Untersuchung der HCV-Quasispeziespopulation bei Patienten mit chronischer Hepatitis C unter Therapie mit Interferon-a:
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Veröffentlicht: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS:
1
EINLEITUNG
.
I
1.1
H
ISTORISCHES
.
1
1.2
H
EPATITIS
C
V
IRUS
.
1
1.2.1
GENETIK
.
1
1.2.2
HCV-GENOTYPEN
.
3
1.2.3
QUASISPEZIES
.
4
1.3HEPATMSC
.
5
1.3.1
KLINIK
.
5
1.3.2
DIAGNOSTIK
.
6
1.3.3
THERAPIE
.
7
1.4
E
INZELSTRANO
-K
ONFORMATIONS
-
A
NALYSE
(SSCP)
.
7
2
AUFGABENSTELLUNG
.
9
3
MATERIAL
.
10
3.1
G
ERAETE
.
10
3.2
C
HEMIKALIEN
.
10
3.3
L
OESUNGEN
UND
P
UFFER
.
11
3.4
E
NZYME
UND
V
EKTOREN
.
12
3.5
M
EDIEN
,
A
GAR
UND
Z
ELLEN
.
12
3.6
P
RIMER
.
12
3.7
S
ONSTIGES
.
12
4
METHODEN
.
13
4.1
E
XTRAKTION
VON
V
IRUS
-RNA
AUS
S
ERUM
.
13
4.2
R
EVERSE
T
RANSKRIPTION
.
13
4.3
P
OLYMERASE
-K
ETTENREAKTION
(PCR)
.
14
4.3.1
PCR
DER
5
'
NICHT-KODIERENDEN
REGION
(5
'
NC-REGION)
.
14
4.3.2
PCR
DER
HYPERVARIABLEN
REGION
1
(HVR1)
AUS
SERUM
.
15
4.3.3
PCR
DER
HYPERVARIABLEN
REGION
1
(HVR1)
VON
PLASMIDEN
ZUR
GEWINNUNG
EINZELNER
QUASISPEZIES
.
15
4.4
A
GAROSE
-G
ELELEKTROPHORESE
.
16
4.5
K
LONIERUNG
.
16
4.5.1
LIGATION
.
17
4.5.2
TRANSFORMATION
.
17
4.5.3
KULTIVIERUNG
.
18
4.5.4
PRAEPARATION
DER
PLASMIDE
.
18
4.5.5
RESTRIKTIONSVERDAU
.
18
4.5.6
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
DNA
.
19
4.6
S
EQUENZIERUNG
.
19
4.6.1
SEQUENZIERUNGSREAKTION
.
20
4.6.2
AUFREINIGUNG
DER
SEQUENZIERUNGSREAKTION
.
20
4.6.3
SEQUENZIERUNG
.
20
4.7
SSCP-A
NALYSE
.
21
4.8
HCV-Q
UANTIFIZIERUNG
.
22
4.8.1
VIRUSEXTRAKTION
.
22
4.8.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
22
4.8.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
23
4.8.4
SLOT-BLOT
.
23
4.8.5
HYBRIDISIERUNG
.
23
4.8.6
DETEKTION
.
24
4.8.7
AUSWERTUNG
.
24
5
ERGEBNISSE
.
25
5.1
E
NVELOPE
-PCR
.
25
5.2
K
LONIERUNG
UND
S
EQUENZIERUNG
.
26
5.3
SSCP-A
NALYSE
.
28
5.3.1
SSCP-ANALYSE
EINZELNER
QUASISPEZIES
.
28
5.3.2
SSCP-ANALYSE
VON
MONIERTEN
QUASISPEZIES
NACH
ASYMETRISCHER
PCR
.
29
5.3.3
VERGLEICH
DER
SSCP-ANALYSE
VON
PATIENTENSERUM
UND
EINZELNEN
QUASISPEZIES
30
5.3.4
SSCP-ANALYSE
VON
PATIENTENSERUM
IM
VERLAUF
DER
ERKRANKUNG
.
31
5.3.4.1
PATIENT
1
.
32
5.3.4.2
PATIENT
2
.
33
5.3.4.3
PATIENT
3
.
34
5.3.4.4
PATIENT
4
.
35
5.3.4.5
PATIENT
5
.
37
6
DISKUSSION
.
39
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
46
8
LITERATURVERZEICHNIS
.
48 |
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