Reinigung der 55 kDa Phosphatidylinositol 4-Kinase aus A431-Zellen: Untersuchungen zur Regulation des Enzyms durch Phosphorylierung
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
1
. EINLEITUNG
11
KOMMUNIKATION UNTER VIELZELLERN
1
2. SIGNALUEBERTRAGUNG DURCH MEMBRANREZEPTOREN
1.3. DER PHOSPHATIDYLINOSITOL-METABOLISMUS
1
4 PHOSPHATIDYLINOSITOL 4-KINASEN
1.4.1. REINIGUNG DER PI 4-KINASEN
1
.4.2. FUNKTIONELLE CHARAKTERISIERUNG DER PI 4-KINASEN
1.4.3. KLONIERUNG VON PI
4-KINASEN
SEITE
1
1
1
3
6
7
8
11
2. FRAGESTELLUNG
14
3
MATERIAL UND METHODEN
3
.1. MATERIAL
3
.1.1. V ERWENDETE ZELLEN
3.1.2. ANTIKOERPER
3.1.3. ENZYME
3.1.4. CHEMIKALIEN
3.1.5. ANDERE MATERIALIEN
3.2. METHODEN
3.2.1. KULTIVIERUNG DER ZELLEN
3.2.2. REINIGUNG
3.2.3. PI 4-KINASE-AKTIVITAETSTEST
3.2.4. PROTEINBESTIMMUNG
3.2.5. SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE
3.2.6. SILBERFAERBUNG
3.2.7. DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
3.2.8. PHOSPHORYLIERUNGS-/DEPHOSPHORYLIERUNGSVERSUCHE
3.2.9. TRENNUNG PHOSPHORYLIERTER AMINOSAEUREN
3.2.10. EGF-STIMULATION
15
15
15
15
15
16
16
17
17
17
19
20
20
20
21
21
22
23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3
.
2
.
12
.
3.2.13.
3.2.14.
3.2.15.
4.
4.1.
4.2.
4.2.1.
4.2.1.1.
4.2.1.2.
4.2.2.
4.2.2.1.
4.2.2.2.
4.2.3.
4.2.4.
4.3.
4.3.1.
4.3.2.
4.4.
5.
5.1.
5.2.
5.3.
IMMUNOPRAEZIPITATION
IMMUNO-BLOT
REINIGUNG DER PI 4-KINASE MIT DER REVERSED PHASE SAEULE
MALDI-MS
ERGEBNISSE
REINIGUNG DER PHOSPHATIDYLINOSITOL-4-KINASE
UNTERSUCHUNGEN ZUR REGULATION DER GEREINIGTEN PI 4-KINASE
DURCH PHOSPHORYLIERUNG
PHOSPHORYLIERUNG DER PI 4-KINASE MIT PROTEINKINASE A
NACHWEIS DER PI 4-KINASEPHOSPHORYLIERUNG DURCH PROTEIN
KINASE A -
WIRKUNG DER PROTEINKINASE A AUF DIE PI 4-KINASE-AKTIVITAET
PHOSPHORYLIERUNG DER PI 4-KINASE MIT PROTEINKINASE C
NACHWEIS DER PI 4-KINASEPHOSPHORYLIERUNG DURCH PROTEIN
KINASE C
WIRKUNG DER PROTEINKINASE C AUF DIE PI 4-KINASE-AKTIVITAET
EFFEKT DER PTPASE SHP-1 AUF DIE PI 4-KINASE-AKTIVITAET
TRENNUNG DER PHOSPHORYLIERTEN AMINOSAEUREN
AKTIVIERUNG DER PI 4-KINASE DURCH EGF-STIMULATION VON
A431-ZELLEN
WIRKUNG DER EGF-INKUBATIONSZEIT AUF DIE PI 4-KINASE-
AKTIVITAET IN A431-ZELLEN
UNTERSUCHUNGEN ZUR ASSOZIATION ZWISCHEN PI 4-KINASE UND
SHP-1
VERSUCH ZUR SEQUENZIERUNG DER PI 4-KINASE
DISKUSSION
REINIGUNG DER PI 4-KINASE AUS A431-ZELLEN
UNTERSUCHUNGEN ZUR REGULATION DER GEREINIGTEN PI 4-KINASE
DURCH PHOSPHORYLIERUNG
AKTIVIERUNG DER PI 4-KINASE DURCH EGF-STIMULATION VON
5.4.
6
.
6
.
1
.
6
.
2
.
A431-ZELLEN
VERSUCH ZUR SEQUENZIERUNG DER PI 4-KINASE
ZUSAMMENFASSUNG UND AUSBLICK
ZUSAMMENFASSUNG DER ERZIELTEN ERGEBNISSE
AUSBLICK
50
52
55
55
56
7.
LITERATUR
57 |
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