Die Wirkung von Zytokinen Quarzstaub-exponierter menschlicher Makrophagen auf die Zellproliferation verschiedener humaner Lungenzellen und die Kollagenbiosynthese von Lungenfibroblasten:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
YY YYYY'YYYYYY ".YYYY1
ABKUERZUNGEN
M
**
**YYYY***YY?***YY****YY*YY
*****YYYYYYYYYY
YYYYYYYYYYYYYYYYYY
VII
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
IX
TABELLENVERZEICHNIS
XV
1
EINLEITUNG
UND
PROBLEMSTELLUNG
.
.
.
1
1.1
A
LLGEMEINE
E
INLEITUNG
.
.
1
1.1.1
AUFBAU
DER
LUNGE
.
_
.
YY.5
'
1.1.2
SCHUTZMECHANISMEN
DER
LUNGE.
.
.
7
1.2
S
ILIKOSE
.
10
1.2.1
GESCHICHTE
DER
SILIKOSE
.
.
.
10
1.2.2
PATHOGENESE
DER
SILIKOSE
.
11
1.2.3
QUARZSTAUB
.
15
1.3
S
EKRETORISCHE
UND
FIBROGEN
WIRKSAME
P
RODUKTE
VON
STIMULIERTEN
.M
AKROPHAGEN
.
18
1.3.1
INTERLEUKIN
1
(IL-1)
.
20
1.3.2
TUMOR
NEKROSE
FAKTOR-ALPHA
(TNF-A)
.
.20
1.3.3
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-BETA
(TGF-SS)
.
21
1.3.4
PLATELET-DERIVED
GROWTH
FACTOR
(PDGF)
.
22
1.3.5
INSULIN-LIKE
GROWTH
FACTOR-1
(IGF-1)
.
22
.
1.4
E
XTRAZELLULAERE
M
ATRIX
.
23
1.4.1
KOLLAGEN
.
24
,
1.4.2
VERAENDERUNGEN
DER
EXTRAZELLULAEREN
MATRIX
IM
VERLAUF
DER
LUNGENFIBROSE
.25
1.5
Z
IELSETZUNG
DER
A
RBEIT
.
.
.
26
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
29
2.1
Z
ELLKULTUREN
.
29
2.1.1
ISOLIERUNG
DER
MENSCHLICHEN
MONOZYTEN
UND
KULTIVIERUNG
UND
DIFFERENZIERUNG
ZU
MAKROPHAGEN
.
29
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.1.2
KULTUREN
DER
MENSCHLICHEN
LUNGENFIBROBLASTEN
DER
LINIE
WI38.
30
2
1.3
KULTUREN
DER
MENSCHLICHEN
PNEUMOZYTEN
TYP
II
ZELLINIEA-549
.
.
.
30
2.1.4
KULTUREN
DER
MAEUSEFIBROBLASTENZELLINIE
L929
.
31
2.
1.
5
KULTUREN
DER
NERZLUNGENZELLE
MVLLU
(NBL-7)
.
31
2.1.6
KULTUREN
DER
MENSCHLICHEN
MAMMAKARZINOMZELLINIE
MCF-7
.
.
.32
2,1.7
KULTUREN
DER
MENSCHLICHEN
TRACHEOBRONCHIALEN
EPITHELZELLEN
(BEAS-2B).
32
2.2
H
ERSTELLUNG
DER
M
INERALSTAUBSUSPENSIONEN
.
.35
2.3
G
EWINNUNG
DER
K
ULTURUEBERSTAENDE
.
.
.
34
2.4
B
ESTIMMUNG
DER
Z
ELLVITALITAET
VON
M
AKROPHAGENKULTUREN
,
DIE
MIT
M
INERALSTAUBSUSPENSIONEN
VERSETZT
WAREN
.
34
2.5
U
LTRAFILTRATION
VON
UE
BERSTAENDEN
Q
UARZSTAUB
-
EXPONIERTER
MENSCH
LICHER
M
AKROPHAGEN
.
34
2.6
A
NIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
VON
KONZENTRIERTEN
M
AKROPHAGEN
UEBERSTAENDEN
.
35
2.7
P
ROTEIN
-E
LEKTROPHORESE
.
36
2.8
P
RAEPARATIVE
G
ELELEKTROPHORESE
.
.36
2.9
F
AERBEMETHODEN
FUER
P
OLYACRYLAMIDGELE
.
;.:
.
I
.
