Immunmodulation durch das Gangliosid GM3 und seine Derivate: Untersuchungen zu Struktur-Funktions-Beziehungen
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
EINLEITUNG
.
1
1.
EINFUEHRUNG
_
.
_
.
_
.
_
.
_
_
_
.
_
1
2.
THEORETISCHER
HINTERGRUND
_
.
_
_
_
.
_
.
5
2.1
GLYKOSPHINGOLIPIDE
.
5
2.2
T-LYMPHOCYTEN
.
12
2.2.1
DAS
CD4-ANTIGEN
.
13
2.2.2
DIE
PROLIFERATION
VON
T-LYMPHOCYTEN
.
18
3.
ARBEITSZIEL.
20
II
MATERIAL
UND
METHODEN
.22
1.
ISOLIERUNG
VON
GANGLIOSIDEN
.
22
1.1
CHLOROFORMFREIE
EXTRAKTION
VON
GLYKOSPHINGOLIPIDEN
.
23
1.1.1
METHODENENTWICKLUNG
ZUR
CHLOROFORMFREIEN
EXTRAKTION
.
23
1.1.2
CHLOROFORMFREIE
EXTRAKTION
DES
GANGLIOSIDS
GM3
AUS
CHO
UND
HYBRIDOMA-ZELLEN
.
24
1.2
ENTSALZUNG
.
24
1.3
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
.
26
1.4
ALKALIHYDROLYSE
.
27
1.5
ADSORPTIONSCHROMATOGRAPHIE
.
27
2.
BERECHNUNG
VON
RANG-KORRELATIONS-KOEFFIZIENTEN.
28
3.
REINDARSTELLUNG
VON
GM3-VARIANTEN
UND
NEUTRALEN
GLYKOSPHINGOLIPIDEN
MITTELS
PRAEPARATIVER
HOCHLEISTUNGS-FLUESSIGKEITS-CHROMATOGRAPHIE
(HPLC).
29
3.1
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
MIT
TMAE-FRACTOGEL
ZUR
TRENNUNG
VON
GM3(NEU5AC)
UND
GM3(NEU5GC)
.
29
3.2
UMKEHRPHASEN-CHROMATOGRAPHIE
ZUR
TRENNUNG
VON
GM3(NEU5AC)
UND
GM3(NEU5GC)-FRAKTIONEN
NACH
IHRER
JEWEILIGEN
FETTSAEUREZUSAMMENSETZUNG
.
31
3.3
NORMALPHASEN-CHROMATOGRAPHIE
ZUR
REINDARSTELLUNG
VON
NEUTRALEN
GLYKOSPHINGOLIPIDEN
.
32
INHALTSVERZEICHNIS
4.
DARSTELLUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
GM3-DERIVATEN
_
.
_
.
_
.
_
.
33
4.1
PERMETHYLIERUNG
VON
GM3
.
33
4.2
DARSTELLUNG
DER
GM3-METHYLESTER
UND
-AMIDE
.
35
4.3
DARSTELLUNG
DER
GM3(NEU5AC)-DERIVATE
DL
BIS
D5
.
36
4.3.1
SYNTHESE
DER
DERIVATE
DL
BIS
D5
.
36
4.3.2
ISOLIERUNG
DER
DERIVATE
DL
BIS
D5
UEBER
HPLC
.
38
5.
GSL-REFERENZSUBSTANZEN
.
41
6.
GSL-ANALYTIK.
.
42
6.1
ANALYTISCHE
TRENNUNG
DURCH
HOCHLEISTUNGS-DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
.
42
6.1.1
TRENNUNG
AUF
KIESELGEL-PLATTEN
.
42
6.1.2
TRENNUNG
AUF
RP
LG
-
PLATTEN
.
43
6.1.3
DETEKTION
.
43
6.2
DENSITOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DES
LIPIDGEBUNDENEN
SIALINSAEUREGEHALTES
.
45
6.3
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DES
LIPIDGEBUNDENEN
SIALINSAEUREGEHALTES
.
45
6.4
SIALINSAEUREBESTIMMUNG
MITTELS
HPLC
.
46
6.5
STRUKTURSPEZIFISCHE
DETEKTION
VON
GSL
MITTELS
OVERLAY-TECHNIK
.
46
6.6
STRUKTURAUFKLAERUNG
VON
GM3
UND
SEINEN
DERIVATEN
MITTELS
MASSEN
SPEKTROMETRIE
.
48
7.
ZELLKULTIVIERUNG
.
49
7.1
ZELLINIEN
.
49
7.2
PRIMAERE
ZELLEN
.
50
7.3
KULTURMEDIEN
UND
SUPPLEMENTE
.
