTER
METABOLISMUS
VON
VPA
BEI
HEPATOTOXIZITAET
.
39
2.3.1.1
METABOLISMUSPROFILE
BEI
HEPATOTOXIZITAET
.
39
2.3.1.2
VERANTWORTLICHKEIT
VON
VPA
UND
VPA-METABOLITEN
BZW.
VON
METABOLISMUSWEGEN
FUER
DIE
HEPATOTOXIZITAET
.
40
2.3.2
VERAENDERUNG
DES
FETTSTOFFWECHSELS,
DER
GLUCONEOGENESE
UND
DES
HAMSTOFFZYKLUS
DURCH
VPA
.
44
2.3.2.1
HEMMUNG
DER
MITOCHONDRIALEN
SS-OXIDATION
ENDOGENER
FETTSAEUREN
-
ROLLE
VON
COA
UND
CAMITIN
.
.'.
.
44
2.3.2.2
WEITERE
MOEGLICHE
MECHANISMEN
DER
HEMMUNG
DER
SS-OXIDATION
.
47
2.3.2.3
HEMMUNG
DER
KETOGENESE
.
48
2.3.2.4
HEMMUNG
DER
GLUCONEOGENESE
.
49
2.3.2.5
HEMMUNG
DER
HARNSTOFFSYNTHESE
UND
HYPERAMMONAEMIE
.
49
2.3.3
EINFLUSS
VON
VPA
AUF
ELEMENTE
DES
KOMPLEXEN
VERTEIDIGUNGSSYSTEMS
ZUR
ABWEHR
FREIER
RADIKALE
.
50
2.3.3.1
EINFLUSS
VON
VPA
AUF
DIE
ENZYMAKTIVITAET
.
51
2.3.3.2
EINFLUSS
VON
VPA
AUF
DIE SPURENELEMENTE
.
52
2.3.3.3
GSH-STATUS
UND
DESSEN
BEEINFLUSSUNG
DURCH
VPA
UND
VPA-METABOLITEN
.
53
2.3.3.4
VPA
UND
LIPIDPEROXIDATION
.
58
2.3.4
ROLLE
DES
HUNGERNS
BEI
VPA-VERMITTELTER
HEPATOTOXIZITAET
.
59
2.3.5
EINFLUSS
VON
POLYTHERAPIE
DER
EPILEPSIE
AUF
DIE
VPA-HEPATOTOXIZITAET
.60
2.3.6
HISTOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
BEI
VPA-HEPATOTOXIZITAET
.
61
2.3.6.1
MIKROVESIKULAERE
STEATOSE
UND
NEKROSE
DER
LEBER
.
61
2.3.6.2
MITOCHONDRIEN
.
62
2.4
SUBSTANZEN
ZUM
AUSLOESEN
VON
OXIDATIVEM
STRESS
.
63
2.4.1
WIRKUNGSMECHANISMUS
DER
HYDROPEROXIDE
CUMOLHYDROPEROXID
(CUOOH)
UND
TERT-BUTYLHYDROPEROXID
(T-BUOOH)
.
64
2.4.1.1
HYDROPEROXIDMETABOLISMUS
.
64
2.4.1.2
HYDROPEROXIDZERFALL
.
65
2.4.1.3
BIOAKTIVIERUNG
VON
XENOBIOTIKA
DURCH
HYDROPEROXIDE
.
67
2.4.2
WIRKUNGSMECHANISMUS
VON
BROMHEPTAN
(BRH)
.
68
3
M
ATERIAL
UND
M
ETHODEN
.
69
3.1
SUBSTANZEN
ZUR
BEHANDLUNG
.
69
3.2
VERSUCHSTIERE
.
71
3.2.1
RASSE,
GESCHLECHT,
GEWICHT
UND
ALTER
.
71
3.2.2
VERSUCHSTIERHALTUNG
.
71
3.3
DIE
METHODE
ISOLIERTER
HEPATOZYTEN
.
71
3.3.1
LOESUNGEN
UND
COLLAGENASEN
.
71
3.3.2
PRAEPARATION
ISOLIERTER
HEPATOZYTEN
.
72
3.3.2.1
OPERATION
.
72
3.3.2.2
PERFUSION
.