38
2.9.1
COOMASSIE-FAERBUNG
.
38
2.9.2
SILBERFAERBUNG
.
39
2.10
B
IOTESTS
ZUM
N
ACHWEIS
VON
VERSCHIEDENEN
Z
YTOKINEN
.
.
39
2.10.1
TUMOR
NEKROSE
FAKTOR-ALPHA
(TNF-A)
.
.39
2.10.2
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-BETA
(TGF-SS)
.
40
2.10.3
INSULIN-LIKE
GROWTH
FACTOR-1
(IGF-1)
.
41
2.11
P
ROLIFERATIONSTEST
MIT
MENSCHLICHEN
L
UNGENFIBROBLAESTEN
DER
L
INIE
W
I
38
.
41
2.12
P
ROLIFERATIONSTEST
MIT
MENSCHLICHEN
P
NEUMOZYTEN
T
YP
II
Z
ELLEN
DER
L
INIE
A-549
.
'
.
42
2.13
P
ROLIFERATIONSTEST
MIT
MENSCHLICHEN
TRACHEOBRONCHIALEN
E
PITHEL
ZELLEN
DER
L
INIE
BEAS-2B
.
42
2.14
V
ERSUCHE
ZUR
N
EUTRALISIERUNG
VON
VERSCHIEDENEN
Z
YTOKINEN
MIT
H
ILFE
VON
SPEZIFISCHEN
A
NTIKOERPERN
.
YY.,.42
2.15
I
NHIBITION
DER
B
INDUNG
VON
IGF-1
DURCH
EINEN
SPEZIFISCHEN
GEGEN
DEN
IGF-1
R
EZEPTOR
GERICHTETEN
A
NTIKOERPER
.
43
INHALTS
VERZEICHNIS
III
2.16
M
ESSUNG
DER
Z
YTOKINKONZENTRATIONEN
MITHILFE
VON
SPEZIFISCHEN
FELISA
T
ESTS
.
?.
.
:
.
:
.
:.'
.
.
43
2.17
M
EOMETHODEN
ZUR
K
OLLAGENBESTIM
M
UNO
.
43
2.17.1
HYDROXYPROLINMETHODE
.
43
2.17.2
BESTIMMUNG
DES
N-TERMINALEN
PROPEPTIDES
DES
KOLLAGEN
TYP-L
(PINP)
.
45
2.17.3
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
ZUM
NACHWEIS
VON
KOLLAGEN
TYP-L.
.
I
46
2.17.4
SPEZIFISCHE
FAERBUNG
VON
KOLLAGENFASERN
MIT
SIRIUS
ROT
.
.
46
2.18
ITMULUS
AMOEBOZYTENLYSAT
(LAL)-TEST
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DES
ENDO
TOXINGEHALTES
DER
MINERALSTAUBSUSPENSIONEN
.
47
2.19'
N
ACHWEIS
VON
IGF-1
B
INDUNGSPROTEINEN
DURCHDEN
IGF-1-L
IOANDEN
-
BLOT
.
:
.
49
2.20
I
SOLIERUNG
VON
RNA.'.
.
.50
2.21
C
DNA-S
YNTHESE
.
.:.
.
51
2.22
P
OLYMERASE
K
ETTENREAKTION
(PCR).
;
.
52
2.22.1
SYNTHESE
DER
OLIGONUTIEOTIDPRIMER
.
'.
52
2.22.2
PRIMERSEQUENZEN
.
.
52
2.22.3
DURCHFUEHRUNG
DER
POLYMERASE
KETTENREAKTION
._
:.:
.
T.
53
2.22.4
GELELEKTROPHORESE
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
54
2.23
S
TATISTISCHE
T
ESTS
.
.
.
;
.
55
3
ERGEBNISSE
.
.56
3.1
K
ULTUREN
DER
MENSCHLICHEN
M
AKROPHAGEN
.
56
3.1.1
GEWINNUNG
VON
MONOZYTEN
UND
AUSREIFUNG
DER
ZELLEN
ZU
MAKROPHAGEN
.
56
3.1.2
KONTROLLE
DER
PHAGOZYTOSE
.
58
3.1.3
UNTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
VITALITAET
DER
MAKROPHAGEN
NACH
PHAGOZYTOSE
VON
QUARZSTAUB
ODER
KORUND
.
58
3.2
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
TIMULIERUNG
DER
Z
ELLPROLIFERATI
O
N
DURCH
UE
BERSTAENDE
Q
UARZSTAUB
-
EXPONIERTER
MENSCHLICHER
M
AKROPHAGEN
.
