Einsatz molekularbiologischer Methoden zur Fischartenbestimmung:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
I
T
HEORETISCHER
T
EIL
1
EINLEITUNG
1
1.1
FISCHKONSUM
1
1.2
GESETZLICHE
GRUNDLAGEN
1.3
FISCHARTENBESTIMMUNG
2
GRUNDLAGEN
DER
MOLEKULARBIOLOGISCHEN
METHODEN
1
2
4
2.1
DIE
DNA
4
2.2
POLYMERASEN
2.3
RESTRIKTIONSENZYME
3
DNA-FINGERPRINTING
6
8
10
3.1
GRUNDLAGE
DER
GENETISCHEN
VIELFALT
3.2
UNTERSCHEIDUNGSMOEGLICHKEITEN
DER
GENETISCHEN
VIELFALT
3.2.1
DNA-SEQUENZIERUNG
3.2.2
DNA-POLYMORPHISMEN
4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITSTECHNIKEN
10
10
10
11
13
4.1
ISOLIERUNG
DER
DNA
4.2
GELELEKTROPHORESE
4.2.1
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
4.2.2
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
4.3
SCHNEIDEN
DER
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUCLEASEN
4.4
HYBRIDISIERUNGSTECHNIK
4.4.1
GRUNDLAGEN
4.4.2
HYBRIDISIERUNGSPARAMETER
4.4.2.1
HYBRIDISIERUNGSRATE
4.4.2.2
TEMPERATUREINFLUSS
4.4.2.3
STRINGENZEINFLUSS
4.4.3
DOT
BLOT
4.4.3.1
DURCHFUEHRUNG
4.4.3.2
DETEKTION
4.4.4
DOT
BLOT
IM
ASSAY-FORMAT
4.4.4.1
DURCHFUEHRUNG
4.4.4.2
DETEKTION
4.4.5
SOUTHERN
BLOT
13
15
15
17
17
18
19
21
21
22
22
23
23
24
26
26
28
28
4.5
POLYMERASE-KETTENREAKTION
4.5.1
PRINZIP
4.5.2
RAPD-PCR
4.5.3
PCR-RFLP
29
29
33
34
INHALTSVERZEICHNIS
5
HERKOEMMLICHE
TIERARTENDIFFERENZIERUNGSMETHODEN
37
5.1
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
37
5.2
IMMUNOCHEMISCHE
METHODEN
38
5.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
39
6
ZIELSETZUNG
42
II
PRAKTISCHER
TEIL
7
PROBENBESCHREIBUNG
-46
7.1
HANDELSPROBEN
46
7.2
REFERENZMATERIAL
47
8
ALLGEMEINE
METHODEN
48
8.1
DNA-ISOLIERUNG
48
8.2
ELEKTROPHORETISCHE
TECHNIKEN
49
9
RAPP-PCR
TECHNIK
50
9.1
OPTIMIERUNG
DER
PHYSIKALISCHEN
PARAMETER
50
9.1.1
TEMPERATURPROFIL
DES
THERMOCYCLERS
51
9.1.2
ERGEBNIS
53
9.2
OPTIMIERUNG
DER
CHEMISCHEN
PARAMETER
53
9.2.1
DNA-MATRIZE
54
9.2.2
PRIMERAUSWAHLKRITERIEN
55
9.2.3
POLYMERASE
56
9.2.4
DESOXYNUKLEOSIDTRIPHOSPHATE
57
9.2.5
PUFFER
UND
MAGNESIUMCHLORID
57
9.3
OPTIMIERTE
VERSUCHSPARAMETER
ZUR
DURCHFUEHRUNG
DER
RAPD-PCR
57
9.3.1
ERGEBNIS
DER
RAPD-PCR
58
9.3.2
UNTERSUCHUNG
VON
ERHITZTEN
PROBEN
62
9.3.3
UNTERSUCHUNG
VON
MISCHUNGEN
64
9.4
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
