Rekombinante Expression des T-Zell Differenzierungsmarkers RT6 auf der Zelloberfläche von COS-7-Zellen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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| Beschreibung: | Hamburg, Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | 101 Bl. Ill., graph. Darst. |
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1 EINLEITUNG .1
1.1 IMMUNSYSTEM UND AUTOIMMUNITAET .1
1.2 ENTDECKUNG DES T-ZELL SPEZIFISCHEN OBERFLAECHENANTIGENS RT6 .1
1.3 DIE BEDEUTUNG VON T-ZELLEN BEI DER PATHOGENESE DES IDDM .3
1.4 SCHUTZ VOR IDDM DURCH RT6
+ T-ZELLEN .4
1.5 MONO-ADP-RIBOSYLTRANSFERASEN .5
1.6 MOLEKULARBIOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN AM RT6 .5
1.7 ALTERNATIVES SPLEISSEN IN DER 5' UNTRANSLATIERTEN REGION 7
1.8 ZIELE DER ARBEIT .8
1.8.1 UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES DES ALTERNATIVEN SPLEISSENS AUF DIE
RT6-EXPRESSION .8
1.8.2 EPITOPKARTIERUNG RT6-SPEZIFISCHER MONOKLONALER ANTIKOERPER .10
1.8.3 KARTIERUNG DER FUER DIE T-ZELL-AKTIVIERUNG RELEVANTEN EPITOPE
DES RT6-MOLEKUELS . 10
2
MATERIAL UND METHODEN .12
2.1 ZELLEN .12
2.1.1 COS-7-ZELLINIE .12
2.1.2 EPSM-30-ZELLINIE .13
2.1.3 EPD3-ZELLINIE .13
2.2 VEKTOREN . 13
2.2.1 PBK-CMV-EXPRESSIONSVEKTOR .14
2.2.2 PBLUESCRIPT II KS-VEKTOR .14
2.2.3 PCDNAI-EXPRESSIONSVEKTOR .15
2.2.4 PCRII-VEKTOR .15
2.3 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA .15
2.4 DNA-KONZENTRATIONSBESTIMMUNG .15
2.5 SEQUENZSPEZIFISCHE SPALTUNG DER DNA MIT RESTRIKTIONS-
ENDONUKLEASEN .15
2.6 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG DER DNA . 16
2.7 DNA-EXTRAKTION AUS EINEM AGAROSE-GEL .16
2.8 LIGATION DER RT6-DNA-FRAGMENTE IN DIE VEKTOR-DNA .17
2.9 TRANSFORMATION DER LIGIERTEN DNA IN E.COLI .17
2.10 POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR) .17
2.11 VERWENDETE PRIMER .18
2.12 DNA-SEQUENZIERUNGEN .18
2.13 TRANSFEKTIONSMETHODEN .19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.13.1 LIPOFECTAMINE
YY
-TRANSFEKTIONSMETHODE .19
2.13.2 CALCIUM-PHOSPHAT-TRANSFEKTIONSMETHODE .20
2.13.3 T RANSFECTAM
YY
-T RANSFEKTIONSMETHODE .21
2.13.4 DEAE-DEXTRAN-VERMITTELTE TRANSFEKTION .22
2.13.5 T RANSFERRINFECTION .22
2.13.5 ELEKTROPORATION .22
2.14 ANTIKOERPER .22
2.15 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ .23
2.16 AUSWERTUNG IM FLUORESCENCE ACTIVATED CELL SORTER (FACS) .23
3 ERGEBNISSE .25
3.1 KLONIERUNG VON RT6
A CDNA IN DEN PBK-CMV-EXPRESSIONSVEKTOR .25
3.2 KLONIERUNG VON RT6^ CDNA IN DEN PBK-CMV-EXPRESSIONSVEKTOR .31
3.3 EXPRESSION VON RT6.1 UND RT6.2 AUF DER ZELLOBERFLAECHE VON COS-
7-ZELLEN .33
3.3.1 EXPRESSION VON RT6.1 AUF DER ZELLOBERFLAECHE VON COS-7-ZELLEN .33
3.3.2 EXPRESSION VON RT6.2 AUF DER ZELLOBERFLAECHE VON COS-7-ZELLEN .36
3.4 KLONIERUNG VON RT6
A CDNA IN DEN EXPRESSIONSVEKTOR PCDNAI .37
3.5 VERGLEICH DER EXPRESSIONSVEKTOREN PCDNA-6A UND PBK-6A .39
3.6 OPTIMIERUNG DER LIPOFECTAMINE
YY
-TRANSFEKTIONSMETHODE .41
3.7 VERGLEICH VERSCHIEDENER TRANSFEKTIONSMETHODEN .43
3.7.1 CALCIUM-PHOSPHAT-TRANSFEKTIONSMETHODE .43
3.7.2 TRANSFECTAM
YY
-TRANSFEKTIONSMETHODE .44
3.8 KLONIERUNG UNTERSCHIEDLICHER 5' UNTRANSLATIERTER REGIONEN IN DEN
EXPRESSIONSVEKTOR PBK-CMV .45
3.9 UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES UNTERSCHIEDLICHER ALTERNATIV
GESPLEISSTER 5'UTRS AUF DIE EXPRESSION DES RT6-PROTEINS .55
3.10 KONSTRUKTION VON RT6AB- UND RT6BA-CHIMAEREN IM EXPRESSIONS
VEKTOR PBK-CMV .57
3.11 EPITOPKARTIERUNG RT6-SPEZIFISCHER MONOKLONALER ANTIKOERPER UND
POLYKLONALER ANTISEREN DURCH RT6.1/6.2- UND RT6.2/6.1-
CHIMAEREN .59
3.11.1 RT6.1-SPEZIFISCHE MAK .60
3.11.2 RT6.2-SPEZIFISCHE MAK . 65
3.11.3 RT6-SPEZIFISCHER MAK GY 1 /34 66
3.11.4 RT6.1 - UND RT6.2-SPEZIFISCHE POLYKLONALE ANTISEREN .67
4 DISKUSSION . 70
4.1 VORBEMERKUNGEN .70
4.2 AUSWERTUNG DER TRANSFEKTIONSVERSUCHE MIT PBK-6A, PBK-6B UND
PCDNA-6A ZUR EXPRESSION VON RT6.1 UND RT6.2 AUF DER
ZELLOBERFLAECHE VON COS-7 ZELLEN .71
4.3 TRANSLATIONSREGULATION DES RT6 DURCH ALTERNATIVES SPLICING 74
4.4 EPITOPKARTIERUNG RT6-SPEZIFISCHER ANTIKOERPER .79
4.4.1 METHODEN DER EPITOPKARTIERUNG .79
4.4.2 EPITOPKARTIERUNG MONOKLONALER ANTIKOERPERN .79
4.4.3 EPITOPKARTIERUNG ALLOTYPSPEZIFISCHER POLYKLONALER ANTISEREN .81
4.5 DAS T-ZELL-AKTIVIERUNGSANTIGEN RT6 .83
4.6 RT6: EIN MITGLIED DER FAMILIE DER MONO(ADP-RIBOSYL)-
TRANSFERASEN .85
4.7 AUSBLICK .86
5 ZUSAMMENFASSUNG .87
6 LITERATURVERZEICHNIS .88
7 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS .98
DANKSAGUNG .99
LEBENSLAUF .100
ERKLAERUNG .101 |
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