.
:
.
60
3.2.1
VERSUCHE
MIT
MENSCHLICHEN
LUNGENFTBROBLASTEN
(LINIE
WI38)
.
60
3.2.2
DER
EINFLUSS
VON
UEBERSTAENDEN
QUARZSTAUB-EXPONIERTER
MAKROPHAGEN
AUF
DIE
PROLIFERATION
VON
MENSCHLICHEN
PNEUMOZYTEN
TYP
11
ZELLEN
(LINIE
A-549)
.
64
3.3
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
C
HARAKTERISIERUNG
DES
P
ROLIFERATIONSFAKTORS
,
DER
VON
Q
UARZSTAUB
-
EXPONIERTEN
M
AKROPHAGEN
GEBILDET
WIRD
.
66
3.3.1
APPROXIMATIVE
BESTIMMUNG
DES
MOLEKULARGEWICHTES
DES
PROLIFERATIONS
INHALTSVERZEICHNIS
IV
FAKTORS
DURCH
ULTRAFTLTRATION
.
.
*
.
&
3.3.2
PROLIFERATIONSTESTS
MIT
DER
MCF
7
INDIKATORZELLINIE
FUER
INSULIN-LIKE
GROWTH
FACTOR
1/INSULIN-LIKE
GROWTHFACTOR-2
.67
3.3.3
PROLIFERATIONSTESTS
UNTER
VERWENDUNG
VON
MENSCHLICHEN
TRACHEOBRONCHIAL
EPITHELZELLEN
DER
LINIE
BEAS-2B.
.,
.
71
3.4
A
UFREINIGUNG
DES
P
ROLIFERATIONSFAKTORS
.
TI
3.4.
I
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
77
3.4.2
ANALYSE
DER
PROLIFERATIONSSTIMULIERENDEN
IFIRKUNG
DER
ANIONENAUSTAUSCH
CHROMATOGRAPHIEFRAKTIONEN
AUF
BEAS-2B
ZELLEN
.
78
3.4.3
TEST
DER
AKTIVEN
FRAKTIONEN
MITTELS
IGF-L-LIGANDEN-BHT
AUF
DAS
VORHAN
DENSEIN
VON
IGF-BINDUNGSPROTEINEN
.
".
.
80
3.4.4
TRENNUNG
DER
AUFKONZENTRIERTEN
MAKROPHAGENUEBERSTAENDE
MITTELS
DER
PRAEPARATIVEN
GELELEKTROPHORESE
.
82
3.4.5
TEST
DER
FRAKTIONEN
MITTELS
1GF-1
LIGANDEN-BLOT
.
83
3.5
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
YNTHESE
VOM
.T
RANSFORMINC
G
ROWTH
F
ACTOR
BETA
(TGF-SS)
DURCH
MENSCHLICHE
M
AKROPHAGEN
.
84
3.5.1
MESSUNG
DER
TGF-SS
GEHALTE
IM
MAKROPHAGENMEDIUM
MIT
HILFE
DES
BIOTEST
MIT
MVLLU
(NBL-7)
ZELLEN
.
84
3.5.2
MESSUNG
DER
TGF-SSEXPRESSION
MITTELS
POLYMERASE
KETTENREAKTION
(PCR)
.
88
3.5.3
BESTIMMUNG
DER
TGF-SS
GEHALTE
MITTELS
ENZYME-LINKED
IMMUNOADSORBANT
ASSAY
(ELISA).
89
3.6
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
YNTHESE
VOM
T
UMOR
N
EKROSE
F
AKTOR
-
ALPHA
(TNF-A)
DURCH
MENSCHLICHE
M
AKROPHAGEN
.
89
3.6.1
ANALYSE
DES
ENDOTOXIN-GEHALTES
DER
STAUBPROBEN
.
89
3.6.2
ANALYSE
DER
MAKROPHAGENUEBERSTAENDE
AUF
TNF-A
MIT
HILFE,
DES
BIQTESTS
MIT
L-FR
29
ZELLEN
.
89
3.6.3
EINFLUSS
VON
ENDOTOXIN
AUF
DIE
TNF-A
SYNTHESE
VON
MENSCHLICHEN
MAKROPHAGEN
.
