Funktionelle T-Zellzytometrie:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINLEITUNG
1
1.
MAGNETOFLUORESZENTE
LIPOSOMEN
ZUR
ERHOEHUNG
DER
SENSITIVITAET
DER
IMMUNFLUORESZENZ
4
2.
CHARAKTERISIERUNG
MEMBRAN-GEBUNDENER
ZYTOKINE
5
3.
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
MARKIERUNG
VON
T-ZELLEN
6
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
1
0
1.
MAEUSE
UND
ZELLEN
10
2.
REKOMBINANTE
MHC-MOLEKUELE
F
1
3.
ANTIKOERPER
12
4.
MAGNETOFLUORESZENTE
LIPOSOMEN
13
5.
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG
14
6.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
UND
IMMUNFLUORESZENZFAERBUNGEN
16
7.
ELISA
17
8.
HERSTELLUNG
UND
FAERBUNG
MIT
MEMBRANVESIKELN
18
9.
TRANSFEKTION
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
DURCH
ELEKTROPORATION
19
1
O.MOLEKULARBIOLOGIE
19
III.
ERGEBNISSE
2
4
1.
MAGNETOFLUORESZENTE
LIPOSOMEN
2
4
1.1
OPTIMIERUNG
DES
FAERBEREAGENZ
24
1.2
VERGLEICH
DER
LIPOSOMENFAERBUNG
MIT
DER
FAERBUNG
HERKOEMMLICHER
REAGENZIEN
24
1.3
ANZAHL
GEBUNDENER
LIPOSOMEN
PRO
ZELLE
26
1.4
QUANTIFIZIERUNG
DER
NACHWEISGRENZE
27
1.4.1
EICHPARTIKEL
MIT
DEFINIERTER ANTIKOERPERBINDUNGSKAPAZITAET
27
1.4.2
BESTIMMUNG
DER
LIPOSOMENNACHWEISGRENZE
28
1.5
FAERBUNG
NIEDRIG
EXPRIMIERTER
OBERFLAECHENMOLEKUELE
29
1.6
MAGNETISCHE
ZELLSEPARATION
MIT
MAGNETOFLUORESZENTEN
LIPOSOMEN
31
2.
NACHWEIS
UND
CHARAKTERISIERUNG
DER
EXPRESSION
VON
OBERFLAECHEN-ASSOZIIERTEM
IFN-Y
UND
IL-10
3
3
2.1
T-ZELLAKTIVIERUNG
IN
VITRO
33
2.2
NACHWEIS
VON
IL-10
UND
IFN-Y
AUF
DER
ZELLOBERFLAECHE
AKTIVIERTER
T-ZELLEN
DER
MAUS
35
2.3
KONTROLLE
DER
SPEZIFITAET
DER
FAERBUNG
37
2.4
WERDEN
ZYTOKINE
AUS
DEM
MEDIUM
ADSORBIERT?
37
2.5
ALLGEMEINE
KORRELATION
ZWISCHEN
SEKRETION
UND
OBERFLAECHENFAERBUNG
39
2.5.1
VERGLEICH
DER
INTRAZELLULAEREN
MIT
DER
OBERFLAECHENFAERBUNG
39
2.5.2
VERGLEICH
DER
KINETIK
VON
INTRAZELLULAERER
UND
OBERFLAECHEN-ZYTOKINEXPRESSION
41
2.5.3
BLOCKIERUNG
DER
SEKRETION:
EINFLUSS
AUF
DIE
OBERFLAECHENEXPRESSION?
42
2.6
DIREKTE
KORRELATION
VON
OBERFLAECHEN-ZYTOKINEXPRESSION
MIT
INTRAZELLULAEREM
ZYTOKIN
UND
SEKRETION
43
2.6.1
OBERFLAECHEN-IFN-YUND
IFN-Y-SEKRETION
43
2.6.2
OBERFLAECHEN-IFN-Y
IN
IFN-Y-REZEPTOR
DEFIZIENTEN
(IFN-Y-R*)
MAEUSEN
46
2.6.3
OBERFLAECHEN-IL-10
UND
SEKRETION
48
2.7
HUMANE
OBERFLAECHENZYTOKINE
50
2.8
MECHANISMUS
DER
OBERFLAECHENVERANKERUNG
52
2.8.1
DIE
EXPRESSION
VON
OBERFLAECHENZYTOKINEN
IN
TRANSFIZIERTEN
ZELLLINIEN
52
2.8.1.1
ZYTOKINSEKRETION
TRANSFIZIERTER
ZELLINIEN
52
2.8.1.2
INTRAZELLULAERE
UND
OBERFLAECHENEXPRESSION
TRANSFIZIERTER
ZELLINIEN
53
2.8.2
KANN
DAS
"SIGNALPEPTID
"
ALS
ALTERNATIVER
MEMBRANANKER
DIENEN?
