Funktionale Charakterisierung einer neuartigen Desaturase aus Physcomitrella patens (Hedw.) B.S.G.:
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| adam_text | FUNKTIONALE CHARAKTERISIERUNG EINER NEUARTIGEN DESATURASE AUS
PHYSCOMITRELLA PATENS (HEDW.) B.S.G. DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES
DOKTORGRADES DES FACHBEREICHES BIOLOGIE DER UNIVERSITAET HAMBURG
VORGELEGT VON THOMAS GIRKE HAMBURG HAMBURG, IM MAI 1998
INHALTSVERZEICHNIS 1 EINLEITUNG 1 1.1 ALLGEMEINE EINFUEHRUNG 1 1.2
BIOSYNTHESE MEHRFACH UNGESAETTIGTER FETTSAEUREN BEI EUKARYOTEN PFLANZEN 2
1.2.1 DESATURASEN BEI 16:3-UND 18:3-PFLANZEN 2 1.2.2 DIE A6-DESATURASE
DER 18:4-PFIANZEN 6 1.2.3 SYNTHESE VON 20:4 UND 20:5 BEI ALGEN UND
MOOSEN 7 1.2 FUNKTIONSWEISE DER DESATURASEN 11 1.3 FAMILIE DER
MEMBRANGEBUNDENEN DESATURASEN 14 1.4 PHYSCOMITRELLA PATENS 20 1.5
PROBLEMSTELLUNG, ZIEL UND STRATEGIE 21 2 MATERIAL UND METHODEN 24 2.1
GERAETE, VERBRAUCHSMATERIAL, ENZYME UND CHEMIKALIEN 24 2.2 VEKTOREN 25
2.3 ORGANISMEN 25 2.3.1 ESCHERICHIA CO//-STAEMME 25 2.3.2 SACCHAROMYCES
CEREVISIAE 25 2.3.3 PHYSCOMITRELLA PATENS 25 2.4 KULTUR VON E. COLI 26
2.5 TRANSFORMATION VON E. COLI 27 2.6 PLASMID-ISOLATION AUS E. COLI 28
2.7 REINIGUNG, FAELLUNG UND KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUCLEINSAEUREN 29
2.8 GELELEKTROPHORESE VON NUCLEINSAEUREN 29 2.9 ELUTION VON DNA AUS
AGAROSE-GELEN 30 2.10 PCR, PRIMER UND KLONIERUNG VON PCR-FRAGMENTEN 31
2.11 KLONIERUNGSTECHNIKEN, RESTRIKTIONSSUBKLONE UND DNA-SEQUENZIERUNG 33
2.12 VEKTOREN UND KONSTRUKTE FUER DIE TRANSFORMATION 34 2.12.1 KONSTRUKTE
FUER DIE TRANSFORMATION VON P. PATENS 34 2.12.2 KONSTRUKTE FUER DIE
TRANSFORMATION VON S. CEREVISIAE 37 2.13 ISOLIERUNG VON NUCLEINSAEUREN
AUS PHYSCOMITRELLA PATENS 38 2.13.1 ISOLIERUNG GENOMISCHER DNA 38 2.13.2
ISOLIERUNG VON RNA 39 2.14 NICHTRADIOAKTIVE MARKIERUNG VON DNA UND RNA
39 2.15 HYBRIDISIERUNGEN 41 2.15.1 SCREENING EINER CDNA-BANK VON P.
PATENS (PLAQUE-HYBRIDISIERUNG) 41 2.15.2 SOUTHERN-BLOT 45 2.15.3
NORTHERN-BLOT 47 2.16 KULTUR VON PHYSCOMITRELLA PATENS UND
FETTSAEUREFUETTERUNGEN 48 2.17 PROTOPLASTEN-TRANSFORMATION BEI
PHYSCOMITRELLA PATENS 50 2.18 KULTUR VON S. CEREVISIAE 53 2.19
TRANSFORMATION VON S. CEREVISIAE 54 2.20 PLASMID-ISOLATION AUS S.
CEREVISIAE 55 2.21 ANZUCHTBEDINGUNGEN BEI DER FUNKTIONALEN EXPRESSION IN
S. CEREVISIAE 55 2.22 LIPIDANALYTIK 56 2.22.1 LIPIDEXTRAKTIONEN 56
2.22.2 REINIGUNG UND IDENTIFIKATION VON LIPIDEN UEBER DC 56 2.22.3
DARSTELLUNG UND UND GLC-ANALYSE VON FETTSAEUREMETHYLESTERN 58 2.22.4
GLC-MS VON FETTSAEURE-PYRROLIDIDEN 59 2.22.5 POSITIONSANALYSEN 60 2.22.6
FUETTERUNG UND HPLC-ANALYSE VON MONOALKENYLGLYCEROLEN 60 3 ERGEBNISSE UND
DISKUSSION 61 3.1 ISOLATION DER PPDES6-CDNA UND DER GENOMISCHEN SEQUENZ
PPDES6 61 3.1.1 ISOLATION DER PPDES6-CDNA 61 3.1.2 ANALYSE DER PRIMER,
DIE ZUR ISOLATION DER PPDS6-CDNA FUEHRTEN 64 3.1.3 ISOLATION DER
GENOMISCHEN SEQUENZ PPDESS 65 3.1.4 SEQUENZANALYSEN DES PROTEINS PPDES6
69 3.2 TRANSFORMATION VON P. PATENS 79 3.3 MOLEKULARE ANALYSE DER
GEN-DISRUPTIONS-TRANSFORMANTEN 84 3.4 FETTSAEUREANALYSEN DER
PPDS6-MUTANTEN UND DES P. PAFENS-WILDTYPS 92 3.5 FUNKTIONALE EXPRESSION
DER PPDS6-CDNA IN SACCHAROMYCES CEREVISIAE 98 3.6 POSITIONSANALYSEN
BEIM WILDTYP UND DER PPDS6-MUTANTE VON P. PATENS 102 3.7 ANALYSE DES
PHAENOTYPSDERPPCTES6-MUTANTEN 112 4 ZUSAMMENFASSUNG 114 5 LITERATUR 116 6
ANHANG 139
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