51
7.4
STIMULIERUNG
VON
T-LYMPHOCYTEN
.
53
7.5
KRYOKONSERVIERUNG
UND
STAMMHALTUNG
.
53
7.6
KULTIVIERUNGSSYSTEME
.
54
8.
ANALYTIK
ZU
DEN
ZELLKULTUREN
.
54
8.1
ZELLZAHLBESTIMMUNG
.
54
8.2
MYCOPLASMENBESTIMMUNG
.
56
8.3
GLUKOSE
UND
LAKTATBESTIMMUNG
.
57
8.4
AMMONIUMBESTIMMUNG
.
58
8.5
AMINOSAEUREBESTIMMUNG
.
58
9.
BIOLOGISCHE
TESTSYSTEME
.
59
9.1
IMMUNFLUORESZENZ
.
60
9.1.1
ANFERTIGUNG
VON
MIKROSKOPISCHEN
PRAEPARATEN
.
62
INHALTSVERZEICHNIS
9.1.2
DURCHFLUSSCYTOMETRIE
.
63
9.2
['
HJTHYMIDINEINBAU
.
66
9.2.1
PROLIFERATION
VON
T-LYMPHOCYTEN
NACH
PHA-STIMULATION
.
68
9.2.2
LYMPHOCYTEN-MISCHKULTUR
(MIXED
LYMPHOCYTE
REACTION)
.
69
IN
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION.
73
A.
REINDARSTELLUNG
DER
IN
DEN
BIOLOGISCHEN
TESTS
EINGESETZTEN
SUBSTANZEN
.
74
1.
ENTWICKLUNG
EINER
METHODE
ZUR
CHLOROFORMFREIEN
EXTRAKTION
VON
GLYKOSPHINGOLIPIDEN
.
.
74
1.1
EXTRAKTION
VON
GSL
AUS
HIMGEWEBE
.
76
1.2
EXTRAKTION
VON
GSL
AUS
HYBRIDOMA-ZELLEN
.
78
1.3
VERGLEICH
DER
GANGLIOSIDERTRAEGE
DER
EXTRAKTIONEN
AUS
HIMGEWEBE
UND
HYBRIDOMA-ZELLEN
.
82
1.4
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
83
2.
ISOLIERUNG
VON
GM3
AUS
CHO
UND
HYBRIDOMA-ZELLEN.
84
2.1
CHLOROFORMFREIE
EXTRAKTION
UND
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG
.
84
2.2
UEBERPRUEFUNG
VON
REINHEITSGRAD
UND
SIALINSAEUREZUSAMMENSETZUNG
MITTELS
OVERLAY-TECHNIK
.
86
2.3
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
87
3.
TRENNUNG
VON
GM3-VARIANTEN
NACH
ART
DER
SIALINSAEURE
DURCH
ANIONEN
AUSTAUSCH-HPLC
MIT
TMAE-FRACTOGEL
.
88
3.1
TRENNUNGEN
MIT
EINER
150
MM
X
10
MM
TMAE-FRACTOGEL-SAEULE
.
90
3.2
TRENNUNGEN
MIT
EINER
110
MM
X
30
MM
TMAE-FRACTOGEL-SAEULE
.
94
3.3
SIALINSAEUREBESTIMMUNG
MITTELS
HPLC
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
TMAE-FRACTOGEL
TRENNUNGEN
.
96
3.4
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
97
4.
TRENNUNG
VON
GM3-VARIANTEN
NACH
FETTSAEUREZUSAMMENSETZUNG
DURCH
PRAEPARATIVE
UMKEHRPHASEN-HPLC
-------------------------------------
.
-
.
98
4.1
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
100
S.
REINDARSTELLUNG
VON
GM3-DERIVATEN
_
_
.
_
-
.
101
5.1
GM3(NEU5GC)-METHYLETHER
.
103
INHALTSVERZEICHNIS
5.2
GM3-METHYLESTER
UND
AMIDE
.
103
5.3
GM3(NEU5AC)-DERIVATE
DL
BISD5
.
105
5.4
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
108
6.
STRUKTURELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
GM3
UND
GM3-DERIVATEN
.
110
6.1
ZUSAMMENFASSUNG
.
115
7.
UEBERSICHT
UBER
DIE
EINGESETZTEN
SUBSTANZEN
.115
B.
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLEN
.
119
8.
WACHSTUMSKURVEN
UND
KULTIVIERUNGSDATEN
.
119
8.1
ZELLINIE
U937
.
119
8.2
T-LYMPHOCYTEN
OHNE
PHA-STIMULIERUNG
.