66
9.5
ZUSAMMENFASSUNG
69
10
PCR-RFLP
TECHNIK
71
10.1
OPTIMIERUNG
CYTB-PCR
71
10.2
DURCHFUEHRUNG
DER
CYTB-PCR
71
10.2.1
ERGEBNIS
DER
CYTB-PCR
72
II
INHALTSVERZEICHNIS
10.3
RESTRIKTIONSSPALTUNG
74
10.3.1
DURCHFUEHRUNG
DER
RESTRIKTIONSSPALTUNG
74
10.3.2
ERGEBNIS
DER
RESTRIKTIONSSPALTUNG
74
10.3.3
UNTERSUCHUNG
VON
MISCHUNGEN
84
10.4
ZUSAMMENFASSUNG
87
11
DOT
BLOT
89
11.1
HERSTELLUNG
DIGOXIGENIN-MARKIERTER
GENOMISCHER
SONDEN
89
11.1.1
BESTIMMUNG
DER
MARKIERUNGSEFFIZIENZ
90
11.1.2
ERGEBNIS
DER
MARKIERUNGSEFFIZIENZ
91
11.2
OPTIMIERUNG
DER
DOT
BLOT
PARAMETER
92
11.3
DURCHFUEHRUNG
DES
DOT
BLOTS
93
11.3.1
ERGEBNIS
DER
SEEHECHT-SONDE
93
11.3.1.1
UNTERSUCHUNG
VON
MISCHUNGEN
94
11.3.1.2
UNTERSUCHUNG
VON
ERHITZTEN
PROBEN
96
11.3.1.3
ZUSAMMENFASSUNG
SEEHECHT-SONDE
96
11.3.2
ERGEBNIS
ROTBARSCH-SONDE
97
11.3.2.1
UNTERSUCHUNG
VON
MISCHUNGEN
97
11.3.2.2
ZUSAMMENFASSUNG
ROTBARSCH-SONDE
99
11.4
ERGEBNIS
SEELACHS-,
SCHOLLEN-,
KABELJAU-,
ALASKA-SEELACHS-SONDE
99
12
SOUTHERN
BLOT
101
12.1
OPTIMIERUNG
SOUTHERN
BLOT
101
12.2
VERGLEICH
DER
NACHWEISEMPFINDLICHKEIT
VON
DNA
IM
AGAROSEGEL
UND
IM
SOUTHERN
BLOT
101
12.3
DURCHFUEHRUNG
DES
SOUTHERN
BLOTS
103
12.3.1
ERGEBNIS
SEELACHS-SONDE
103
12.3.2
ERGEBNIS
SEEHECHT-SONDE
104
12.3.3
ZUSAMMENFASSUNG
SOUTHERN
BLOT
106
13
DOT
BLOT
IM
ASSAY-FORMAT
107
13.1
DURCHFUEHRUNG
107
13.2
ERGEBNIS
108
14
ZUSAMMENFASSUNG
UND
DISKUSSION
_
110
III
INHALTSVERZEICHNIS
LLL
A
NHANG
15
MATERIAL
UND
METHODEN
117
15.1
MATERIAL
119
15.1.1
DNA-ARBEITSLOESUNGEN
(DNA-POOL)
119
15.1.2
CHEMIKALIEN
121
15.1.3
PUFFER
UND
LOESUNGEN
122
15.1.4
KITS
124
15.1.5
GERAETE
UND
HILFSMITTEL
124
15.2
METHODEN
124
15.2.1
DNA-ISOLIERUNG
(NACH
BOEHRINGER
G
MB
H)
125
15.2.2
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
126
15.2.3
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
MIT
SILBERFAERBUNG
126
15.2.4
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
128
15.2.5
MARKIERUNGSEFFIZIENZ
DOT
BLOT
(NACH
BOEHRINGER:
DIG
NUCLEIC
ACID
D
ETECTION
K
IT
)
129
15.2.6
DOT
BLOT
130
15.2.7
SOUTHERN
BLOT
MIT
HYBRIDISIERUNG
131
15.2.8
DOT
BLOT
IM
ASSAY
FORMAT
132
16
LITERATUR
134
17
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
18
TABELLENVERZEICHNIS
147
150
IV |
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