72
3.3.2.3
LEBERZELLAUFBEREITUNG
.
73
3.3.3
DURCHFUEHRUNG
DER
INKUBATION
.
73
3.4
VERSUCHSANORDNUNG
.
74
3.4.1
BEHANDLUNGEN
UND
PROBENENTNAHMEN
.
74
3.4.2
KONTROLL
UND
BEHANDLUNGSGRUPPEN
.
76
3.5
PARAMETER
.
81
3.5.1
VITALITAETS
UND
FUNKTIONALITAETSPARAMETER
.
81
3.5.1.1
TRYPANBLAUTEST
.
81
3.5.1.2
LAKTATDEHYDROGENASE
(LDH)
.
81
3.5.1.3
INTRAZELLULAERES
KALIUM
(K
+
)
UND
NATRIUM
(NA
+
)
.
81
3.5.1.4
REDUZIERTES
GLUTATHION
(GSH)
.
82
3.5.1.5
MALONDIALDEHYD
(MDA)
.
82
3.5.1.6
PROTEIN
.
82
3.5.2
VPA
UND
METABOLITENBESTIMMUNG
MIT
HILFE
DER
GASCHROMATO
GRAPHIE
/
MASSENSPEKTROMETRIE
(GC/MS).
83
3.5.2.1
EXTRAKTION
UND
DERIVATISIERUNG
.
83
3.5.2.2
ANALYSE
UND
QUANTIFIZIERUNG
.
83
3.5.2.3
STANDARDS
UND
WIEDERFINDUNG
IN
DER
LEBERZELLSUSPENSION
.
84
3.5.2.4
PRAEZISION
UND
GENAUIGKEIT
.
86
3.5.3
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
90
3.6
VERWENDETE
MATERIALIEN
.
90
3.6.1
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
COLLAGENASEN
.
90
3.6.2
SUBSTANZEN
UND
CHEMIKALIEN
.
93
3.6.3
GERAETE
UND
MATERIAL
.
94
3.7
VERSUCHSAUSWERTUNG
UND
STATISTIK
.
95
4
E
RGEBNISSE
.
96
4.1
ZOOLOGISCHE,
ZOOTECHNISCHE
UND
VERSUCHSBEDINGTE
PARAMETER
.
96
4.1.1
VERSUCHSTIERE
UND
VERSUCHSANORDNUNG
.
96
4.1.2
LEBERPERFUSION
UND
INKUBATION
.
97
4.2
VITALITAETS
UND
FUNKTIONALITAETSPARAMETER
.
98
4.2.1
KONTROLLGRUPPEN
.
99
4.2.1.1
TRYPANBLAUTEST
.
99
4.2.1.2
LDH-FREISETZUNG
.
99
4.2.1.3
INTRAZELLULAERER
KALIUMGEHALT
.
99
4.2.1.4
INTRAZELLULAERER
NATRIUMGEHALT
.
99
4.2.1.5
INTRAZELLULAERER
GSH-GEHALT
.
100
4.2.1.6
MDA-NACHWEIS
.
101
4.2.2
EINFLUSS
VON
PROOXIDANTIEN
.
101
4.2.2.1
TRYPANBLAUTEST
.
101
4.2.2.2
LDH-FREISETZUNG
.
101
4.2.2.3
INTRAZELLULAERER
KALIUMGEHALT
.
101
4.2.2.4
INTRAZELLULAERER
NATRIUMGEHALT
.
102
4.2.2.5
INTRAZELLULAERER
GSH-GEHALT
.
102
4.2.2.6
MDA-NACHWEIS
.
104
4.2.3
EINFLUSS
VON
VPA
.
104
4.2.3.1
TRYPANBLAUTEST
.
104
4.2.3.2
LDH-FREISETZUNG
.
105
4.2.3.3
INTRAZELLULAERER
KALIUMGEHALT
.
105
4.2.3.4
INTRAZELLULAERER
NATRIUMGEHALT
.
106
4.2.3.5
INTRAZELLULAERER
GSH-GEHALT
.
106
4.2.3.OE
MDA-NACHWEIS
.
108
4.2.4
EINFLUSS
DER
KOMBINATION
VON
PROOXIDANTIEN
UND
VPA
.