55
3.
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
MARKIERUNG
VON
T-ZELLEN
5
9
3.1
HERSTELLUNG
VON
REKOMBINANTEM
L-A
D
-OVA
IM
BAKULOVIRUS-EXPRESSIONSSYSTEM
59
3.1.1
KONTROLLE
DER
BAKULOVIRUSINFEKTION
UND
INTRAZELLULAERER
NACHWEIS
VON
L-A
D
-OVA
UEBER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
59
3.1.2
AUFREINIGUNG
VON
L-A
D
-OVA
AUS
KULTURUEBERSTAND
60
3.1.3
BIOCHEMISCHE
UND
FUNKTIONELLE
ANALYSE
60
3.2
L-A
D
/OVA323-339
MEMBRANVESIKEL
61
3.2.1
EXTERNE
BELADUNG
DER
MEMBRANSTAENDIGEN
MHC-MOLEKUELE
MIT
OVA-PEPTIDEN
61
3.2.2
T-ZELLSTIMULATION
MIT
OVA-BELADENEN
A20-MEMBRANVESIKELN
62
3.2.3
FAERBUNG
NICHT
VORAKTIVIERTER
OVA-TCR
,0,
T-ZELLEN
MIT
MEMBRANVESIKELN
62
3.2.4
FAERBUNG
VORAKTIVIERTER
OVA-TCR'*
10
T-ZELLEN
MIT
MEMBRANVESIKELN
63
3.2.5
KONTROLLE
DER
SPEZIFITAET
DER
FAERBUNG
DURCH
SPEZIFISCHE
INHIBITION
MIT
ANTIKOERPERN
66
3.2.6
KINETIK
DER
INTERAKTION
VON
MEMBRANVESIKELN
MIT
T-ZELLEN
66
3.2.7
INDUKTION
VON
ZYTOKINPRODUKTION
DURCH
INTERAKTION
MIT
MEMBRANVESIKELN
67
IV.
DISKUSSION
6
8
1.
MAGNETOFLUORESZENTE
LIPOSOMEN
68
1.1
MOEGLICHKEITEN
UND
GRENZEN
DER
FAERBUNG
MIT
LIPOSOMEN
68
1.2
SIND
SCHWACH
EXPRIMLERTE
ANTIGENE
FUNKTIONELL
RELEVANT?
68
2.
OBERFLAECHEN-ZYTOKINE
70
2.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
VON
IFN-Y
UND
IL-10
70
2.2.
IDENTIFIZIERUNG
FUNKTIONELLER
TH-ZELLSUBPOPULATIONEN:
OBERFLAECHENZYTOKINE
ALS
MARKER
ZYTOKIN-PRODUZIERENDER
TH-ZELLEN
71
2.3
DER
MECHANISMUS
DER
BINDUNG
VON
IFN-Y
UND
IL-10
AN
DIE
ZELLMEMBRAN
72
2.3.1
BINDUNG
UEBER
NICHT-KOVALENTE
INTERAKTION
MIT
EINER
MEMBRANSTAENDIGEN
KOMPONENTE?
72
2.3.2
INSERTION
IN
DIE
MEMBRAN?
73
2.3.3
ALTERNATIVE
MECHANISMEN
DER
MEMBRANVERANKERUNG
75
2.4
SIND
OBERFLAECHENZYTOKINE
FUNKTIONELL
AKTIV?
75
3.
ANTIGEN-SPEZIFISCHE
MARKIERUNG
VON
T-ZELLEN
77
3.1
MULTIMERE
MHC/PEPTID-KOMPLEXE
77
3.2
APC-MEMBRANVESIKEL
77
3.2.1
DIE
VESIKELBINDUNG
AN
T-ZELLEN
IST
ANTIGEN-SPEZIFISCH
UND
WIRD
UEBER
TCR-STIMULATION
REGULIERT
78
3.2.2
WIE
KANN
EINE
BINDUNG
VON
MEMBRANVESIKELN
AN
NICHT-AKTIVIERTE
ZELLEN
ERREICHT
WERDEN?
79
3.2.3
HETEROGENITAET
DER
VESIKELBINDUNG
AN
AKTIVIERTE
ZELLEN
79
3.2.4
VESIKELFAERBUNG
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
BINDUNGS
UND
AKTIVIERUNGSPARAMETEM
AUF
EINZELZELLEBENE
80
IV.
ZUSAMMENFASSUNG
81
VI.
LITERATURVERZEICHNIS
83 |
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