Molekulare Grundlagen der Wirkung von Blockern des spannungsabhängigen Kalziumkanals:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | Undetermined |
| Veröffentlicht: |
1998
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Habil.-Schr., 1998 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 1
2. MATERIAL UND METHODEN 12
2.1 ORGANISMEN 12
2.2 ISOLIERUNG VON POLY(A
+)-RNA 12
2.3 KONSTRUKTION VON CDNA BIBLIOTHEKEN 12
2.4 IDENTIFIZIERUNG SPEZIFISCHER KLONE 13
2.5 NORTHEM-BLOT ANALYSE 13
2.6 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA 13
2.6.1 PLASMIDSCHNELLISOLIERUNG NACH HOLMES UND QUIGLEY (1981) 13
2.6.2 PLASMIDISOLIERUNG UND REINIGUNG MITTELS SAEULENCHROMATOGRAPHIE 14
2.7 GELELEKTROPHORESEVERFAHREN 14
2.7.1 AGAROSEGELELEKTROPHORESE 14
2.7.2 POLYACRYLAMIDGELE 14
2.8 GEWINNUNG, REINIGUNG UND KONZENTRIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN 14
2.8.1 ELEKTROELUTION 14
2.8.2 GELASEVERFAHREN 15
2.9 PCR-GESTUETZTE MUTAGENESE 15
2.10 KONSTRUKTION REKOMBINANTER PLASMIDE 17
2.11 SEQUENZIERUNG VON DOPPELSTRAENGIGER PLASMID-DNA 17
2.12 TRANSIENTE EXPRESSION IN HEK293 ZELLEN 18
2.12.1 ZELLKULTUR 18
2.12.2 LIPOFEKTION 18
2.13 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE MESSUNGEN 19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3. ERGEBNISSE 21
3.1 IDENTIFIZIERUNG DER INTERAKTIONSSTELLEN FUER DIHYDROPYRIDINE AM L-TYP
21
KALZIUMKANAL
3.1.1 INTERAKTIONSSTELLEN IN DOMAENE IV DES
A
!C KALZIUMKANALS 21
3.1.2 BETEILIGUNG VON DOMAENE III AN DER INTERAKTION MIT DIHYDROPYRIDINEN
29
3.1.3 EINFLUSS DES IS6 SEGMENTES AUF DIE DIHYDROPYRIDINAFFINITAET 37
3.2 KLONIERUNGSSTRATEGIEN ZUR IDENTIFIZIERUNG VON YYLOW-VOLTAGE"
AKTIVIERTEN 41
KALZIUMKANAELEN
3.2.1 SCREENING VON CDNA-BIBLIOTHEKEN 41
3.2.2 YYEVOLUTORISCHER" ANSATZ 45
4. DISKUSSION 48
4.1 INTERAKTIONSSTELLEN VON KALZIUMKANALBIOCKEM AM L-TYP KALZIUMKANAL 48
4.2 CDNA-KLONIERUNG VON YYLOW-VOLTAGE" AKTIVIERTEN KALZIUMKANAELEN 53
5. LITERATUR 56
6. ZUSAMMENFASSUNG 64 |
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