122
8.3
PHA-STIMULIERTE
T-LYMPHOCYTEN
.
123
8.4
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
125
C.
BIOLOGISCHE
TESTS
.
126
9.
CD4-MODULATION
DURCH
GM3
UND
SEINE
DERIVATE.
126
9.1
VORVERSUCHE
.
126
9.1.1
NACHWEIS
DES
CD4-ANTIGENS
AUF
MOLT-4
UND
U937-ZELLEN
SOWIE
AUF
HUMANEN
T-LYMPHOCYTEN
.
126
9.1.2
CD4-MODULATION
DURCH
GM3,
GM3-DERIVATE
UND
VERWANDTE
SUBSTANZEN:
MIKROSKOPISCH-FOTOGRAFISCHE
AUSWERTUNG
.
127
9.1.3
EINFLUSS
DER
GSL-INKUBATIONSDAUER
AUF
DIE
CD4-INTEMALISIERUNG
.
130
9.1.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
T-LYMPHOCYTEN-PRAEPARATION
.
131
9.1.5
FCS-EINFLUSS
AUF
DIE
GSL-INDUZIERTE
CD4-MODULATION
.
132
9.1.6
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
133
9.2
MESSUNG
DER
CD4-MODULATION
BEI
T-LYMPHOCYTEN
MITTELS
DURCHFLUSS
CYTOMETRIE
.134
9.3
MESSUNG
DER
CD4-MODULATION
BEI
U937-ZELLEN
MITTELS
DURCHFLUSSCYTOMETRIE.
141
9.4
STANDARDABWEICHUNGEN
.
147
9.5
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
VON
CD4
.
147
9.6
STUDIE
ZU
DEN
BINDUNGSSTELLEN
DES
ANTI-CD4-ANTIKOERPERS
UND
DER
GSL
AM
CD4-MOLEKUEL
.
149
9.7
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLINTEGRITAET
.
150
9.8
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
152
9.8.1
CD4-MODULATION
DURCH
GM3,
GM3-DERIVATE
UND
VERWANDTE
SUBSTANZEN.
152
INHALTSVERZEICHNIS
9.8.2
NACHWEIS
DER
INTERNALISIERUNG
VON
CD4
.
158
9.8.3
STUDIE
ZU
DEN
BINDUNGSSTELLEN
DES
ANTI-CD4-ANTIKOERPERS
UND
DER
GSL
AM
CD4-MOLEKUEL
.
159
9.8.4
UNTERSUCHUNG
DER
ZELLINTEGRITAET
.
159
10.
MODULATION
DER
PROLIFERATION
VON
T-LYMPHOCYTEN
DURCH
GM3
UND
SEINE
DERIVATE
.
160
10.1
VORVERSUCHE
.
160
10.1.1
KONZENTRATION
UND
ZEITPUNKT
DER
ZUGABE
DES
RADIOAKTIVEN
THYMIDINS
.
160
10.1.2
PROLIFERATION
VON
PHA-STIMULIERTEN
T-LYMPHOCYTEN
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
FCS-KONZENTRATION
.
161
10.1.3
ZUSAMMENFASSUNG
.
164
10.2
MODULATION
DER
PROLIFERATION
VON
PHA-STIMULIERTEN
T-LYMPHOCYTEN
.
165
10.2.1
STANDARDABWEICHUNGEN
.
171
10.3
MODULATION
DER
BILDUNG
UND
AKTIVIERUNG
VON
T-SUPPRESSOR-ZELLEN
.
172
10.3.1
EINFLUSS
VON
GSL
AUF
DIE
BILDUNG
NICHT-INDUZIERTER
T-SUPPRESSOR-ZELLEN
.
174
10.3.2
EINFLUSS
VON
GSL
AUF
DIE
BILDUNG
UND
AKTIVIERUNG
CONCANAVALIN
A-
INDUZIERTER
T-SUPPRESSOR-ZELLEN
.
176
10.4
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
.
180
10.4.1
MODULATION
DER
PROLIFERATION
VON
PHA-STIMULIERTEN
T-LYMPHOCYTEN
.
180
10.4.2
EINFLUSS
VON
GSL
AUF
DIE
BILDUNG
NICHT-INDUZIERTER
T-SUPPRESSOR-ZELLEN
.
185
10.4.3
EINFLUSS
VON
GSL
AUF
DIE
BILDUNG
UND
AKTIVIERUNG
CONCANAVALIN
A-
INDUZIERTER
T-SUPPRESSOR-ZELLEN
.
188
IV
ZUSAMMENFASSUNG
.
191
ANHANG
.
.
I
D
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
I
E
LITERATURVERZEICHNIS
.IV |
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