108
4.2.4.1
TRYPANBLAUTEST
.
108
4.2.4.2
LDH-FREISETZUNG
.
114
4.2.4.3
INTRAZELLULAERER
KALIUMGEHALT
.
118
4.2.4.4
INTRAZELLULAERER
NATRIUMGEHALT
.
123
4.2.4.5
INTRAZELLULAERER
GSH-GEHALT
.
128
4.2.4.6
MDA-NACHWEIS
.
137
4.3
VPA-METABOLISMUS
.
141
4.3.1
VPA-METABOLISMUS
BEI
UNTERSCHIEDLICHEN
VPA-MENGEN
.
142
4.3.1.1
ANTEIL
BZW.
MENGE NICHT
METABOLISIERTER
VPA
.
142
4.3.1.2
ANTEIL
BZW.
MENGE
DER
DETEKTIERTEN
METABOLITEN
.
143
4.3.2
EINFLUSS
VON
PROOXIDANTIEN
AUF
DEN
VPA-METABOLISMUS
.
146
4.3.2.1
ANTEIL
BZW.
MENGE
NICHT
METABOLISIERTER
VPA
.
146
4.3.2.2
ANTEIL
BZW.
MENGE
DER
DETEKTIERTEN
METABOLITEN
.
150
4.4
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
158
4.4.1
KONTROLLGRUPPEN
MIT
HUNGERN
.
158
4.4.2
EINFLUSS
VON
PROOXIDANTIEN
MIT
HUNGERN
.
158
4.4.3
EINFLUSS
VON
VPA
ALLEIN
MIT
HUNGERN
.
160
4.4.4
EINFLUSS
DER
KOMBINATION
VON
PROOXIDANTIEN
UND
VPA
.
160
5
D
ISKUSSION
.
167
5.1
DIE
WAHL
DES
MODELLS
.
167
5.1.1
MODELL
UND
INKUBATIONSBEDINGUNGEN
.
167
5.1.2
LAENGE
DER
HUNGERPERIODE
UND
DER
EINFLUSS
VON
HUNGERN
.
167
5.1.3
PROOXIDANTIENWAHL
UND
EINFLUSS
VON
OXIDATIVEM
STRESS
.
169
5.1.4
WAHL
DER
VPA-DOSIS
UND
EINFLUSS
VON
VPA
.
171
5.2
DISKUSSION
DER
VITALITAETS
UND
FUNKTIONALITAETSPARAMETER
BEI
KOMBINIERTER
BEHANDLUNG
.
174
5.2.1
EINFLUSS
VON
VPA
UND
HYDROPEROXIDEN
.
174
5.2.1.1
OHNE
HUNGERN
.
174
5.2.1.2
MIT
HUNGERN
.
175
5.2.2
EINFLUSS
VON
BRH-VORBEHANDLUNG
UND
VPA
.
179
5.2.2.1
OHNE
HUNGERN
.
179
5.2.2.2
MIT
HUNGERN
.
179
5.3
DISKUSSION
DES
VPA-METABOLISMUS
.
181
5.3.1
VPA-METABOLISMUS
IM
VERGLEICH
ZU
ANDEREN
IN
VITRO
UND
IN
VIVO-UNTERSUCHUNGEN
.
181
5.3.2
VPA-METABOLISMUS
BEI
UNTERSCHIEDLICHEN
VPA-MENGEN
.
183
5.3.3
EINFLUSS
VON
PROOXIDANTIEN
BEI
KOMBINIERTER
BEHANDLUNG
.
185
5.4
DISKUSSION
DER
MORPHOLOGISCHEN
ERGEBNISSE
.
187
5.5
HYPOTHESEN
FUER
DEN
MECHANISMUS
DER
ZYTOTOXIZITAET
.
190
5.6
SCHLUSSBETRACHTUNG
.
197
6
Z
USAMMENFASSUNG
.
199
7
SUMMARY
.
202
8
L
ITERATURVERZEICHNIS
.
205
9
A
NHANG
:
T
ABELLEN
DER
V
ITALITAETS
-
UND
F
UNKTIONALI
TAETSPARAMETER
/
VPA
UND
METABOLITENWERTE
.
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