Mitochondriale Genexpression unter Hypoxie:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1998 (Nicht für den Austausch) |
| Beschreibung: | 109 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
\
PROLOG 3
1 EINLEITUNG 4
1.1 DAS MITOCHONDRIUM.4
1.1.1 STRUKTUR UND FUNKTION.5
1.1.2 BIOGENESE DER MITOCHONDRIEN.5
1.1.3 DAS MITOCHONDRIALE GENOM.6
1.1.4 DIE D-LOOP-REGION, REPLIKATION UND TRANSKRIPTION MITOCHONDRIALER
DNA.8
1.2 HYPOXIE.11
1.3 CHRONISCH OBSTRUKTIVE LUNGENERKRANKUNGEN.13
2 ZIELSETZUNG UND ARBEITSHYPOTHESE 15
3 MATERIAL UND METHODIK 16
3.1 EXTRAKTION VON NUKLEINSAEUREN.16
3.1.1 DEPC-BEHANDELTES H
20.16
3.1.2 RNA-EXTRAKTION.16
3.1.3 DNA-EXTRAKTION.17
3.1.4 GESAMTNUKLEINSAEURE-EXTRAKTION (MODIFIZIERT NACH BIMBOIM).17
3.1.5 RNA-EXTRAKTION (MODIFIZIERT NACH BIMBOIM).18
3.2 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN.19
3.3 REVERSE TRANSKRIPTION.19
3.4 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION.20
3.5 HYBRIDISIEREN VON RNA.23
3.5.1 HERSTELLUNG RADIOAKTIV MARKIERTER CDNA-SONDEN.23
3.5.2 RNA-ANALYSE IM NORTHERN BLOT.24
3.5.3 PRAEHYBRIDISIERUNG UND HYBRIDISIERUNG.26
3.5.4 REGENERATION DER NYLONMEMBRAN.27
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.5.5 AUTORADIOGRAPHIE.27
3.6 GEL-ELEKTROPHORESEN.28
3.6.1 POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE (PAGE).28
3.6.2 SDS-POLYACRYLAMID-GRADIENTENGELE (SDS-PAGE).29
3.6.3 AGAROSE-GELE.30
3.6.4 FAERBEN DER PAGE- UND AGAROSE-GELE.31
3.6.5 FAERBEN DER SDS-GRADIENTENGELE.31
3.7 ANALYSE VON MYOSIN-SCHWERE-KETTEN (MHC)-ISOFORMEN.32
3.8 UNTERSUCHUNGSGUT UND EXPERIMENTELLE MODELLE.33
3.8.1 PATIENTEN MIT CHRONISCH OBSTRUKTIVEN LUNGENERKRANKUNGEN (COPD).33
3.8.2 RATTEN UNTER HYPOXIE.34
3.8.3 HYPOXISCHE HUMANE HEPATOMZELLEN (HEPG2).35
3.9 STATISTIK.36
3.10 BEZUGSQUELLEN.36
3.11 GERAETE.37
4 ERGEBNISSE 39
4.1 ETABLIERUNG EINES RT-PCR-PROTOKOLLS ZUR QUANTIFIZIERUNG
MITOCHONDRIALER
TRANSKRIPTE IN SEHR KLEINEN MUSKELBIOPSIEN.39
4.1.1 QUANTITATIVE POLYMERASE-KETTEN-REAKTION: MATHEMATISCHER
HINTERGRUND
UND AUSWERTUNG.40
4.1.2 BERECHNUNG VON PRODUKTVERHAELTNISSEN IN DER PCR.43
4.1.3 VERGLEICH DER EXTRAKTIONEN VON RNA, DNA UND GESAMTNUKLEINSAEUREN.49
4.1.4 STOECHIOMETRIE ZWISCHEN DEN MITOCHONDRIALEN TRANSKRIPTEN 12S RRNA
BZW. COX I MRNA UND MITOCHONDRIALER DNA IN HUMANEM LINKEN
VENTRIKEL.51
4.1.5 STOECHIOMETRIE DER MITOCHONDRIALEN TRANSKRIPTE 12S RRNA UND COX I
MRNA IN HUMANEM LINKEN VENTRIKEL.54
4.2 MESSUNG VON 12S RRNA UND COX I MRNA IN MUSKELBIOPSIEN VON PATIENTEN
MIT CHRONISCH OBSTRUKTIVEN LUNGENERKRANKUNGEN.56
4.2.1 VERAENDERUNGEN DER STOECHIOMETRIE VON 12S RRNA ZU COX I MRNA.56
4.2.2 QUANTIFIZIERUNG VON 12S RRNA UND COX I MRNA ALS PRODUKTVERHAELTNIS
MIT A-SKELETTALEM AKTIN ALS ENDOGENER RNA-REFERENZ.58
4.2.3 ANALYSE DER ISOFORMEN DER MYOSIN-SCHWERE-KETTEN (MHC I U. II).64
4.3 VERAENDERUNG MITOCHONDRIALER TRANSKRIPTE BEI RATTEN UNTER HYPOXIE.65
4.4 VERAENDERUNG MITOCHONDRIALER TRANSKRIPTE IN KULTIVIERTEN HEPG2-ZELLEN
UNTER HYPOXIE.67
5 DISKUSSION 70
5.1 METHODENDISKUSSION.70
5.2 STOECHIOMETRIE MITOCHONDRIALER TRANSKRIPTE.76
5.3 VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN KAPAZITAET.78
5.3.1 VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN KAPAZITAET BEI PATIENTEN MIT CHRONISCH
OBSTRUKTIVEN LUNGENERKRANKUNGEN.79
5.3.2 ZUNAHME DER OXIDATIVEN KAPAZITAET BEI PATIENTEN MIT ARTERIELLER
VERSCHLUSSKRANKHEIT.82
5.3.3 ZUNAHME DER OXIDATIVEN KAPAZITAET BEI AUSDAUERTRAINING UND
ELEKTRISCHER MUSKELSTIMULATION.83
5.3.4 VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN KAPAZITAET BEI AUFENTHALT IN GROSSER
HOEHE. 85
5.3.5 SYNTHESE.88
5.4 VIER WEITERE BEOBACHTUNGEN ZU VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN
KAPAZITAET.89
5.4.1 ZUR GROESSENORDNUNG VON VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN KAPAZITAET.90
5.4.2 STEIGERUNG DER OXIDATIVEN KAPAZITAET UNTER HYPOXIE ALS AUSDRUCK
EINER AENDERUNG DER MUSKELFASERTYPEN?.90
5.4.3 BEEINFLUSSUNG VON VERAENDERUNGEN DER OXIDATIVEN KAPAZITAET UNTER
HYPOXIE DURCH KREISLAUFUMSTELLUNG UND MUSKELFASERTYP.92
5.4.4 VERAENDERUNGEN DER MITOCHONDRIALEN GENEXPRESSION UNTER HYPOXIE IN
ZELLKULTURARBEITEN.93
5.5 ZU DEN MOLEKULAREN MECHANISMEN DER ADAPTATION MITOCHONDRIALER
GENEXPRESSION UNTER HYPOXIE.94
6
ZUSAMMENFASSUNG 96
LITERATURVERZEICHNIS 98
LEBENSLAUF
DANKSAGUNG
109 |
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