92
3.7
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
TIMULIERUNG
DER
K
OLLAGENBIOSYNTHESE
VON
MENSCHLICHEN
L
UNGENFIBROBLASTEN
DURCH
UE
BERSTAENDE
VON
Q
UARZSTAUB
EXPONIERTEN
M
AKROPHAGEN
.
94
3.7.
1
NACHWEIS
DER
KOLLAGENSYNTHESE
MIT
HILFE
DER
INDIREKTEN
IMMUNFLUORESZENZ.
94
3.7.2
NACHWEIS
DER
KOLLAGENSYNTHESE
DURCH
FAERBUNG
MIT
SIRIUS
ROT
.
96
INHALTSVERZEICHNIS
V
3-7.3
MESSUNG
DER
AMINOSAEURE
HYDROXYPROLIN
IN
ZELLLYSATEN
DER
LUNGEN
FIBROBLASTEN
.
98
YY
'
'3.7.4
UNTERSUCHUNG
DER
KOLLAGEN
TYP
I
EXPRESSION
DURCH
RT-PCR.
.
-99
3.7.5
MESSUNG
DER
KOLLAGENBIOSYNTHESE
DURCH
DIE
BESTIMMUNG
DER
SYNTHESE
VOM
N-TERMINALEN
PROPEPTID
VON
KOLLAGEN
TYP
1
(PINP)
.
100
3.7.6
INKUBATION
DER
MAKROPHAGENUEBERSTAENDE
MIT
SPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN
GEGEN
MENSCHLICHES
IGF-1
UND
TGF-SS
.
104
4
DISKUSSION
.
108
4.1
B
ESCHREIBUNG
DES
T
ESTSYSTEMS
.
108
4.1.1
GEWINNUNG
DER
MONOZYTEN
UND
DIFFERENZIERUNG
ZU
MAKROPHAGEN
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
QUARZSTAUBES
.
109
4.2
U
NTERSUCHUNGEN
DER
S
TIMULATION
DER
Z
ELLPROLIFERATION
DURCH
UE
BER
STAENDE
VON
Q
UARZSTAUB
-
EXPONIERTEN
MENSCHLICHEN
M
AKROPHAGEN
.
111
4.2.1
STIMULIERUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
VON
MENSCHLICHEN
LUNGENFIBROBLASTEN.
111
4.2.2
STIMULIERUNG
DER
ZELLPROLIFERATION
VON
MENSCHLICHEN
PNEUMOZYTEN
TYP
II
ZELLEN
.
YY
.
112
4.2.3
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
ZYTOKINS,
-WELCHES
FUER
DIE
ZELL
PROLIFERATION
DER
VERSCHIEDENEN
LUNGENZELLEN
VERANTWORTLICH
IST
.
113
4.2.4
UNTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
BILDUNG
EINES
IGF-BINDUNGSPROTEINS
DURCH
MENSCHLICHE
MAKROPHAGEN
.116
4.3
U
NTERSUCHUNGEN
ZUR
S
YNTHESE
DES
T
RANSFORMING
G
ROWTH
F
ACTOR
-
BETA
(TGF-SS)
.
118
4.3.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SYNTHESE
DES
TRANSFORMING
GROWTH
FACTOR-SSDURCH
MENSCHLICHE
MAKROPHAGEN
.
118
4.3.2
SYNTHESE
VON
TGF-SSDURCH
MENSCHLICHE
PNEUMOZYTEN
TYP
IIZELLEN
.
119
4.3.3
SYNTHESE
VON
TGF-SS
DURCH
MENSCHLICHE
LUNGENFIBROBLASTEN
.
121
4.4
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
TIMULATION
DER
K
OLLAGENBIOSYNTHESE
VON
MENSCHLICHEN
L
UNGENFIBROBLASTEN
DURCH
I
NKUBATION
MIT
KONDITIO
NIERTEM
M
EDIUM
VON
M
AKROPHAGEN
NACH
Q
UARZSTAUBPHAGOZYTOSE
.
122
4.5
U
NTERSUCHUNGEN
UEBER
DIE
S
YNTHESE
VOM
T
UMOR
N
EKROSE
F
AKTOR
-
ALPHA
(TNF-A)
DURCH
MENSCHLICHE
M
AKROPHAGEN
.
125
4.6
D
ARSTELLUNG
EINES
MOEGLICHEN
M
ECHANISMUS
FUER
DIE
Q
UARZSTAUB
INDUZIERTE
L
UNGENFIBROSE
.
129
INHALTSVERZEICHNIS
VI
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